Affiniteitsmetingsplatform
Gebaseer op Octet- en Biacore-T2000-platforms, kan Alpha Lifetech betroubare affiniteitsbepalingsdienste lewer.
KONTAK ONS01
Affiniteitsmetingsplatform
Gebaseer op Octet en Biacore-T2000 platform, kan Alpha Lifetech betroubare affiniteitsbepalingsdienste lewer. Ons kan affiniteitsbepaling vir verskeie monsters verskaf, soos teenliggaampies, selle, proteïene, klein molekules, ens. Daar is verskeie affiniteitsbepalingsmetodes, insluitend oppervlakplasmonresonansie (SPR) en biolaaginterferensie (BLI) affiniteitsbepaling.
Alpha Lifetech het 'n professionele en akkurate affiniteitsbepalingsplatform wat ELISA met affiniteitsbepaling kombineer, wat professionele, doeltreffende, vinnige en presiese affiniteitsbepalingsresultate vir wêreldwye kliënte bied. Ons bied twee metodes vir kliënte om van te kies: Vinnige Affiniteitsbepaling en Presiese Affiniteitsbepaling. Vinnige affiniteitsbepaling is 'n enkelkonsentrasiebepaling, terwyl presiese affiniteitsbepaling die affiniteit van verskillende konsentrasies kan meet. Dit word toegepas op die studie van interaksies tussen verskeie kleinmolekuleverbindings, peptiede, proteïene, oligonukleotiede en oligomere, sowel as lipiede, bakteriofage, virusse en selle. Die affiniteitsmetingsplatform kan 'n grondslag lê vir affiniteitsdwelmtoetsing en -sifting, teenliggaamontdekking en daaropvolgende navorsing fasiliteer.
Inleiding tot Bindingsaffiniteit
Affiniteit is belangrik in die evaluering van intermolekulêre interaksies, affiniteitsdwelmtoetse en geneesmiddelsifting. Intermolekulêre interaksies kan beskryf word deur vergelykings: L + R = LR, waar L vry ligande verteenwoordig, R ongebonde reseptore verteenwoordig, en LR gebonde ligand-reseptor komplekse verteenwoordig. Bindingsreaksies definieer intermolekulêre interaksies, waar dinamiese uitruiling tussen gebonde en ongebonde toestande plaasvind tydens die reaksie totdat ewewig bereik word. Dit kan beskryf word deur die twee tempokonstantes, Kon (bindingstempokonstante) en Koff (dissosiasietempokonstante), van die reaksie. Die Kd-waarde, wat die omgekeerde van die bindingskonstante (Ka) is, is Koff/Kon, 'n belangrike konstante vir reaksieaffiniteit. Daarom, hoe sterker die binding tussen twee molekules, hoe hoër die affiniteit. Hoe kleiner die Kd-waarde, hoe andersom. Hierdie vergelyking kan voorgestel word as 'n S-vormige kurwe op 'n semi-logaritmiese grafiek, met ligandkonsentrasie op die x-as (op die logaritmiese skaalas) en fraksionele grens op die y-as. Die stippellyn verteenwoordig die ligandkonsentrasie by 'n Kd (1 nM) van 0.5 bindingsfraksie.
Fig 1: Sigmoïdale bindingskurwe van wisselende konsentrasies ligand gebind aan seloppervlakreseptor. (Verwysingsbron: Hunter SA, Cochran JR. Selbindingstoetse vir die bepaling van die affiniteit van proteïen-proteïeninteraksies: tegnologieë en oorwegings.)
Metodes vir die bepaling van affiniteit
ELISA bindingsaffiniteitstoets
Die wydgebruikte tegniek vir die bestudering van teenliggaam-affiniteit is gebaseer op die ELISA-metode, wat gekenmerk word deur sy gerief, spoed, eenvoud, hoë sensitiwiteit en sterk spesifisiteit. Dit kan 'n klein hoeveelheid reagense (d.w.s. teenliggaampies en antigene) gebruik en teenliggaam-affiniteit meet sonder die behoefte aan suiweringsreagense. Deur die antigeen op 'n soliede oppervlak te immobiliseer en dit met behulp van 'n primêre teenliggaam op te spoor, reageer die gemerkte sekondêre teenliggaam met die primêre teenliggaam om die data in 'n ensiemgekoppelde immunosorbent-assay (ELISA)-leser te lees en te analiseer.
Fig 2: ELISA-agtige toetse om die binding van die ontwerpte peptiede aan hul teikens te evalueer. (Verwysingsbron: Hajikarimlou, Maryam, et al., 2022. 'n Berekeningsbenadering om vinnig peptiede te ontwerp wat SARS-CoV-2 oppervlakproteïen S opspoor.)
Oppervlakplasmonresonansie (SPR) bindingsaffiniteitstoets
SPR-tegnologie bespeur hoofsaaklik veranderinge in die brekingsindeks. Met behulp van tradisionele optiese verskynsels en die resonansieverskynsel van lig, kan 'n biosensing-analisetegnologie vir die interaksie tussen biomolekules gebou word om die interaksie tussen ligande en analiete op biosensing-skyfies op te spoor. Spesifieke seine van binding en interaksie tussen biomolekules kan verkry word deur die dinamiese veranderinge in SPR-hoeke tydens biologiese reaksies te monitor.
Fig 3: Oppervlakplasmonresonansie (SPR) analise van H10/AGR2-binding. (Verwysingsbron: Garri, Carolina, et al., 2018. Identifikasie, karakterisering en toepassing van 'n nuwe peptied teen anterior gradiënthomoloog 2 (AGR2).)
Biolaaginterferensie (BLI) bindingsaffiniteitstoets
Biofilm-interferensietegnologie is 'n etiketvrye, intydse moniterings-optiese opsporingstegniek wat hoofsaaklik gebruik word vir omvattende kwantitatiewe analise van intermolekulêre interaksies en proteïenkonsentrasiebepaling. Hierdie tegnologie gebruik 'n sonde-gebaseerde biosensor om veranderinge in die dikte van die biofilm op die monster direk op te spoor. Deur die verplasingsveranderinge van die interferensiespektrum op te spoor, word die binding en dissosiasie tussen biomolekules wat op die sensoroppervlak interaksie het, opgespoor, en die intydse verplasing (nm) van die interferensiespektrum word vertoon.
Fig 4: Biolaag-interferometrie (BLI)-toets tussen aLDRG en chitinoligosakkariede. (Verwysingsbron: Li, Bing, 2023. Kenmerke van Vergelykende Transkriptome tussen Risomorfe en Hifes van Armillaria sp. 541 wat Deelneem aan Fungale Simbiose met Klem op LysM Domeine.)
Vergelyking van BLI- en SPR-tegnologie
| Tegnologie Naam | BLI (Biolaag-interferometrie) | SPR (Oppervlakplasmonresonansie) |
|---|---|---|
| Beginsel | Meet veranderinge in die interferensiepatroon van gereflekteerde lig op die sensoroppervlak, en bespeur molekulêre interaksies via veranderinge in optiese dikte op die biolaag. Dit verskaf 'n intydse bindingskurwe (direkte meting). | Meet molekulêre interaksies deur seinveranderinge in die brekingsindeks naby die sensorskyfie se oppervlak op te spoor (vind plaas wanneer lig met die goud- en glas-koppelvlak in wisselwerking tree, wat veranderinge in die brekingsindeks veroorsaak). Data word as veranderinge in die resonansiehoek weerspieël (indirekte meting). |
| Vervaardiger | Sartorius | GE |
| Instrument | ForteBio Biosensors | Oop SPR-instrument |
| Stelsel | ForteBio Octet-stelsel (vir molekulêre interaksie-analise) | TraceDrawer (ontwikkel deur Ridgeview Instruments, Swede) |
| Voordele | 1. Breë monsterversoenbaarheid, uitstekende stabiliteit, veral vir die opsporing van klein molekules (spesifieke vereistes vir monstersuiwerheid en buffertoestande is minder streng). SSA-skyfies is koste-effektief vir bindingsstudies. 2. Vinniger deurset en korter eksperimentele tye in vergelyking met SPR. | 1. Langer ontwikkelingsgeskiedenis, wat hoër sensitiwiteit bied in vergelyking met BLI. 2. Groter presisie en robuustheid vir spesifieke toepassings, soos die opsporing van seldsame of waardevolle proteïene met hoër affiniteits- en spesifisiteitsdata. |
| Nadele | 1. Data-akkuraatheid effens laer in vergelyking met SPR. 2. Vereis noukeurige onderhoud van die instrument. 3. Die koste van SSA-skyfies is relatief hoog. | 1. Buffertoestande vir die opsporing van baie klein molekules kan veeleisend wees, wat die risiko van opsporingsmislukking verhoog. 2. Skyfies is oor die algemeen duurder as dié wat in BLI gebruik word. 3. Monsterverdamping tydens langdurige eksperimente kan 'n probleem wees. |
| Skyfietipe | SSA-skyfie | NTA-skyfie |
Omvang van Affiniteitsmeting
Affiniteitsbepaling kan antigeen-teenliggaam (sterk antigeen-teenliggaam, swak antigeen-teenliggaam), proteïen-proteïen, proteïen-peptied, proteïen-klein molekule, en proteïen-DNS/RNA (aptameer) insluit. Wanneer KD gemeet word, is dit nodig om een van die molêre konsentrasies te ken. Wanneer klein molekules bind, kan een molekulêre gewig nie minder as 150 dalton wees nie.
| Tipe | Omvang | Voorsorgmaatreëls |
|---|---|---|
| 1. Antigeen-Teenliggaam | 10^-6 tot 10^-12 | Die Kd-waardes van die meeste teenliggaampies is in die reeks van 10^-6-10^-7 tot 10^-9. Daar word algemeen geglo dat teenliggaampies met hoë affiniteit binne 10^-9 is, terwyl teenliggaampies met hoë affiniteit binne 10^-12 is. |
| 2. Proteïen - Klein Molekules | 10^-4 tot 10^-5 | Die KD van klein molekules en proteïene is tussen 10^-4 en 10^-5, terwyl 10^-3 en 10^-7 normaal is en nie 10^-10 kan bereik nie. Kovalente klein molekules kan 10^-10 bereik. |
| 3. Avidin-Biotien | 10^-14 | Affiniteit kan maklik nie-spesifieke binding ondergaan, en streptavidien of gedeglikosileerde affiniteit kan gebruik word. |
| 4. DNS-proteïen | 10^-8 tot 10^-10 | Hoë kwaliteit en volledige DNS; wees versigtig om die invloed van elektroforese te voorkom. |
Monstervereistes vir affiniteitsbepaling
| Voorbeeld | Vereistes |
|---|---|
| 1. Groot Molekule Monster | Proteïen > 50 µg, teenliggaam > 100 µg, gebiotinileerde proteïen > 200 µg; proteïen sonder biotien > 2 mg, suiwerheidsvereiste > 90%, bufferoplossing: PBS, HEPBS. Kan nie imidasoolgroepe bevat nie; kwaliteitsbeheer is nodig. |
| 2. Klein Molekule Monster | Hoeveelheid > 1 mg, poeier of vloeistof, vloeistof moet oplosbaar wees in water of DMSO. Probeer om nie gliserol, imidasool, trehalose of ander soute te bevat nie; probeer om reagense met aminogroepe soos Tris in die buffer te vermy, gewoonlik PBS, HEPPS, ens. sonder organiese reagense. |
Meervoudige monsteranalise
Alpha Lifetech kan affiniteitstoetse vir verskeie monsters verskaf, insluitend teenliggaampies, selle, proteïene en ander biomolekules.
Volwasse tegnologieplatform
Ons het gevorderde tegnologieë soos spr-bindingstoets, bli-bindingstoets en elisa-bindingstoets.
Buigsame projekkeuse
Kliënte kan kies tussen vinnige affiniteitsbepaling en presiese affiniteitsbepaling.
Hoë-presisie resultate
Ons professionele tegniese span kan doeltreffende, akkurate en betroubare affiniteitsbepalingsresultate verseker.
GevallestudieGEVAL
BLI vinnige affiniteitstoets teenliggaam en aptamer affiniteitstoets
Vang gebiotinileerde aptamere met SA-probe-spesifisiteit vas en los hulle op. Los die monster op en verdun dit tot 'n vaste konsentrasie, laat die probe-spesifieke vasgelegde Teiken 1-5 aptamere stol, en na seinversadiging, bind aan die monster. Voeg hulle dan by 'n 96-putplaat.
Fig 5: Verspreiding van deteksieposisies vir 96-putplaatmonsters. B verwys na die buffer wat gebruik word vir die balansering en dissosiasie van sensors. L: Biotien Teiken 1-5 aptamere, 221: Monster.
Gee aandag aan boorwerk om die stabiliteit en akkuraatheid van die data te verseker, en stel die ooreenstemmende program in om die resultate te verkry:
Fig 6: Interaksie-passingsdiagram tussen Teiken 1, 2 en 3 aptamere en monsters. (CH1 \3 \5 verteenwoordig die sein en data van die interaksie tussen die gestolde Teiken 1 \2 \3 aptamere-sonde en die monster.)
Fig 7: Interaksie-passingsdiagram tussen Teiken 4 en 5 aptamere en monsters. (CH 1 \ 3 verteenwoordig die sein en data van die interaksie tussen die gestolde Teiken 4 \ 5 aptameer-sonde en die monster.)
resultate wys
Die volgende resultate is verkry: Die affiniteit van die Target 1-adapter tot die monster na passing was 9.41 ^ -8; die affiniteit van die Target 2-adapter tot die monster na passing is 8.32 ^ -8; die affiniteit van die Target 3-adapter tot die monster na passing is 8.64 ^ -8; die affiniteit van die Target 4-adapter tot die monster na passing is 3.70 ^ -8; die affiniteit van die Target 5-adapter tot die monster na passing is 3.01 ^ -8.
Indien u enige vrae het, kontak ons gerus enige tyd.
Leave Your Message
2018-07-16 
0102