Diere-immuniseringsplatform

Alpha Lifetech se dierlike bronne is duidelik, met inspeksie- en kwarantynpermitte, duidelike genetiese agtergronde, duidelike immuniseringsfrekwensie en gedetailleerde rekords van immuniseringsintervalle, wat gerieflike dienste vir teenliggaamproduksie bied. Dit immuniseer hoofsaaklik Camelidae-diere (Alpaca Liama en Kamele), wat die grondslag lê vir nanobody-produksie. Daarbenewens kan dit ook gewone diere (soos Nieu-Seelandse wit konyne, muise en ander diere) immuniseer volgens die vereiste immuniseringsfrekwensie en immunogenisiteitsvereistes van kliënte, dit ekstraheer en isoleer in PBMC's, en dit gebruik vir daaropvolgende eksperimente (soos monoklonale teenliggaam, poliklonale teenliggaamontwikkeling, ens.). Kliënte kan hul eie immunogene verskaf, en ons sal streng kwaliteitsbeheer daarop uitvoer. As kliënte virale immunogene verskaf, moet hulle geïnaktiveer word en ons sal inaktiveringstoetse uitvoer om veiligheid te verseker. Terselfdertyd kan ons ook ooreenstemmende immunogene volgens kliëntbehoeftes aanpas.

Inleiding tot Diere-immunisering

Wanneer dierlike teenliggaampies soos monoklonale teenliggaampies, poliklonale teenliggaampies en nanobodies geproduseer word, is die eerste stap om die diere te immuniseer en ooreenstemmende B-selle, teenliggaampies of PBMC's te verkry om voor te berei vir verdere teenliggaamproduksie, basiese wetenskaplike navorsing te bevorder, kliniese diagnostiese instrumente te ontwikkel en die ontdekking en ontwikkeling van nuwe middels te fasiliteer. Kamele, alpakkas, Liama en ander kamele in Camelidae kan nanobody (enkeldomein-teenliggaam) biblioteke produseer deur immuunbloedversameling en ekstraksie van PBMC's. Konyne en ander diere kan geïmmuniseer word en teenliggaampies kan uit hul liggame onttrek word. Na suiwering kan hulle gebruik word om poliklonale teenliggaampies te produseer. Muise, rotte, ens. kan gebruik word om monoklonale teenliggaampies te produseer deur immuun-onttrekte B-selle met myeloomselle te versmelt. Voor immunisering moet aandag gegee word aan die 3R-beginsels (vervanging, reduksie, verfyning), wat die aantal diere wat gebruik word, aansienlik tot die nodige minimum kan verminder, eksperimentele prosedures kan verbeter en dierlike lyding kan verminder. Behoorlike eksperimentele ontwerp, seleksie van toepaslike teenliggaampies en streng valideringsprosedures moet ook gevolg word.

Klassifikasie van immunogene - nanoliggaamproduksie

Tipes Immunogene	Voorbeeld	Immunogeenvoorbereiding	Notas
Proteïenimmunogene	Ensieme, proteïene, bakteriese toksiene en ander stowwe	Kies verskillende proteïen-ekspressiestelsels: E. coli, gis, insek-selle, soogdierselle en selvrye stelsel	Gee aandag aan faktore soos temperatuur, tyd, pH en insluitingsliggame wat proteïenuitdrukking beïnvloed
Nukleïensuur-immunogene	DNS, RNS	DNA-immunogeen: Konstrueer plasmied-DNA, kloon geskikte ekspressievektore vir teikengene, kweek selle om plasmied-DNA te amplifiseer, en ekstraheer hoë-suiwerheid plasmied-DNA RNA-immunogeen: Moet hoedstruktuur en PolyA-stert byvoeg om degradasie te voorkom	Wanneer DNA-immunogene voorberei word, moet aandag gegee word aan die toepaslike gasheerselle, en wanneer RNA-immunogene voorberei word, moet aandag gegee word aan die voorkoming van RNA-afbraak.
Virale Immunogene	Geïnaktiveerde entstof met heelvirus, subeenheid-entstof, virale vektor-entstof (adenovirus, lentivirus, ens.), mRAN-entstof.	Wanneer 'n entstof wat deur 'n hele virus geïnaktiveer is, voorberei word, word die virus eers geïnaktiveer om veiligheid te verhoog. Toksisiteitstoetsing word gebruik om te bepaal of die inaktivering volledig is. Subeenheid-entstowwe benodig slegs virusoppervlakproteïene as antigene en moet immuundoeltreffendheid in ag neem.	Adjuvante moet bygevoeg word om immuuneffekte te verskaf, aandag moet gegee word aan die virus wat geïnaktiveer moet word, toepaslike virustiters is nodig om immuuneffekte te verseker, en die veiligheid van die voorbereidingsproses moet streng beheer word.

Diere-immuniseringsproses of tydlyn

Diere Seleksie En Antigeen Voorbereiding

Dierekeuse: Kies alpakkas van die regte ouderdom en gesonde liggaamsbou uit gesonde groepe, en doen bloedondersoeke en siektetoetse om te verseker dat daar geen aansteeklike siektes of ander gesondheidsprobleme is nie.

Immunogeenvoorbereiding: Immunogene is die sleutel tot die induksie van immuunresponse en vereis die seleksie van toepaslike proteïene, peptiede of ander geskikte stowwe gebaseer op die vereistes van die teiken-teenliggaam.

'n Alpakka kan gelyktydig met 1-3 antigene geïmmuniseer word, met 'n totale antigeenhoeveelheid van 1-2 mg per immunisasie en 'n volume van minder as 2 ml. Voor immunisasie word die antigeen en adjuvant in 'n 1:1-verhouding geëmulgeer om 'n eenvormige mengsel te vorm, wat by 4 ℃ gestoor word.

Immunologiese alpakka

Teken die leë alpakka-oornommer aan en begin die immuniseringseksperiment. Spuit in die limfkliere naby die nek van die alpakka aan beide kante, met 2 punte aan elke kant en ongeveer 0.4 ml geëmulgeerde antigeen word by elke punt ingespuit. Na immunisering, observeer vir 'n halfuur om te bevestig dat die alpakka geen ongemaksimptome toon nie. Immunisering moet elke 2 weke toegedien word, met ten minste 4 immunisasies.

Bloedversameling

Na 4 immunisasies vir 5-7 dae, versamel 50 ml bloed uit die nekaar van die alpakka.

Serumskeiding

Bloedmonsters word versamel vir immuun-evaluering voor elke antigeen-immunisering, met 5 ml bloed wat elke keer geneem word; Op dieselfde dag is die bloed vir 30 minute teen 400 xg gesentrifugeer met behulp van 'n voorafverkoelde 25 ℃ sentrifuge. Die boonste laag serum is geskei en gestoor vir daaropvolgende teenliggaam-titertoetsing.

Afsonderlike limfosiete

Voeg eers 15 ml selskeidingsoplossing by, voeg dan stadig 15 ml bloed by 'n 50 ml sentrifugebuis. Wees versigtig en stadig wanneer bloed bygevoeg word om vermenging van bloed en skeidingsoplossing te voorkom. Sentrifugeer vooraf by 25 ℃, sentrifugeer by 400 xg vir 30 minute, en bêre die boonste serum in 'n nuwe sentrifugebuis by -80 ℃; Gebruik 'n pipet om die middelste katoenvormige boonste laag immuunselle in 'n nuwe 50 ml sentrifugebuis te aspireer. Voeg 10 ml PBS-buffer by kamertemperatuur by elke buis, sentrifugeer by 25 ℃ en 400 xg vir 20 minute. Verwyder die supernatant, voeg 5 ml PBS-buffer by kamertemperatuur by elke buis, meng liggies goed, bereken die aantal selle met behulp van 'n hemositometer, en sentrifugeer dan by 25 ℃ en 400 xg vir 20 minute. Verwyder die supernatant en los die limfosiete wat deur RNAiso Plus verkry is, op gebaseer op die aantal selle om 10 ^ 7/mL selisaat te verkry, wat by -80 ℃ gestoor word.

Fig 1: Skematiese voorstelling van verskillende teenliggaamontdekkingsstrategieë en die eksperimentele stadiums wat betrokke is. (Figuurbron: Laustsen, Andreas H. et al.)

Kliënte bied immunogene-streng gehaltebeheer

Tipes Immunogene	Vereiste	Gehaltebeheermetode
Peptied- / Kleinmolekulemonsters	Oplossingskondisies (hoofsaaklik afhangende van of hulle fage sal inaktiveer), molekulêre struktuur/peptiedvolgorde, sinteseverslag (HPLC/MS/HNMR)	HPLC/MS-opsporing
Proteïenmonsters	SDS-PAGE/WB, rekonstitutietoestande, buffer, etiketinligting, totale hoeveelheid (20-50 µg), konsentrasie, suiwerheid, ens.	SDS-BLADSY/WB
Selmonsters	Seltipe (primêre selle/geengeredigeerde selle), selvorm (vars/bevrore ontdooi), groeitipe (adhesie/gesuspendeer), kultuurmediumvereistes, aantal selle voorsien, aantal selle voorsien, geengeredigeerde selle om stabiele uitdrukking van siftingsteikens te verseker (kliënt-ooreenstemmende primêre teenliggaam), bevrore ontdooide selle om herwinningstempo te bepaal	Hoofsaaklik gemik op geen-geredigeerde selle, deur gebruik te maak van primêre teenliggaampies wat deur die kliënt verskaf word vir ELISA-identifikasie van teikenuitdrukking (ons maatskappy verskaf HRP sekondêre teenliggaampies), vloeisitometrie-opsporing (ons maatskappy kan fluorescerende sekondêre teenliggaampies verskaf).

Wat is die toepassings van dierlike immuniteit?

+

Poliklonale teenliggaampies kan geproduseer word deur immunisering van diere, monoklonale teenliggaampies kan geproduseer word deur B-selle met myeloomselle te versmelt, en PBMC's kan uit kameelbronne (alpakka, kameel, alpakka, ens.) onttrek word om verskeie teenliggaamfragmentvorme soos nanobodies, Fab-fragmente, scFv-teenliggaamfragmente, ens. te produseer.
Wat is die voorsorgmaatreëls vir diere-immuniteit?

+

Om nano-antiliggame vir kameel-afgeleide diere te produseer, is 5-6 immunisasies nodig. Bloedmonsters moet as 'n kontrole voor immunisasie versamel word, met 'n interval van 2 weke tussen elke immunisasie. Na die vierde immunisasie moet positiewe bloed en nie-geïmmuniseerde negatiewe bloed vir ELISA versamel word om die titer te bepaal. Indien die titer onder 10 ^ 6 is, moet die aantal immunisasies verhoog word totdat die titer 'n gepaste vlak bereik. Vir ander diere-immuniserings soos konynimmunisering (die optimale of algemene proteïenantigeenvlak vir konynimmunisering is 50-1000 µg), muisimmunisering (die optimale of algemene proteïenantigeenvlak vir muisimmunisering is 5-50 µg, wat 10^6 selle benodig as dit 'n sel is, en 10-50 µg vir nukleïensuur of koolhidrate), bokimmunisering (die optimale of algemene proteïenantigeenvlak vir bokimmunisering is 250-5000 µg), ens., moet aandag gegee word aan die dosis, veiligheid en doeltreffendheid van immunogene.
Hoe om immuundiere te kies?

+

Afhangende van die tipe teenliggaam wat deur die kliënt benodig word, as u nanobodies of ander teenliggaamfragmente moet produseer, kan u kameel-afgeleide diere (kamele, alpakkas, alpakkas) vir immunisering kies. As u monoklonale of poliklonale teenliggaampies moet produseer, moet u die ooreenstemmende spesie kies gebaseer op die hoeveelheid serum, antigeen en antigeenbron. Die maksimum serumhoeveelheid vir konyne is 500 ml, wat 'n lae hoeveelheid antigeen benodig en die primêre keuse is vir die vervaardiging van poliklonale teenliggaampies. Die maksimum serumhoeveelheid vir muise is 2 ml, en die maksimum serumhoeveelheid vir rotte is 20 ml, wat gewoonlik die optimale keuse vir monoklonale teenliggaampies is. Bok-geproduseerde teenliggaampies het 'n hoë affiniteit, en Alpha Lifetech kan 'n eksklusiewe immuniseringsplan vir u aanpas volgens u vereistes.
Moet antigene saam met bymiddels gebruik word? Hoe om te kies?

+

Daar is twee tipes adjuvante: olie-gebaseerd en water-gebaseerd. Redelike gebruik van adjuvante is van kritieke belang om sterk teenliggaamreaksies op oplosbare antigene te veroorsaak. Die volgehoue vrystelling van adjuvante beteken dat minder dosisse antigene gebruik kan word, en teenliggaamreaksies is meer langdurig. Die eerste inspuiting moet in kombinasie met 'n adjuvant gebruik word. Dit word oor die algemeen aanbeveel om Freund se adjuvant te gebruik wanneer die hoeveelheid immunogeen klein is.
Voorsorgmaatreëls vir die immunisering van alpakka?

+

(1) Die keuse van alpakka en die antigeen van immuniteit is die sleutel tot suksesvolle immunisering. Dit is nie raadsaam om 'n goed geproportioneerde kameel te kies nie. Die suiwerheid en korrekte konformasie van immuunantigene is van kritieke belang vir die sifting van geskikte teenliggaampies vir daaropvolgende toepassings na immunisering met alpakkas. Die suiwerheid van proteïenantigene is oor die algemeen nie minder as 90% nie.

(2) Skeiding van limfosiete: Tydige selskeiding kan hemolise na bloedversameling effektief voorkom om die beste skeidingseffek te verkry.

(3) Die immuunsiklus kan die immuunrespons beïnvloed: 'n immuuninterval van 1-2 weke laat alpakkas toe om 'n goeie immuunrespons teen die meeste antigene te hê.

onafhanklik ontwikkelde adjuvant

Ons unieke formule-adjuvant is geoptimaliseer vir die immuunstelsel van alpakka, wat hoër sterkte en spesifisiteit bied as tradisionele adjuvante.

Immuniseringsaflewering
standaard

Ons belowe om immunisering binne die gespesifiseerde tyd te voltooi, hoë titer serum te verskaf en elke stap deur middel van gedetailleerde verslae aan te teken.

projek Kwaliteitsbeheer

Elke projek ondergaan streng gehaltebeheerprosesse om die lewering van teenliggaampies wat aan hoë standaarde aan kliënte voldoen, te verseker.

duidelikAlpakkaAgtergrond

Ons het 'n gesonde alpakkabevolking wat ondersteuning bied vir verskeie immuniseringsprogramme.

Indien u enige vrae het, kontak ons gerus enige tyd.

Leave Your Message

Aanbevole Diens

0102