Teenliggaam-affiniteitsmaturasiediens

Alpha Lifetech Inc.kan die teenliggaam-affiniteitsmaturasiediens aanbied deur mutasie- en seleksietegnologieë te gebruik. Ons gebruik gewoonlik scFv as die teenliggaamformaat in die prosesse van affiniteitsmaturasiediens en 'n monovalente vertoonfagemiedstelsel wat gebruik is om die aviditeitseffekte tydens antigeenbindingsifting te verminder. Ons professionele span kan ook affiniteitsmaturasiedienste vir enkeldomein-teenliggaampies verskaf.

Alpha Lifetech Inc.is trots om omvattende dienste te bied om aan die uiteenlopende behoeftes van globale kliënte te voldoen. Ons doel is om die eise van verskillende kliënte te verstaan ​​en te bevredig en om te help met enige opkomende en ontluikende probleme in navorsingswerk.

Wat is Affiniteitsvolwassenheid?

Affiniteitsryping is die proses waardeur teenliggaampies herhaalde mutasies en seleksie ondergaan om hul affiniteit vir spesifieke antigene te verbeter. B-selle, wat hoofsaaklik in die kiemsentrum van sekondêre limfoïede organe voorkom, ondergaan somatiese hipermutasie en seleksie onder die invloed van T-selle en follikulêre dendritiese selle.
Tydens die affiniteitsmaturasieproses word B-selle met lae-affiniteit oppervlak-immunoglobulienreseptore geaktiveer deur antigeenkontak en ondergaan proliferasie en differensiasie. Deur somatiese hipermutasie-affiniteitsmaturasie vind ewekansige nukleotiedsubstitusies plaas in die veranderlike gebied van immunoglobuliengene, wat lei tot die produksie van verskeie teenliggaamvariante. Na somatiese hipermutasie word antigeen-gedrewe seleksie uitgevoer op B-selle met gemuteerde immunoglobulienreseptore. B-selle wat teenliggaampies met verhoogde antigeen-affiniteit produseer, word verkieslik behou en toegelaat om te prolifereer, terwyl B-selle met verminderde of onveranderde affiniteit apoptose ondergaan. Hierdie iteratiewe proses van mutasie en seleksie lei tot die produksie van B-selklone, wat teenliggaampies met geleidelik hoër affiniteit vir die antigeen produseer.

Teenliggaam-affiniteitsmaturasiediens

Die hoofvoordele van PCR-gebaseerde metodes is dat mutasies presies op die geamplifiseerde fragment gerig is; die foutkoers is maklik om te beheer en die metode is vinnig en maklik om op te stel en gebruik nie gevaarlike chemikalieë nie. Dit is welbekend dat die Taq DNA-polimerase DNA met lae getrouheid dupliseer, hoofsaaklik as gevolg van die afwesigheid van 3' tot 5' proefleesaktiwiteit.Alpha Lifetech seDie teenliggaam-ingenieursplatform pas 'n foutgeneigde PCR-benadering toe om hoofsaaklik CDR-streke te muteer tydens subbiblioteekkonstruksie. En dikwels skep ons mutasies op heeltemal ewekansige posisies oor die hele VH- en VL-fragmente, om die genetiese diversiteit van die subbiblioteek te verhoog. Na die konstruksie van 'n gemuteerde teenliggaam-geenbiblioteek deur foutgeneigde PCR, word die seleksie van hoë-affiniteitsvariante (affiniteit van die scFv-teenliggaampies kan 10^8 - 10^10 M bereik) uitgevoer deur panning in oplossing of op geïmmobiliseerde antigeen met wastoestande wat geoptimaliseer is vir af-tempo-afhanklike seleksie.
  
Wetenskaplikes inAlpha Lifetech Inc.Gebruik Escherichia coli-mutatorstamme mutAD5TM as een van verskeie mutasiestrategieë om ewekansige mutasies in te voer, en sodoende die affiniteit en uitdrukking van rekombinante teenliggaamfragmente te verander. Seleksietoestande kan gewysig word vir teenliggaamfragmente met verhoogde produksievlakke. Groeitoestande in Escherichia coli-mutatorselle kan aangepas word om 'n enkele ewekansige puntmutasie per kilobase DNA in te voer, amper gelykstaande aan een kodonverandering per scFv-fragment. Na verskeie siklusse van mutasie, vertoon en seleksie, kan ons die affiniteitskonstante van 10^5 - 10^6 M tot 10^8 - 10^10 M verbeter.

Verbeter Affiniteitsvolwassenheidsstrategieë

Sekere posisies van teenliggaampies kan gerandomiseer word teen 'n gedefinieerde diversiteit (soos volledige randomisering met al 20 aminosure of bevooroordeelde randomisering met geselekteerde aminosure teen vaste persentasies) om die affiniteit te verbeter. Ons het twee strategieë om die teenliggaam-affiniteit te verbeter: eerstens word mutasies by beperkte posisies in die komplementariteitsbepalende streke (CDR's) ingebring deur middel van terreingerigte mutagenese; tweedens word mutasies in die hele V-koderende streke ingebring deur middel van ewekansige mutagenese. Deur hierdie twee metodes te gebruik, sal die gekonserveerde aminosuurvolgordes of die hele raamwerkstreek van die teenliggaam vervang word deur ander aminosure, wat, gekombineer met ons peptiedbiblioteek-skanderingstegnologieë, die affiniteit van teenliggaampies van belang tot 'n baie hoë vlak kan verhoog.

Faagvertoning-Teenliggaam-affiniteit

Sodra die scFv-mutantbiblioteek saamgestel is, is twee siftingsstrategieë beskikbaar: biopanning en vaste-antigeen sortering. In eersgenoemde word 'n subtraktiewe konsentrasie substraat gebruik om die hoë-affiniteit teenliggaam te isoleer, aangesien die lae-affiniteit mutante uitgespoel sou word, wat die hoë-aviditeit faagdeeltjies sou agterlaat. Die tweede strategie gebruik 'n gemerkte antigeen in oplossing, seleksie gebaseer op die ewewigskonstante (Kd), en seleksie gebaseer op bindingskinetika. Hierdie seleksiebenadering onderskei teenliggaamvariante met verbeterde Kd.

Indien u enige vrae het, kontak ons ​​gerus enige tyd.