Wat is Antibody Engineering?

Met die hulp van teenliggaam-ingenieurswese was dit moontlik om die molekulêre grootte, farmakokinetika, immunogenisiteit, bindingsaffiniteit, spesifisiteit en effektorfunksie van teenliggaampies te verander. Nadat teenliggaampies gesintetiseer is, maak die spesifieke binding van teenliggaampies hulle hoogs waardevol in kliniese diagnose en behandeling. Deur teenliggaamingenieurswese kan hulle aan die behoeftes van geneesmiddel- en diagnostiese vroeë ontwikkeling voldoen.

Die doel van teenliggaamingenieurswese is om hoogs spesifieke, stabiele funksies te ontwerp en te produseer wat natuurlike teenliggaampies nie kan bereik nie, wat die grondslag lê vir die produksie van terapeutiese teenliggaampies.

Alpha Lifetech, met sy uitgebreide projekondervinding in teenliggaamingenieurswese, kan pasgemaakte monoklonale en poliklonale teenliggaampiesdienste vir veelvuldige spesies verskaf, sowel as faagvertoonteenliggaampiebiblioteekkonstruksie- en siftingsdienste. Alpha Lifetech kan kliënte van gehalte biosimilêre teenliggaampies en rekombinante proteïenprodukte voorsien, sowel as ooreenstemmende dienste, om doeltreffende, hoogs spesifieke en stabiele teenliggaampies te produseer. Deur omvattende teenliggaampies, proteïenplatforms en faagvertoonstelsels te gebruik, verskaf ons dienste wat die stroomop en stroomaf van teenliggaamproduksie dek, insluitend tegniese dienste soos teenliggaamhumanisering, teenliggaamsuiwering, teenliggaamvolgordebepaling en teenliggaamvalidering.

Die baanbrekerstadium van teenliggaampie-ingenieurswese hou verband met twee tegnologieë:

--Rekombinante DNA-tegnologie

-- Hibridoma tegnologie

Die vinnige ontwikkeling van teenliggaampie-ingenieurswese hou verband met drie belangrike tegnologieë:

--Geenkloningstegnologie en polimerasekettingreaksie

--Proteïenuitdrukking: Rekombinante proteïene word geproduseer deur uitdrukkingstelsels soos gis, staafvormige virusse en plante

-- Rekenaargesteunde strukturele ontwerp

Die eerste generasie teenliggaampies is gehumaniseer vir die produksie van chimeriese teenliggaampies, waar die veranderlike gebied van muis monoklonale teenliggaampies aan die konstante gebied van menslike IgG-molekules gekoppel is. Die antigeenbindingsgebied (CDR) van die tweedegenerasie muis monoklonale teenliggaampies is in menslike IgG oorgeplant. Behalwe vir die CDR-streek, is alle ander teenliggaampies byna menslike teenliggaampies, en pogings is aangewend om die indusering van menslike anti-muis-teenliggaampies (HAMA)-reaksies te vermy wanneer muiskloon-teenliggaampies vir menslike behandeling gebruik word.

 

Om 'n faagvertoonbiblioteek te bou, is die eerste stap om die gene te verkry wat teenliggaampies kodeer, wat geïsoleer kan word uit B-selle van geïmmuniseerde diere (immuunbiblioteekkonstruksie), direk uit nie-geïmmuniseerde diere onttrek word (natuurlike biblioteekkonstruksie), of selfs in vitro saamgestel kan word met teenliggaamgeenfragmente (sintetiese biblioteekkonstruksie). Dan word die gene deur PCR geamplifiseer, in plasmiede ingevoeg en in geskikte gasheerstelsels uitgedruk (gisuitdrukking (gewoonlik Pichia pastoris), prokariotiese uitdrukking (gewoonlik E. coli), soogdierseluitdrukking, plantseluitdrukking en insekseluitdrukking wat met staafvormige virusse besmet is). Die algemeenste is die E. coli-uitdrukkingstelsel, wat 'n spesifieke enkoderende teenliggaamvolgorde op die faag integreer en een van die faagdopproteïene (pIII of pVIII) kodeer. Die geensamesmelting van, En vertoon op die oppervlak van bakteriofage. Die kern van hierdie tegnologie is om 'n faagvertoonbiblioteek te bou, wat die voordeel bo natuurlike biblioteke het deurdat dit spesifieke binding kan hê. Vervolgens word teenliggaampies met antigeen-spesifisiteit gekeur deur 'n biologiese seleksieproses, teikenantigene word vasgestel, ongebonde fage word herhaaldelik weggewas en gebonde fage word weggespoel vir verdere verryking. Na drie of meer rondes van herhaling word hoë spesifisiteit en hoë affiniteit teenliggaampies geïsoleer.

Fig 3: Teenliggaambiblioteekkonstruksie en sifting

Rekombinante DNA-tegnologie kan gebruik word om teenliggaamfragmente te genereer. Fab-teenliggaampies kan aanvanklik slegs deur maagprotease gehidroliseer word om (Fab ') 2-fragmente te produseer, wat dan deur papaïen verteer word om individuele Fab-fragmente te genereer. Die Fv-fragment bestaan ​​uit VH en VL, wat swak stabiliteit het as gevolg van die afwesigheid van disulfiedbindings. Daarom word VH en VL aanmekaar gekoppel deur 'n kort peptied van 15-20 aminosure om 'n enkelketting veranderlike fragment (scFv) teenliggaam met 'n molekulêre gewig van ongeveer 25KDa te vorm.

Die studie van teenliggaampiesstruktuur in Camelidae (Camel, LIama en Alpakka) het uitgelig dat teenliggaampies slegs swaar kettings en geen ligte kettings het nie, daarom word hulle swaarkettingteenliggaampies (hcAb) genoem. Die veranderlike domein van swaarketting-teenliggaampies word enkeldomein-teenliggaampies of nanoliggame of VHH genoem, met 'n grootte van 12-15 kDa. As monomere het hulle geen disulfiedbindings nie en is baie stabiel, met 'n baie hoë affiniteit vir antigene.

Fig 5: Swaarketting teenliggaampies en VHH/ Nanobody

Selvrye uitdrukking gebruik die uitdrukking van natuurlike of sintetiese DNA om in vitro proteïensintese te bewerkstellig, tipies deur die E. coli-uitdrukkingstelsel te gebruik. Dit produseer vinnig proteïene en vermy die metaboliese en sitotoksiese las op selle wanneer groot hoeveelhede rekombinante proteïene in vivo geproduseer word. Dit kan ook proteïene produseer wat moeilik is om te sintetiseer, soos dié wat moeilik is om na translasie te verander of membraanproteïene te sintetiseer.