Aptamer Karakterisering Analise Diens

Alpha Lifetech verskaf al jare lank aptameerverwante dienste en kan tans omvattende aptameerontwikkelingskemas soos aptameer-sintese, SELEX-sifting, hoë-deurset-volgordebepaling, en aptameer-optimering en -karakterisering verskaf. Gebaseer op die voordele van die SELEX-metode vir die sifting van aptamere, het Alpha Lifetech meer metodes vir die sifting van aptamere uitgebrei.

Inleiding tot Aptamer Karakterisering Analise

Affiniteitsverifikasie

Die geoptimaliseerde aptameer-affiniteit is geverifieer deur relevante tegnieke van die aptameer-bindingstoets. Voorbeelde sluit in Isotermiese Titrasie-kalorimetrie (ITC), Vloeisitometrie (FCM), en Oppervlakplasmonresonansie (SPR), Mikrofluidika, ens. Aptameer-affiniteit word gewoonlik uitgedruk deur die dissosiasiekonstante (KD), 'n fisiese hoeveelheid wat gebruik word om die graad van molekulêre dissosiasie in 'n omkeerbare reaksie te kwantifiseer. Hoe kleiner die KD-waarde, hoe stabieler die kompleks, dit wil sê hoe sterker die affiniteit; omgekeerd, hoe groter die KD-waarde, hoe meer onstabiel die kompleks en hoe swakker die affiniteit. Hierdie stap is die sleutel tot die identifisering van die prestasie van die aptameer, wat die aptameer-affiniteitsvolwassenheid verseker en met hoë affiniteit en selektiwiteit in praktiese toepassings aan die teikenmolekule kan bind.

Fig. 1 Proses van aptameer-affiniteitsryping. Verwysingsbron:Kinghorn AB, Fraser LA, 2017.

Funksieverifikasie

Benewens affiniteitsverifikasie, moet die funksie van die aptameer geverifieer word. Dit sluit in die verifikasie van die aptameer se stabiliteit, spesifisiteit en interaksies met ander molekules in 'n spesifieke omgewing. Die resultate van funksionele verifikasie sal die waarde van aptamere in wetenskaplike navorsing en industriële toepassings direk beïnvloed.

Spesifieke Verifikasie

Kompeterende eksperiment: Die vermoë van die aptameer om aan 'n spesifieke teiken te bind, word geëvalueer in die teenwoordigheid van ander soortgelyke teikens. As die aptameer spesifiek aan die teikenmolekule kan bind sonder inmenging van ander molekules, dui dit daarop dat dit hoë spesifisiteit het.

Kruisreaksie-eksperiment: Die aptameer word aan 'n reeks verwante of onverwante teikens gebind om te sien of dit slegs aan 'n spesifieke teiken bind, om sodoende die spesifisiteit daarvan te verifieer.

Stabiliteitsverifikasie

Nuklease-afbraak-eksperiment: Die aptamere is blootgestel aan verskillende konsentrasies nukleases en hul afbraak is waargeneem. Deur die graad van afbraak op verskillende tydspunte te vergelyk, kan die anti-nuklease-afbraakvermoë van die aptameer geëvalueer word.

Temperatuur- en tydstabiliteitseksperiment: Die aptameer is onder verskillende temperatuur- en tydtoestande geplaas om die strukturele en funksionele stabiliteit daarvan waar te neem. Dit help om optimale bergings- en gebruiksomstandighede vir aptamere te bepaal.

Identifikasie van biologiese aktiwiteit

Die toepaslike metode word gewoonlik gekies volgens die spesifieke toepassingsdoel van die nukleïensuur-aptameer.

(1) Molekulêre vlaktoetsing: Die gebruik van molekulêre biologietegnieke, soos gelelektroforese, Western blot, ens., om die komplekse wat gevorm word nadat die aptameer met die teikenmolekule gekombineer het, op te spoor, of die veranderinge in die uitdrukkingsvlak van die teikenmolekule wat deur die aptameer veroorsaak word, op te spoor.

(2) Selvlaktoetsing: Deur selkultuurtegnologie te gebruik, word aptamere met teikenselle geïnkubeer om biologiese veranderinge soos selmorfologie, proliferasie en apoptose waar te neem, en die biologiese aktiwiteit van aptamere te evalueer.

(3) Diermodeltoetsing: In gepaste diermodelle word nukleïensuur-aptamere deur inspuiting of geneesmiddeltoediening gegee, en fisiologiese aanwysers en patologiese veranderinge van diere word waargeneem om die biologiese aktiwiteit en veiligheid van die aptamere in vivo te evalueer.