Monoklonale Teenliggaamontwikkelingsdiens

Alpha Lifetech Inc.kan epitoopvoorspelling, peptiedsintese, proteïenuitdrukking, poliklonale of monoklonale teenliggaamproduksie sowel as teenliggaamsuiwering uit selkultuur, ascitesvloeistof of volledige serum verskaf.

Alpha Lifetech Inc.is ervare in die verskaffing van verskeie stabiele sellyndienste aan kliënte, insluitend hibridomaselle, genoomredigeringssellyne, knockdown-sellyne en oorekspressie-sellyne. Ons probeer om gevorderde pasgemaakte sellyndienste aan elke kliënt te bied en ons dienste is bewese en vertrou.

Teenliggaamontwikkelingstrategie

1. Antigeenontwerp en -voorbereiding
Hierdie antigene kan proteïene, peptiede of ander molekules wees. Die ontwerp van immunogene vereis 'n omvattende benadering wat kennis van antigeenstruktuur, immunologie en afleweringstelsels integreer. Alpha Lifetech het antigeenontwerptegnologie wat immunogene vir kliënte in nood kan ontwerp.
Alpha Lifetech verskaf rekombinante proteïenprodukte waaruit kliënte kan kies. Ons het 'n verskeidenheid proteïenuitdrukkingstelsels, soos E. coli-uitdrukkingstelsels, gis-uitdrukkingstelsels, baculovirus-insek-uitdrukkingstelsels, soogdier-uitdrukkingstelsels, ens., om die rekombinante proteïene te produseer wat u vir navorsing benodig.

2. Diere-immunisering
Alpha Lifetech kan immunogene aan kliënte verskaf, en immuundiere soos muise, konyne, skape, alpakkas, proefkonyne, hamsters, ens. is beskikbaar vir u om van te kies.

3. Monoklonale teenliggaamproduksiemetodes

●Mabs-produksie deur Hybridoma-tegnologie
Hibridoma is 'n hibriede sel wat geproduseer word deur die samesmelting van twee soorte selle, naamlik die muismyeloom-sellyn en plasmaselle (limfosiet B), waarin die heterosigotiese sel deurlopende teenliggaampies teen die antigeen van belang in vitro kan produseer. Die produksie van 'n hibridoma-sellyn bestaan uit drie dele: antigeenontwerp (haptene, klein molekules en peptiede), dierimmunisering, selfusie en positiewe kloonsifting. Deur gebruik te maak van unieke immuniseringsmetodologieë, verkry ons buitengewoon hoë selfusie-doeltreffendhede (1-10 hibridomas per duisend B-selle) en hoë teenliggaamtiters, wat ons sukseskoers in daaropvolgende analitiese toetse maksimeer, wat biochemiese sifting, in-vitro selgebaseerde toetse en dierstudies insluit.

●Mabs-produksie deur faagvertoningstegnologie
Faagvertoning bied nog 'n metode vir die generering van monoklonale teenliggaampies. B-limfosiete word uit dierbloed geïsoleer en hul mRNA word onttrek. Deur PCR word hierdie mRNA omgeskakel na cDNA, wat al die VH- en VL-segmente amplifiseer. Hierdie segmente word dan in 'n vektor gekloon, tipies as enkelkettingveranderlike fragmente (scFv), saam met die PIII-proteïen van 'n bakteriofaag. Vervolgens word hierdie konstruk gebruik om E. coli te infekteer, wat lei tot die skepping van 'n biblioteek wat ongeveer 10^10 selle bevat deur inokulasie met 'n helperfaag. E. coli is dan in staat om die bakteriofaag wat die VH- en VL-segmente as deel van sy laag bevat, af te skei. Hierna kan spesifieke VH- en VL-segmente wat die antigeen van belang teiken, geselekteer en gebruik word om E. coli met die bakteriofaag te herokuleer. Selle wat die plasmied bevat, word dan geïsoleer en georden.

4. Fusie-sifting

●Selfusie en seleksie
Die geoeste B-selle word dan saamgesmelt met myeloomselle, wat kankerselle is wat onbepaald in kultuur kan vermeerder. Die fusie word tipies bereik deur 'n tegniek soos poliëtileenglikol (PEG)-fusie te gebruik.
Na fusie word die hibridomaselle in 'n selektiewe medium gekweek wat slegs die hibridomas toelaat om te oorleef. Die medium bevat gewoonlik aminopterin, wat die groei van ongefuseerde myeloomselle voorkom.

●Sifting en Klonting
Die gevolglike hibridomaselle word gekeur vir die produksie van teenliggaampies spesifiek vir die teikenantigeen. Dit word tipies gedoen met behulp van tegnieke soos ensiemgekoppelde immunosorbent-toets (ELISA), Western blot, immunopresipitasie en vloeisitometrie.

Sodra hibridomaselle wat die teenliggaam produseer, geïdentifiseer is, word hulle gekloon om 'n populasie van identiese selle te genereer. Dit verseker dat die teenliggaam wat deur elke hibridomasel geproduseer word, identies is.

5. Teenliggaam Funksionele Verifikasie
Alpha Lifetech bied funksionele validering van teenliggaampies, soos Western blotting, immunohistochemie of funksionele toetse, om monoklonale teenliggaampies te karakteriseer en teenliggaampiespesifisiteit, affiniteit en funksionaliteit te bevestig.

6. Teenliggaamoptimalisering
Suiwering van teenliggaampies uit kultuursupernatant met behulp van tegnieke soos proteïen A- of proteïen G-affiniteitschromatografie, en Alpha Lifetech kan ook teenliggaammodifikasiemetodes verskaf om teenliggaamaffiniteit te verbeter.

7. Teenliggaamproduksie
Alpha Lifetech kan kandidaat-teenliggaampies evalueer vir hoë-deurset-siftingstoepassings en grootskaalse produksie.

gereelde vraegereelde vrae

Gereelde vrae oor die ontwikkeling van monoklonale teenliggaampies

1

Hoe om die regte fusiehibridoma te kies?

Tydens die fusieproses word 10-15 96-put mikrotiterplate met die fusiehibriedmengsel gesaai. Elke plaat word met HAT-IMDM-seleksiemedia gevoer en in 'n koolstofdioksied-inkubeerder by 37 grade Celsius gehou. 9 - 14 dae na die fusie word hibriede supernatante getoets vir die teenwoordigheid van die spesifieke teenliggaam van belang.
2

Hoe om seleksiedoeltreffendheid te verbeter?

Fusie van plasmaselle met hul myeloom-eweknieë is nie 100% effektief nie. Selfs onder optimale toestande en die mees effektiewe stimulasie, produseer selfusie steeds 'n mengsel van onsamevloeiende en samevloeiende selle wat geskei moet word. Om die doeltreffendheid van die seleksieproses te verbeter, het myeloomselle wat vir fusie gebruik word, nie HGPRT nie, 'n sleutelensiem in die nukleotiedherwinningsroete. Die mengsel is toe in 'n HAT-medium gekweek, waar slegs selle met die HGPRT-ensiem, hibridomas wat HGPRT van plasmaselle geërf het, lewensvatbaar was.
3

Hoe om hibridoma-sellyne vir teenliggaamaktiwiteit te sif?

Die evaluering van hibriede variëteite is 'n belangrike stap. Gewoonlik word hibridoma-, kloon- en subkloon-supernatant-sifting verskaf deur middel van ensiemgekoppelde immunosorbent-toets (ELISA), Western blot-toets en fluoresensie-geaktiveerde selsortering (FACS). Ons sal kies om alle sifting van die supernatant in ons eie laboratorium uit te voer.
4

Verskaf gedetailleerde instruksies oor hoe om teenliggaamaktiwiteitsifting uit te voer?

Hibridomasupernatante wat getoets moet word, kan wissel van 500 tot 1 440 monsters en sal gereed wees om teen dae 9-14 getoets te word. Dit kan oor 'n tydperk van drie tot vyf dae ontstaan of dit kan almal op dieselfde dag gereed wees, daarom is dit belangrik dat die kliëntlaboratorium weke vooruit voorbereid is met spesifieke sekondêre siftingstoetse van keuse.
5

Waarom moet positiewe hibridomas gesubkloneer word?

Nadat positiewe putjies tydens die aanvanklike ELISA-siftingsprosedure geïdentifiseer is, is hibridomas na 'n groter volume, d.w.s. 24-putjieplate, oorgedra ter voorbereiding vir die subkloneringsprosedure. Subklonering van hibridomas word gewoonlik uitgevoer deur 'n beperkte verdunningsmetode om die isolasie van stabiele monoklone te verseker. Die tegniek behels die verdunning van hibridomakulture en die verspreiding daarvan in 96-putjieplate om monoklonaliteit (een sel per putjie) te bereik. Ten minste twee beperkte verdunnings moet uitgevoer word om die risiko van die ontwikkeling van gemengde hibridomapopulasies te verminder.
6

Wat is die voordele van die gebruik van hibridoma-tegnologie vir die ontdekking van teenliggaampies?

Hibriede sellyne is geprys vir hul vermoë om teenliggaampies met hoë affiniteit, stabiliteit en spesifisiteit op die mees koste-effektiewe manier te produseer.