Faaguitstallingsbiblioteekkonstruksiediens

Alpha Lifetech is al jare lank diep betrokke by faagvertoontegnologie. Hulle het 'n perfekte, stabiele faagvertoontegnologieplatform gebou wat tyd bespaar vir wetenskaplike navorsing of projeknavorsing en daaropvolgende produksie vergemaklik. Alpha Lifetech kan ook kliënte dienste lewer soos vhh-teenliggaamproduksie, scFv-teenliggaamproduksie en Fab-teenliggaamproduksie.

Alpha Lifetech het 'n omvattende M13/T7-faagvertoningsplatform om die konstruksie en produksie van teenliggaambiblioteke te verseker. Ons kan ook aangepaste dienste lewer, soos teenliggaam-scFv-produksie en hoë-deurset-teenliggaamsifting, om aan u behoeftes te voldoen.

Inleiding tot Faagvertoning

Faagvertoningstegnologie is 'n tegniek wat fage (’n virus wat bakterieë infekteer) gebruik om te soek na funksionele bindingsmolekules van spesifieke proteïene of peptiede. Faag-teenliggaambiblioteekkonstruksietegnieke sluit in Fab-teenliggaambiblioteekkonstruksie, teenliggaam-scFv-biblioteekkonstruksie, nanobody-biblioteekkonstruksie, ens. Volgens die tipes bakteriofage kan hulle verdeel word in M13, T7, T4, λ en ander stelsels. Volgens die biblioteektipe kan dit verdeel word in 'n ewekansige peptiedbiblioteek, cDNA-biblioteek, teenliggaambiblioteek en proteïenbiblioteek. Faagvertoningstegnologie is eenvoudig om te bedryf en goedkoop om te gebruik. Hierdie tegniek beperk egter die diversiteit van molekulêre genetika in die biblioteek wat nie te lang rye kan uitdruk nie,

Tans word faagvertoontegnologie wyd gebruik. Onder hulle is daar beduidende prestasies in die navorsing en ontwikkeling van nuwe entstowwe (laekoste en doeltreffende sintetiese entstowwe), die ontwikkeling van teenliggaammiddels (sifting van ensieminhibeerders), selseintransduksie (sifting van gesimuleerde epitope), en die navorsing van antigeenepitope (voorbereiding van monoklonale teenliggaampies).

Inleiding tot T7 Bakteriofaag

Die T7-bakteriofaag is dubbelstrengs DNS, die lengte van die DNS is 40kb en is toegedraai in 'n kapsied met 'n deursnee van 60nm. Die verbinding tussen die kop en stert is 'n ringstruktuur wat uit veelvuldige kopieë van gp8 bestaan. Die kop en kern van die t7-bakteriofaag vorm 'n silindriese struktuur wat aan gp8 bind en die kop en stert kan verbind.

Fig. 1 Skematiese voorstelling van die T7-bakteriofaag.(Verwysing: Vooruitgang in die T7-faagvertoningstelsel (Oorsig))

Inleiding tot M13 Bakteriofaag

Die bakteriofaag M13 behoort aan 'n groep filamentagtige fage wat gesamentlik Ff-fage genoem word. Dit het 'n lengte van 900 nm en 'n breedte van 6,5 nm. Dit bevat 'n genoom van enkelstrengige DNS (ssDNS) met 'n lengte van 6407 bp wat bestaan uit nege gene wat vir 11 verskillende proteïene kodeer. Onder hulle is die vyf proteïene mantelproteïene, en die ses proteïene is betrokke by die replikasie en samestelling van die faag. Die hoogste konsentrasie mantelproteïene is die kapsiedproteïen G8P, wat uit ongeveer 2 700 proteïeneenhede bestaan en 'n omhulsel om die chromosoom vorm.

Fig. 2 Skematiese voorstelling van die bakteriofaag M13.(Verwysing: Basiese beginsels van teenliggaamfaagvertoningstegnologie)

Inleiding tot die Faagvertoning-teenliggaambiblioteek

Teenliggaamontdekking het toenemend belangrik geword in moderne medisyne. Verskillende teenliggaamontdekkingsbenaderings bestaan, maar die faagvertonings-teenliggaambiblioteek word meer in die mediese wetenskap gebruik.

Sedert 1990 word verskillende teenliggaamformate gebruik om faagbiblioteke te konstrueer, insluitend VH's, VHH's, scFvs, diabodies en Fab-teenliggaampies. Die scFv wat uit VH- en VL-strukturele domeine bestaan, is enkelketting-teenliggaampies wat gebruik word om teenliggaam-scFv-biblioteke te konstrueer. scFv word gekenmerk deur 'n kort halfleeftyd en lae immunogenisiteit. Die Fab-teenliggaambiblioteek bestaan uit VH, VL, CL en CH1, wat ideale teenliggaampies met hoë affiniteit vinnig kan uitsif. Die kleinste eenheid wat die teikenantigeen-VHH kan bind, vorm tans die nanoliggaambiblioteek, en VHH het die voordele van eenvoudige struktuur, klein volume, hoë oplosbaarheid, goeie stabiliteit en maklike voorbereiding en uitdrukking. Sintetiese nanoliggaam (Nb)-biblioteke verskyn as 'n aantreklike alternatief vir dierimmunisering vir die stabiele, hoë-affiniteit sintetiese nanoliggaam. Oor die algemeen word hierdie teenliggaamfragmente met die G3P van die M13-faag gefuseer, en deur groot getalle gene wat vir 'n teenliggaamfragment kodeer, te kloon, kan groot faagvertonings-teenliggaambiblioteke gegenereer word waaruit baie uiteenlopende teenliggaampies gekies kan word.

Proses van die Konstruksie van die Faagbiblioteek

Die proses van faagbiblioteekkonstruksie is soos volg: spesifieke primers word ontwerp vir PCR-amplifikasie wat die produkte verkry, wat ensiem-geligeer word met die T7/M13-faagvektor, en die rekombinante faagplasmied word suksesvol gekonstrueer. Die rekombinante faagplasmied is in TG1-reseptorselle getransformeer, dan bedek op 'n medium wat toepaslike antibiotika bevat, en uitgebreide kultuur is uitgevoer na sifting van die transformators. Na verskeie rondes van kultuur herhaal die faag replikasietye in die bakterieë en druk die teikenproteïen of polipeptied suksesvol uit. Dan word die faagbiblioteek gesuiwer om sommige onsuiwerhede en ongebonde fage te verwyder.

Veranderlike streke (VH en VL) het gekorreleer met teenliggaamdiversiteit, en VH en VL is in die faagvektor ingevoeg saam met 'n volgorde wat die faagproteïen PIII kodeer. Na samestelling word die faagdeeltjie blootgestel en met die N-terminaal van die klein mantelproteïen III saamgesmelt om 'n funksionele teenliggaamfragment te vorm, wat 'n biblioteek wat die teenliggaam-DNS-volgorde bevat, verkry.

Na die einde van die immunisering is die titer opgespoor, en dierebloed is geneem nadat die titer gekwalifiseer is. Limfosiete word uit die bloed geïsoleer, RNS word onttrek, RT-PCR amplifiseer die teikenfragment, en die V-streekgeenfragment word verkry. Die V-geen word met behulp van 'n spesifieke inleier geamplifiseer.

Die natuurlike biblioteke wat geskep word, sluit swak immunogeniese teenliggaampies in diere in wat enige teiken kan teiken. Faag-teenliggaampies wat spesifiek aan die antigeen bind, kan versamel word deur middel van siftingstegnieke wat die antigeen fikseer of merk.

Die teikenantigeen word aan 'n soliede draer, soos 'n mikroplaatgat, vasgemaak of aan 'n magnetiese kraal gekoppel. Die faag-antiliggaambiblioteek word dan bygevoeg om dit aan die antigeen te bind. Na veelvuldige elusies word die lae-affiniteit of nie-spesifieke fage weggespoel en dié wat spesifieke teenliggaampies vertoon, word behou.

Toepassing van Faagvertoning

*Die ontdekking van teenliggaampies het toenemend belangrik geword in moderne medisyne. Verskillende benaderings tot die ontdekking van teenliggaampies bestaan, maar faagvertoningstegnologie word meer in die mediese wetenskap gebruik. Sedert 1990 word verskillende teenliggaamformate gebruik om faagbiblioteke te konstrueer, insluitend VH's, VHH's, scFv's, diabodies en Fab-teenliggaampies.
*Faagpeptiedbiblioteke maak die vinnige bepaling van die volgorde van proteïenepitope moontlik en het 'n kragtige instrument geword om die interaksie tussen epitope en antigeenreseptore te ondersoek.
*Teenliggaamfragmente word met die G3P van die M13-faag gefuseer, en deur groot getalle gene wat vir 'n teenliggaamfragment kodeer, te kloon, kan groot faagvertonings-teenliggaambiblioteke gegenereer word waaruit baie uiteenlopende teenliggaampies gekies kan word.
*Die T7-faagvertoningstelsel het baie voordele, insluitend eenvoud, hoë veiligheid, stabiliteit, maklike berging en vervoer, daarom word die stelsel in voorkomende en terapeutiese entstowwe gebruik.
*Die T7-faagvertoningstelsel kan verskeie antigene opspoor, soos oppervlakantigene van patogene mikroörganismes en kankerantigene.

Faag