Faagvertoningsbiblioteek-siftingsdiens
Alpha Lifetech is al jare lank diep betrokke by faagvertoontegnologie. Hulle het 'n perfekte, stabiele faagvertoontegnologieplatform gebou wat tyd bespaar vir wetenskaplike navorsing of projeknavorsing en daaropvolgende produksie vergemaklik. Alpha Lifetech kan ook kliënte dienste lewer soos vhh-teenliggaamproduksie, scFv-teenliggaamproduksie en Fab-teenliggaamproduksie.
Alpha Lifetech het 'n omvattende M13/T7-faagvertoningsplatform om die konstruksie en produksie van teenliggaambiblioteke te verseker. Ons kan ook aangepaste dienste lewer, soos teenliggaam-scFv-produksie en hoë-deurset-teenliggaamsifting, om aan u behoeftes te voldoen.
Proses van die Konstruksie van die Faagvertoningsbiblioteek
Die proses van faagbiblioteekkonstruksie is soos volg: spesifieke primers word ontwerp vir PCR-amplifikasie wat die produkte verkry, wat ensiem-geligeer word met die T7/M13-faagvektor, en die rekombinante faagplasmied word suksesvol gekonstrueer. Die rekombinante faagplasmied is in TG1-reseptorselle getransformeer, dan bedek op 'n medium wat toepaslike antibiotika bevat, en uitgebreide kultuur is uitgevoer na sifting van die transformators. Na verskeie rondes van kultuur herhaal die faag replikasietye in die bakterieë en druk die teikenproteïen of polipeptied suksesvol uit. Dan word die faagbiblioteek gesuiwer om sommige onsuiwerhede en ongebonde fage te verwyder.
Faagvertoningsbiblioteek-siftingsmetodes
Die sukses van faagvertoon-teenliggaamproduksie hang hoofsaaklik af van teenliggaam-faagvertoonbiblioteke, en die algemene metodes van faagpanning is vastefase- en vloeistoffase-sifting. Vastefase-antigeensifting verryk spesifieke teenliggaampies deur 3-4 rondes eluering om teenliggaam-faagvertoonbiblioteke te verkry; Vloeistoffase-antigeensifting word uitgevoer deur biotien-gemerkte teiken- en teenliggaam-faagvertoonbiblioteke te inkubeer en gebonde fage met behulp van magnetiese krale vas te lê. Vastefase-sifting verbruik meer antigeen en sommige antigeenepitope word vernietig. Vloeistoffase-sifting word gekenmerk deur hoë doeltreffendheid en verryking, maar die teenliggaampies wat verkry word, is minder spesifiek. Die metode van faagpanning hang af van die eksperimentele behoeftes, wat alles 'n sekere impak op die effek van faagvertoon-teenliggaamproduksie sal hê.
Hoë Deurset Teenliggaam Sifting
Teenliggaamontwikkeling het vinnig ontwikkel in moderne medisyne. Verskillende teenliggaamontwikkelingsmetodes bestaan, maar hoë-deurset-teenliggaamsifting word meer in mediese wetenskap gebruik. Die proses kan 'n groot hoeveelheid teenliggaamrepertoire-diversiteit verkry. Kombinasie met tradisionele teenliggaambiblioteeksiftingsmetodes kan die siftingskwaliteit van faagvertoonbiblioteke verbeter. Na biologiese sifting kan teenliggaampies gekarakteriseer word deur lae-deurset ELISA of hoë-deurset-teenliggaamsifting.

Fig. 1 Vloeidiagram wat die volgorde van gebeure uiteensit vanaf die konstruksie van faag-antiliggaambiblioteke tot die generering van monoklonale teenliggaampies met hoë affiniteit vir antigene en lae immunogenisiteit.(Verwysingsbron: Faagvertoningstegnologie as 'n kragtige platform vir die ontdekking van teenliggaampie-geneesmiddels - PMC (nih.gov))
Voorsorgmaatreëls vir TeenliggaamfaagvertoningsiftingVoorsorgmaatreëls
Buffer-oorwegings
Die keuse van buffers moet die stabiliteit van die teiken, die bindingsmikro-omgewing en minimale nie-spesifieke binding in die werklike toepassingscenario in ag neem. Onverwante proteïene, nie-ioniese skoonmaakmiddels en fisiologiese soutkonsentrasies is bevorderlik vir die vermindering van die agtergrond. Daar is ook ander toestande, soos sommige teikens wat die byvoeging van tweewaardige katione of ander kofaktore tot die buffer mag vereis, proteïenkofaktore kan met die teiken gefikseer word, kan by die sorteerbuffer gevoeg word, en kan selfs gebruik word as 'n manier om die teiken vas te lê.
Drukoorwegings
Algemene seleksiedruk-oorwegings sluit in die konsentrasie van teikenmolekules, bindingstyd, wasintensiteit, ens. Ander tegnieke vir die verhoging van seleksiedruk sluit in die gebruik van denaturante (soos sure, ureum en guanidien), organiese oplosmiddels, verhoging van temperatuur, of verhoging van die konsentrasie van mededingende ligande of teikens in die wasbuffer.
Onder hulle is die eerste rondte sifting belangrik. Die eerste rondte sifting is om soveel positiewe klone as moontlik uit die gekonstrueerde biblioteek vas te lê terwyl nie-spesifieke klone verwyder word. Poreusbedekte teikens of 'n groot aantal oplosbare teikens moet gebruik word om te verseker dat 'n groot aantal gebonde fage vasgelê word om die diversiteit van die biblioteek te handhaaf. In daaropvolgende rondes sifting moet die seleksiedruk verhoog word met die toename van verryking, veelvuldige was en die verhoging van die wastyd, sodat klone met hoë affiniteit gekeur kan word.
Onder hulle is die eerste rondte sifting belangrik. Die eerste rondte sifting is om soveel positiewe klone as moontlik uit die gekonstrueerde biblioteek vas te lê terwyl nie-spesifieke klone verwyder word. Poreusbedekte teikens of 'n groot aantal oplosbare teikens moet gebruik word om te verseker dat 'n groot aantal gebonde fage vasgelê word om die diversiteit van die biblioteek te handhaaf. In daaropvolgende rondes sifting moet die seleksiedruk verhoog word met die toename van verryking, veelvuldige was en die verhoging van die wastyd, sodat klone met hoë affiniteit gekeur kan word.
Negatiewe Siftingstrategie
Antigeen-etikette en draermateriale. Die siftingsproses is om te sif vir alle stowwe op die antigeenkonjugate, soos etikette, fusieproteïene en ondersteunende substrate. Negatiewe sifting van nie-teikens kan die verryking van teenliggaampies anders as die teikenantigeen beperk.
Hele selle, liposome, nano-fosfolipiedskyfies en VLP's kan negatief gekeur word deur gesimuleerde getransfekteerde selle of ongetransfekteerde selle te gebruik wanneer getransfekteerde sellyne gekeur word.
Verwydering van komplekse antigeenmengsels Streng negatiewe sifting kan uitgevoer word vir onbekende of komplekse teikenmolekules, soos hele selle of onsuiwer proteïene.
Die strategie van teenliggaampies teen spesifieke plekke van antigene, een is om die teenliggaam wat met die ligand kan meeding, te elueer deur 'n hoë konsentrasie ligande by te voeg, en die ander is om die teenliggaam te blokkeer.
Hele selle, liposome, nano-fosfolipiedskyfies en VLP's kan negatief gekeur word deur gesimuleerde getransfekteerde selle of ongetransfekteerde selle te gebruik wanneer getransfekteerde sellyne gekeur word.
Verwydering van komplekse antigeenmengsels Streng negatiewe sifting kan uitgevoer word vir onbekende of komplekse teikenmolekules, soos hele selle of onsuiwer proteïene.
Die strategie van teenliggaampies teen spesifieke plekke van antigene, een is om die teenliggaam wat met die ligand kan meeding, te elueer deur 'n hoë konsentrasie ligande by te voeg, en die ander is om die teenliggaam te blokkeer.
Toepassing van Faagvertoning
*Die ontdekking van teenliggaampies het toenemend belangrik geword in moderne medisyne. Verskillende benaderings tot die ontdekking van teenliggaampies bestaan, maar faagvertoningstegnologie word meer in die mediese wetenskap gebruik. Sedert 1990 word verskillende teenliggaamformate gebruik om faagbiblioteke te konstrueer, insluitend VH's, VHH's, scFv's, diabodies en Fab-teenliggaampies.
*Faagpeptiedbiblioteke maak die vinnige bepaling van die volgorde van proteïenepitope moontlik en het 'n kragtige instrument geword om die interaksie tussen epitope en antigeenreseptore te ondersoek.
*Teenliggaamfragmente word met die G3P van die M13-faag gefuseer, en deur groot getalle gene wat vir 'n teenliggaamfragment kodeer, te kloon, kan groot faagvertonings-teenliggaambiblioteke gegenereer word waaruit baie uiteenlopende teenliggaampies gekies kan word.
*Die T7-faagvertoningstelsel het baie voordele, insluitend eenvoud, hoë veiligheid, stabiliteit, maklike berging en vervoer, daarom word die stelsel in voorkomende en terapeutiese entstowwe gebruik.
*Die T7-faagvertoningstelsel kan verskeie antigene opspoor, soos oppervlakantigene van patogene mikroörganismes en kankerantigene.
*Faagpeptiedbiblioteke maak die vinnige bepaling van die volgorde van proteïenepitope moontlik en het 'n kragtige instrument geword om die interaksie tussen epitope en antigeenreseptore te ondersoek.
*Teenliggaamfragmente word met die G3P van die M13-faag gefuseer, en deur groot getalle gene wat vir 'n teenliggaamfragment kodeer, te kloon, kan groot faagvertonings-teenliggaambiblioteke gegenereer word waaruit baie uiteenlopende teenliggaampies gekies kan word.
*Die T7-faagvertoningstelsel het baie voordele, insluitend eenvoud, hoë veiligheid, stabiliteit, maklike berging en vervoer, daarom word die stelsel in voorkomende en terapeutiese entstowwe gebruik.
*Die T7-faagvertoningstelsel kan verskeie antigene opspoor, soos oppervlakantigene van patogene mikroörganismes en kankerantigene.
Faag
01020304
0102030405
010203
If you have any questions, please feel free to contact us at any time.
Leave Your Message
0102















2018-07-16 

