Proteïen-proteïen interaksie analise diens

Alpha Lifetech kan ook kliënte voorsien van proteïentoetse, proteïeninteraksie-analise, proteïen-proteïen-interaksie-toets (CO-IP, Western Blot, Chromatin immunopresipitasie-toets), en proteïenfunksie-toets om aan die eksperimentele behoeftes van verskillende kliënte te voldoen.

KONTAK ONS

Proteïen-proteïen interaksie analise diens

Alpha Lifetech is al jare lank diep betrokke by proteïentoetse en het 'n goeie platform vir proteïenfunksietoetse gebou, en 'n verskeidenheid tegniese middele bemeester om proteïeninteraksie te verifieer, wat wetenskaplike navorsing of projeknavorsingstyd kan bespaar terwyl stabiele resultate gelewer word.

Inleiding tot Proteïen-Proteïen Interaksie Analise

Proteïene is die mees kritieke uitvoerende molekules in enige vorm van lewe wat reageer op die instruksies wat in genetiese materiaal gestoor word. Meer gereeld doen proteïene hul werk deur op te tree as rolspelers wat met ander proteïene interaksie het, wat meer duidelik is wanneer die funksie van 'n proteïen in die werklike konteks van 'n sel ondersoek word. Die identifisering van die interaksies tussen proteïene is baie belangrik vir die biochemiese ondersoek van 'n individuele proteïen. Proteïeninteraksie-analise van algemene soorte soos volg:

Ko-immunopresipitasie-toets

Die beginsel van die ko-immunopresipitasiemetode is om die teikenproteïen, spesifieke teenliggaam en proteïen A/G magnetiese krale vir inkubasie te meng, die supernatant van die ongebonde proteïen word weggegooi deur die adsorpsie van die magnetiese krale op die magnetiese rak, en die magnetiese krale word gewas om die proteïen en ander onsuiwerhede te verwyder tensy dit spesifiek gebind is.

Fig.1 Skematiese diagram van Co-IP-toetse.(Verwysingsbron: Ko-immunopresipitasie-toets - PubMed (nih.gov))

Aftrek-toets

Die aftrek-toets is om die bekende proteïen op die magnetiese kraal vas te maak en die stof wat opgespoor moet word, by te voeg. Die eluent word opgespoor vir die adsorpsie van interaktiewe proteïene.

In 1988 het Smith et al. GST-fusieproteïen gesuiwer, wat in aftrek-assays toegepas is en Gst-aftrek genoem word, dit wil sê om 'n GST-etiket by die teikenproteïen te voeg, die interaktiewe proteïen deur GSH vas te lê, die binding te elueer en dit deur WB-assays te verifieer.

Fig.2 Skematiese diagram van GST-aftrektoetse.(Verwysingsbron: GST-aftrek-toets om PIF4-binding in vitro te bestudeer - PubMed (nih.gov) )

Sy aftrek is om metaalione soos nikkel of kobalt as die medium te gebruik, die proteïen deur affiniteitschromatografie te suiwer, en die binding deur die WB-eksperiment te elueer vir verifikasie.

Daarbenewens is daar DNA Pull-down (proteïen DNA-bindingstoets), RNA Pull-down (proteïen RNA-interaksietoets) en klein molekule pull-down toetse.

DNA Pull-down (Proteïen-DNA-bindingstoets) is 'n in vitro-metode om die DNA-binding van proteïene te bepaal. Of spesifieke proteïene aan teiken-DNA bind, is deur WB-toetse opgespoor; Onbekende DNA-fragmente wat aan proteïene bind, welke DNA-fragmente deur MS-opsporing bekend is.

RNA-aftrekking (Proteïen-RNA-interaksie-toets) is 'n in vitro-metode om RNA-binding aan proteïene te bepaal. Of spesifieke proteïene aan teiken-RNA bind, is deur WB-toetse opgespoor; Onbekende RNA-fragmente wat aan proteïene bind, welke RNA-fragmente deur MS-opsporing bekend is.

SM-aftrek (kleinmolekule-aftrektoetse) kan teikenproteïene vind wat spesifiek aan klein molekules bind, en wanneer dit met MS gekombineer word, kan kleinmolekule-teikenproteïene akkuraat gekeur word, wat verdeel kan word in die in vitro-etiketteringsmetode en biologiese ortogonale metode.

WB-eksperiment

WB-eksperiment (ook bekend as Western Blot-eksperiment of Western blot), die kern is die spesifieke reaksie van antigeen en teenliggaam. Die basiese beginsel is om gedenatureerde proteïene deur SDS-poliakrielamiedgelelektroforese te skei en dit oor te dra na 'n vastefasedraer (soos PVDF-membraan, NC-membraan) via membraanoordrag (nat of semi-droë rotasie). Na blokkering (met behulp van BSA, karringmelk, ens.) word die primêre teenliggaam toegedien om spesifiek aan die proteïen te bind, en die fluoressien-gemerkte sekondêre teenliggaam word bygevoeg nadat die film gewas is. Deur die tweede teenliggaam met die primêre teenliggaam te bind, kan die teikenproteïen waargeneem word deur substraatkleurontwikkeling en chemiluminessensie. Dit word gewoonlik gebruik om te bepaal of 'n spesifieke proteïen in die monster uitgedruk word en die uitdrukkingsvlak daarvan rofweg te analiseer.

Proteïen-Proteïen Interaksie Metode vergelyking

Die proteïen-aftrek-toetse is soortgelyk aan die Co-IP-toetse, wat albei behoort aan die opsporing van proteïeninteraksie-eksperimente. Die verskil tussen die twee metodes is dat die Co-IP-toetse die interaktiewe proteïene van bekende proteïene verkry, wat 'n sekere outentisiteit het, maar nie kan bevestig of die interaktiewe proteïene direk of indirek interaksie het nie. Aftrek-toetse is om die onbekende proteïen te vind wat met die bekende proteïen interaksie het. Dit kan direk bevestig of die bekende proteïen met die opgespoorde proteïen interaksie het, maar kan nie die bindingsituasie in vivo ken nie.

Ko-immunopresipitasietegnologie word gebruik om te analiseer of daar 'n interaksie tussen twee of meer proteïene is, gebaseer op immunopresipitasie-eksperimente. In vergelyking met ander proteïeninteraksie-analise van eksperimentele tegnieke (GST Pull-down, Western Blot, Chromatin immunopresipitasie-toets, ens.), het Ko-IP-tegnologie hoër spesifisiteit, sensitiwiteit en hoë herhaalbaarheid, wat die interferensie van nie-spesifieke binding kan vermy en die interaksie van proteïene in die natuurlike toestand kan weerspieël.

	BTW-aftrek	Ko-IP	WB
Voordeel	* Maklik om te bedryf *Geskik vir die suiwering van verskeie proteïene	Vir in vivo interaksie-analise Dit kan met stroomaf proteïen geïdentifiseer word	Sterk spesifisiteit Kwalitatiewe en kwantitatiewe in vitro
Beperking	Miskien nie-spesifieke binding Verdere validering van die interaksie is nodig	Sterk afhanklikheid van teenliggaampies Nie-spesifieke binding kan voorkom	Tydrowend Moeilik om te gebruik vir grootskaalse proteïenanalise
Toepassingsvoorbeeld	Identifiseer interaksies Gesuiwerde proteïenkompleks	Studeer seintransduksie Siektemeganisme	Daaropvolgende analise van proteïen-proteïen, proteïen-DNS en proteïen-RNA interaksies