VHH-teenliggaam is 'n natuurlike ontbrekende ligte ketting (VL) teenliggaam wat in die serum van kameeldiere voorkom. Die VHH-teenliggaamstruktuur is eenvoudig en bestaan ​​uit slegs twee swaar kettings (VH). Nanobodies bestaan ​​uit 'n swaar ketting veranderlike streek (VHH) met 'n molekulêre gewig van ongeveer 15 kDa. Die VHH-teenliggaam het die normale vermoë om antigene te herken en toon uitstekende affiniteit, uitstekende spesifisiteit, uitstekende stabiliteit en uitstekende penetrasie. Teenliggaampies teen die struktuur is sedertdien in ander diere, soos alpakkas en haaie, gevind. Nanobodies, wat slegs een swaar ketting veranderlike streek en twee konvensionele CH2- en CH3-streke bevat, ten spyte daarvan dat hulle geen VL-domein het nie, is 'n hoogs stabiele enkeldomein-teenliggaam en die kleinste bekende bindingseenheid met teenliggaamaktiwiteit. Alpha Lifetech kan kliënte voorsien van, insluitend nanobody-voorbereiding, nanobody-biblioteekkonstruksie en -sifting, VHH-nanobody-ekspressie en 'n reeks dienste. Deur die nanobody-sintese en faagvertoningsontwikkelingsplatform kan dit doeltreffend 'n verskeidenheid verskillende tipes faag-teenliggaambiblioteek bou en sif, en ons kliënte voorsien van spesifieke, hoë spesifisiteit van teenliggaamoplossings. Ons kan ook professionele teenliggaam-humaniseringstrategieë vir ons kliënte ontwikkel, wat vir nanobodies gehumaniseer kan word, en ons maatskappy is amper gelykstaande aan menslike teenliggaampies.

Eerstens laat die alpakka sonder enige siekte die immunogene toe om sy immuunstelsel te stimuleer om 'n immuunrespons te produseer, en hierdie diere kan enkeldomein-teenliggaampies produseer. Daarna het ons enkel-B-selle van alpakka PBMC geïsoleer, en RNA van B-selle is onttrek en in cDNA getranskribeer. Uiteindelik is dit as 'n sjabloon gebruik en ons teiken VHH-volgorde deur elektroforese gekeur. Vervolgens het ons 'n volgordebepalingsanalise van die gekeurde VHH-teenliggaamvolgorde uitgevoer, wat die stabiliteit en affiniteit van die voorbereide VHH-teenliggaam kan verbeter. Terselfdertyd kan ons ook plekgerigte mutagenese en stabiliteitsondersoek van VHH-teenliggaampies uitvoer. Ons kan hoër stabiliteit van VHH-teenliggaammutante verkry deur spesiale metodes soos sekere spesifieke mutasies vir sifting in te voer. Die ingenieur het dan die gevolglike VHH-volgorde in die toepaslike ekspressievektor (soos plasmiede, virusse, ens.) vir VHH-teenliggaam-ekspressie ingevoeg. Laastens, deur middel van faagvertoningstegnologie of gisvertoningstegnologie, word VHH-teenliggaampies op die gasheeroppervlak uitgedruk, en dan word nano-teenliggaampies wat spesifiek aan die teikenantigeen kan bind, geselekteer deur bedekte antigene en ELISA te gebruik. Alpha Lifetech het ook die geselekteerde nanoliggame gesekwensieer en geverifieer om die korrektheid en funksionele aktiwiteit van die nanoliggaamsekwensies wat aan kliënte gelewer word, te verseker.

VHH-tegnologie benut verskeie vooruitgang in genetiese manipulasie, sodat die teikengeen onder normale omstandighede hersplits en herrangskik word, wat 'n hoogs bindende instrument vir ander tegnologieë kan bied, wat verskeie etikette kan bevat, en die teenliggaampies wat deur VHH-tegnologie geproduseer word, is gerieflik vir suiwering. Deur hoë-deurset siftingstegnieke te gebruik, kan Alpha Lifetech VHH-teenliggaampies met spesifieke funksies wat deur kliënte vereis word, in 'n groot aantal teenliggaampies in 'n kort tydperk sif. Intussen kan VHH-teenliggaampies onbepaald en ekonomies geproduseer word wanneer VHH-teenliggaampies aan hoë temperature en ander oplosmiddels blootgestel word. VHH-teenliggaampies kan geneties gemanipuleer word om ander gebruike te genereer, soos om steiers te word, te merk en spesifieke aminosure te verander. VHH-teenliggaampies is geskik vir enige algemene platform wat konvensionele teenliggaampies gebruik, soos mikrotiterplate, elektrochemiese biosensors en laterale vloei-toestelle. As gevolg van die kleiner grootte van VHH-teenliggaampies kan 'n hoër digtheid in die bindingsdomein hê, sodat VHH-teenliggaampies 'n uitstekende voordeel het in verhoogde sein en dus hoër sensitiwiteit. Terselfdertyd het VHH-teenliggaampies 'n baie breë toepassing in tumordiagnose en -behandeling, inflammasiediagnose, die behandeling van siektes van die sentrale senuweestelsel en ander velde. VHH-teenliggaampies is veral nuttig vir die monitering van mikotoksiene in voedsel en voer omdat hulle maklik geneties gemanipuleer kan word en uitstekende stabiliteit het.

In die proses van immunisering gebruik ons ​​'n verskeidenheid immunogene. Volgens die eienskappe van immunogene kan ons hulle verdeel in natuurlike antigene, rekombinante antigene, sintetiese antigene en kleinmolekule-antigene. Natuurlike antigene sluit virale immunogene in. Die suiweringsproses van natuurlike immunogene is ingewikkeld, wat ook moeiliker is as ander immunogene, en die suiweringskoste is ook hoër. Die virale immunogeen word verdeel in die heelvirus-geïnaktiveerde entstof, subeenheid-entstof, virale vektor-entstof en mRNA-entstof. Die heelvirus-geïnaktiveerde entstof kan die liggaam stimuleer om 'n immuunrespons te produseer, maar die virus moet volledig geïnaktiveer word, en die voorbereidingsproses is meer ingewikkeld. Vir die subeenheid-entstof het ons slegs die virale oppervlakproteïen as die antigeen gebruik, dus is die veiligheid van hierdie immunogeen hoog, maar die adjuvant moet bygevoeg word om die immuuneffek te versterk. Na genetiese modifikasie word adenovirus en lentivirus as vektore gebruik om die voorkoms van die immuunrespons deur virale replikasie en uitdrukking te veroorsaak. Die immuuneffek is doeltreffend en blywend, maar die voorbereidingsproses is kompleks, daarom moet ons bioveiligheid streng beheer. Alhoewel mRNA direk in selle ingevoer kan word, sodat selle antigeen kan uitdruk en die voorkoms van 'n immuunrespons kan stimuleer, is hierdie proses moeiliker, wat vereis dat ons die stabiliteit en afleweringsdoeltreffendheid van mRNA verseker. Alhoewel rekombinante antigene in konformasie van natuurlike antigene verskil, kan hulle uitgebreide industriële produksie ondergaan. Kleinmolekuleproteïene of polipeptiedantigene kan deur in vitro-sintesemetodes voorberei word. Hul struktuur is beheerbaar, maar dit kan ingewikkeld in ontwerp wees. Kleinmolekuleantigene is meestal kleinmolekuleverbindings soos peptiede en nukleotiede, omdat hulle nie op sigself immunogeen is nie, dus kan hulle slegs as immunogene gebruik word na verbinding met makromolekulêre draers.

Die molekulêre gewig van nano-antiliggame is baie klein, gewoonlik rondom 12-15 kDa, slegs een tiende van die tradisionele IgG-antiliggaam. Die kristalstruktuur is 'n rugbybal van ongeveer 2.5 nm in deursnee en ongeveer 4.2 nm lank. Die unieke molekulêre struktuur maak voorsiening vir goeie weefselpenetrasie, korter halfleeftyd en hoër nierklaring deur die bloed-breinversperring. Die nano-antiliggame bestaan ​​uit komplementêre bepalende en ruggraatstreke. Komplementêre beslissingstreke sluit in CDR 1, CDR 2 en CDR 3. Die lengtebereik van 3 tot 28 aminosure in die CDR 3-streek verseker die bergingskapasiteit van die nano-antiliggaambiblioteek. In vergelyking met die tradisionele teenliggaam-CDR 3-streek van slegs 8 tot 15 aminosure, het sommige van die CDR 3-streke met langer CDR 3 ons gehelp om verborge epitope op die oppervlak van die antigeen te identifiseer. Die ruggraatstreek van die nanobodies sluit FR 1, FR 2, FR 3 en FR 4 in, met vier hidrofiliese aminosuurmutasies op FR 2, en hierdie mutasie verbeter die wateroplosbaarheid van die teenliggaam. Die spesiale disulfiedbinding tussen CDR 1 en CDR 3 verbeter die stabiliteit van teenliggaampies onder hoë druk, hoë temperatuur, denaturering en ander toestande, wat bevorderlik is vir die produksie en bewaring van nanobodies, en skep ook die moontlikheid van nuwe toedieningsmetodes.