منصة تحصين الحيوانات
تتميز مصادر ألفا لايف تيك الحيوانية بالوضوح، حيث تمتلك تصاريح تفتيش وحجر صحي، وخلفيات وراثية واضحة، وتكرار تطعيم واضح، وسجلات مفصلة لفترات التطعيم، مما يوفر خدمات ملائمة لإنتاج الأجسام المضادة. تُحصن الشركة بشكل رئيسي حيوانات عائلة الإبل (الألبكة لياما والإبل)، مما يضع الأساس لإنتاج الأجسام النانوية. بالإضافة إلى ذلك، يمكنها تحصين الحيوانات العادية (مثل الأرانب البيضاء النيوزيلندية والفئران وغيرها من الحيوانات) وفقًا لتكرار التطعيم المطلوب ومتطلبات المناعة لدى العملاء، واستخلاصها وعزلها في خلايا الدم الحمراء المحيطية (PBMCs)، واستخدامها في تجارب لاحقة (مثل تطوير الأجسام المضادة وحيدة النسيلة، والأجسام المضادة متعددة النسيلة، إلخ). يمكن للعملاء توفير مولدات المناعة الخاصة بهم، وسنُجري رقابة صارمة على جودتها. في حال توفير العملاء لمولدات المناعة الفيروسية، يجب تعطيلها، وسنُجري اختبارات التعطيل لضمان السلامة. وفي الوقت نفسه، يُمكننا أيضًا تخصيص مولدات المناعة المناسبة وفقًا لاحتياجات العملاء.
مقدمة في تحصين الحيوانات
عند إنتاج أجسام مضادة مشتقة من الحيوانات، مثل الأجسام المضادة وحيدة النسيلة، والأجسام المضادة متعددة النسيلة، والأجسام النانوية، فإن الخطوة الأولى هي تحصين الحيوانات والحصول على الخلايا البائية، أو الأجسام المضادة، أو الخلايا الدموية المحيطية (PBMCs) المقابلة، وذلك للتحضير لمزيد من إنتاج الأجسام المضادة، وتعزيز البحث العلمي الأساسي، وتطوير أدوات التشخيص السريري، وتسهيل اكتشاف وتطوير أدوية جديدة. تستطيع الإبل، واللاما، واللياما، وغيرها من الإبل في فصيلة الجماليات (Camelidae) إنتاج مجموعات من الأجسام المضادة أحادية النطاق (النانوية) من خلال جمع الدم المناعي واستخراج الخلايا الدموية المحيطية. يمكن تحصين الأرانب والحيوانات الأخرى واستخراج الأجسام المضادة من أجسامها. بعد التنقية، يمكن استخدامها لإنتاج أجسام مضادة متعددة النسيلة. يمكن استخدام الفئران والجرذان، وغيرها، لإنتاج أجسام مضادة وحيدة النسيلة عن طريق دمج الخلايا البائية المستخرجة مناعيًا مع خلايا الورم النقوي. قبل التحصين، يجب مراعاة مبادئ 3R (الاستبدال، الاختزال، التحسين)، والتي يمكن أن تقلل بشكل كبير من عدد الحيوانات المستخدمة إلى الحد الأدنى اللازم، وتُحسّن الإجراءات التجريبية، وتُقلل من معاناة الحيوانات. ويجب أيضًا اتباع التصميم التجريبي المناسب، واختيار الأجسام المضادة المناسبة، وإجراءات التحقق الصارمة.
تصنيف المستضدات - إنتاج الأجسام النانوية
أنواع المستضدات | مثال | تحضير المُستضد | ملحوظات |
---|---|---|---|
بروتينات مناعية | الإنزيمات والبروتينات والسموم البكتيرية والمواد الأخرى | اختر أنظمة مختلفة للتعبير عن البروتين: الإشريكية القولونية، الخميرة، خلايا الحشرات، خلايا الثدييات، والنظام الخالي من الخلايا | انتبه لعوامل مثل درجة الحرارة والوقت والرقم الهيدروجيني والأجسام المتضمنة التي تؤثر على التعبير عن البروتين |
مُستضدات الأحماض النووية | الحمض النووي، الحمض النووي الريبوزي | مُستضد الحمض النووي: إنشاء الحمض النووي البلازميدي، واستنساخ متجهات التعبير المناسبة للجينات المستهدفة، وزراعة الخلايا لتضخيم الحمض النووي البلازميدي، واستخراج الحمض النووي البلازميدي عالي النقاء مناعة الحمض النووي الريبوزي: الحاجة إلى إضافة بنية القبعة وذيل البولي أ لمنع التحلل | عند تحضير المستضدات DNA، يجب الانتباه إلى الخلايا المضيفة المناسبة، وعند تحضير المستضدات RNA، يجب الانتباه إلى منع تدهور RNA. |
المستضدات الفيروسية | لقاح الفيروس الكامل المعطل، لقاح الوحدة الفرعية، لقاح الناقل الفيروسي (الفيروس الغدي، الفيروس العصوي، إلخ)، لقاح mRAN. | عند تحضير لقاح مُعطَّل بالكامل، يُعطَّل الفيروس أولًا لزيادة الأمان. ويُستخدم اختبار السمية لتحديد ما إذا كان التعطيل كاملًا. تتطلب لقاحات الوحدات الفرعية بروتينات سطح الفيروس فقط كمستضدات، ويجب مراعاة الفعالية المناعية. | يجب إضافة المواد المساعدة لتوفير التأثيرات المناعية، ويجب الاهتمام بالفيروس الذي يحتاج إلى تعطيله، ويجب تحديد عيارات الفيروس المناسبة لضمان التأثيرات المناعية، ويجب التحكم بشكل صارم في سلامة عملية التحضير. |
عملية أو جدول زمني لتحصين الحيوانات
اختيار الحيوانات وإعداد المستضدات
اختيار الحيوانات: اختيار الألبكة ذات العمر المناسب والبنية الصحية من المجموعات الصحية، وإجراء فحص الدم والكشف عن الأمراض للتأكد من عدم وجود أمراض معدية أو مشاكل صحية أخرى.
تحضير المستضد: المستضد هو المفتاح لتحفيز الاستجابات المناعية ويتطلب اختيار البروتينات أو الببتيدات أو المواد المناسبة الأخرى بناءً على متطلبات الجسم المضاد المستهدف.
يمكن تحصين الألبكة باستخدام من ١ إلى ٣ مستضدات في آنٍ واحد، بكمية إجمالية تتراوح من ١ إلى ٢ ملغ لكل تحصين، وبحجم أقل من ٢ مل. قبل التحصين، يُمزج المستضد والمادة المساعدة بنسبة ١:١ لتكوين خليط متجانس، ويُحفظ في درجة حرارة ٤ درجات مئوية.
الألبكة المناعية
سجّل رقم أذن الألبكة الفارغة وابدأ تجربة التطعيم. احقن في العقد الليمفاوية القريبة من عنق الألبكة على كلا الجانبين، بنقطتين على كل جانب، وحوالي 0.4 مل من المستضد المستحلب محقون في كل نقطة. بعد التطعيم، راقب لمدة نصف ساعة للتأكد من عدم ظهور أي أعراض مزعجة على الألبكة. يجب إعطاء التطعيم كل أسبوعين، مع 4 تطعيمات على الأقل.
جمع الدم
بعد 4 تطعيمات لمدة 5-7 أيام، يتم جمع 50 مل من الدم من وريد الرقبة للالباكا.
فصل المصل
تُجمع عينات الدم للتقييم المناعي قبل كل تطعيم ضد المستضد، مع أخذ 5 مل من الدم في كل مرة. في اليوم نفسه، يُطرد الدم مركزيًا بسرعة 400 x ج لمدة 30 دقيقة باستخدام جهاز طرد مركزي مُبرّد مسبقًا عند درجة حرارة 25 مئوية. تُفصل الطبقة العليا من المصل وتُحفظ لاختبار عيار الأجسام المضادة لاحقًا.
الخلايا الليمفاوية المنفصلة
أضف أولاً 15 مل من محلول فصل الخلايا، ثم أضف ببطء 15 مل من الدم إلى أنبوب الطرد المركزي سعة 50 مل. كن حذرًا وبطيئًا عند إضافة الدم لمنع اختلاط الدم ومحلول الفصل. قم بالطرد المركزي المبرد مسبقًا عند 25 درجة مئوية، وقم بالطرد المركزي عند 400 xg لمدة 30 دقيقة، وقم بتخزين المصل العلوي في أنبوب طرد مركزي جديد عند درجة حرارة -80 درجة مئوية؛ استخدم ماصة لسحب خلايا المناعة من الطبقة العليا على شكل قطن في أنبوب طرد مركزي جديد سعة 50 مل. أضف 10 مل من محلول PBS في درجة حرارة الغرفة إلى كل أنبوب، وقم بالطرد المركزي عند 25 درجة مئوية و 400 xg لمدة 20 دقيقة. قم بإزالة السائل العلوي، وأضف 5 مل من محلول PBS في درجة حرارة الغرفة إلى كل أنبوب، واخلط جيدًا برفق، واحسب عدد الخلايا باستخدام عداد الكريات الدموية، ثم قم بالطرد المركزي عند 25 درجة مئوية و 400 xg لمدة 20 دقيقة. قم بإزالة العصارة الفوقية وإذابة الخلايا الليمفاوية التي تم الحصول عليها بواسطة RNAiso Plus بناءً على عدد الخلايا للحصول على 10 ^ 7/مل من محلول الخلية، والذي يتم تخزينه عند درجة حرارة -80 درجة مئوية.

الشكل 1: تمثيل تخطيطي لاستراتيجيات اكتشاف الأجسام المضادة المختلفة والمراحل التجريبية المتضمنة. (مصدر الشكل:لاوستسن، أندرياس هـ. وآخرون.)
يقدم العملاء المواد المناعية - مراقبة الجودة الصارمة
أنواع المستضدات | متطلبات | طريقة مراقبة الجودة |
---|---|---|
عينات الببتيدات/الجزيئات الصغيرة | ظروف الذوبان (تعتمد بشكل أساسي على ما إذا كانت ستؤدي إلى تعطيل البكتيريا العاثية)، والبنية الجزيئية/تسلسل الببتيد، وتقرير التركيب (HPLC/MS/HNMR) | الكشف عن HPLC/MS |
عينات البروتين | SDS-PAGE/WB، شروط إعادة التكوين، العازل، معلومات الملصق، الكمية الإجمالية (20-50 ميكروغرام)، التركيز، النقاء، إلخ. | SDS-PAGE/WB |
عينات الخلايا | نوع الخلية (خلايا أولية/خلايا معدلة جينيًا)، شكل الخلية (طازجة/مجمدة مذابة)، نوع النمو (ملتصقة/معلقة)، متطلبات وسط الثقافة، عدد الخلايا المقدمة، عدد الخلايا المقدمة، الخلايا المعدلة جينيًا لضمان التعبير المستقر عن أهداف الفحص (الأجسام المضادة الأولية المقابلة للعميل)، الخلايا المجمدة المذابة لتحديد معدل التعافي | استهداف الخلايا المعدلة جينيا بشكل أساسي، باستخدام الأجسام المضادة الأولية التي يوفرها العميل لتحديد التعبير المستهدف باستخدام تقنية ELISA (توفر شركتنا الأجسام المضادة الثانوية لـ HRP)، وكشف قياس التدفق الخلوي (يمكن لشركتنا توفير الأجسام المضادة الثانوية الفلورية). |



-
ما هي تطبيقات مناعة الحيوان؟
+يمكن إنتاج الأجسام المضادة متعددة النسائل عن طريق تحصين الحيوانات، ويمكن إنتاج الأجسام المضادة وحيدة النسيلة عن طريق دمج الخلايا البائية مع خلايا المايلوما، ويمكن استخراج الخلايا الدموية المحيطية من مصادر الجمال (الألبيكا، الجمل، الألبكة، إلخ) لإنتاج أشكال مختلفة من شظايا الأجسام المضادة مثل الأجسام النانوية، شظايا Fab، شظايا الأجسام المضادة scFv، إلخ. -
ما هي الاحتياطات اللازمة لحماية الحيوان من الأمراض؟
+لإنتاج أجسام مضادة نانوية للحيوانات المشتقة من الإبل، يلزم إجراء 5-6 تطعيمات. يجب جمع عينات الدم كعينة ضابطة قبل التطعيم، بفاصل أسبوعين بين كل تطعيم. بعد التطعيم الرابع، يجب جمع عينات الدم الإيجابية والسلبية غير المطعّمة لإجراء اختبار ELISA لتحديد مستوى العيار. إذا كان مستوى العيار أقل من 10^6، فيجب زيادة عدد التطعيمات حتى يصل مستوى العيار إلى المستوى المناسب. بالنسبة للتحصينات الحيوانية الأخرى مثل تحصين الأرانب (المستوى الأمثل أو المشترك لمستضد البروتين لتحصين الأرانب هو 50-1000 ميكروجرام)، تحصين الفأر (المستوى الأمثل أو المشترك لمستضد البروتين لتحصين الفأر هو 5-50 ميكروجرام، والذي يتطلب 10 ^ 6 خلايا إذا كانت خلية، و10-50 ميكروجرام للحمض النووي أو الكربوهيدرات)، تحصين الماعز (المستوى الأمثل أو المشترك لمستضد البروتين لتحصين الماعز هو 250-5000 ميكروجرام)، وما إلى ذلك، يجب الانتباه إلى الجرعة والسلامة وفعالية المستضدات. -
كيفية اختيار الحيوانات المناعية؟
+بناءً على نوع الأجسام المضادة التي يحتاجها العميل، إذا كنت بحاجة إلى إنتاج أجسام نانوية أو شظايا أجسام مضادة أخرى، يمكنك اختيار الحيوانات المشتقة من الإبل (الجمال، الألبكة، الألبكة) للتحصين. إذا كنت بحاجة إلى إنتاج أجسام مضادة وحيدة النسيلة أو متعددة النسيلة، فعليك اختيار النوع المناسب بناءً على كمية المصل والمستضد ومصدر المستضد. الحد الأقصى لكمية المصل للأرانب هو 500 مل، وهو ما يتطلب كمية قليلة من المستضد، وهو الخيار الأمثل لإنتاج الأجسام المضادة متعددة النسيلة. الحد الأقصى لكمية المصل للفئران هو 2 مل، والحد الأقصى لكمية المصل للجرذان هو 20 مل، وهو عادةً الخيار الأمثل للأجسام المضادة وحيدة النسيلة. تتميز الأجسام المضادة المنتجة من الماعز بألفة عالية، ويمكن لشركة ألفا لايف تيك تخصيص خطة تحصين خاصة بك وفقًا لاحتياجاتك. -
هل يلزم استخدام المستضدات مع المواد المساعدة؟ كيف أختار؟
+هناك نوعان من المواد المساعدة: زيتية ومائية. يُعدّ الاستخدام الرشيد للمواد المساعدة أمرًا بالغ الأهمية لإحداث استجابات قوية للأجسام المضادة للمستضدات القابلة للذوبان. يعني الإطلاق المستمر للمواد المساعدة إمكانية استخدام جرعات أقل من المستضدات، وتكون استجابات الأجسام المضادة أطول أمدًا. يجب استخدام الحقنة الأولى مع مادة مساعدة. يُنصح عمومًا باستخدام مادة فرويند المساعدة عندما تكون كمية المستضد صغيرة. -
احتياطات تحصين الألبكة؟
+(1) يُعد اختيار الألبكة ومستضد المناعة مفتاحًا لنجاح التحصين. لا يُنصح باختيار جمل ذي حجم مناسب. يُعد نقاء المستضدات المناعية وتكوينها الصحيح أمرًا بالغ الأهمية لاختيار الأجسام المضادة المناسبة للاستخدامات اللاحقة بعد التحصين بالألباكة. لا تقل نسبة نقاء مستضدات البروتين عادةً عن 90%.(2) فصل الخلايا الليمفاوية: يمكن أن يؤدي فصل الخلايا في الوقت المناسب إلى منع انحلال الدم بشكل فعال بعد جمع الدم لتحقيق أفضل تأثير فصل.(3) يمكن أن تؤثر الدورة المناعية على الاستجابة المناعية: تسمح الفترة المناعية التي تتراوح من أسبوع إلى أسبوعين لللامباكا بالحصول على استجابة مناعية جيدة لمعظم المستضدات.

مادة مساعدة تم تطويرها بشكل مستقل
تم تحسين تركيبة المادة المساعدة الفريدة لدينا لتناسب الجهاز المناعي للألبكة، مما يوفر فعالية وخصوصية أعلى من المواد المساعدة التقليدية.

توصيل التطعيماتمعيار
نعد بإكمال التطعيم في الوقت المحدد، وتوفير مصل عالي الجودة، وتسجيل كل خطوة من خلال تقارير مفصلة.

مراقبة جودة المشروع
يخضع كل مشروع لعمليات مراقبة جودة صارمة لضمان توصيل الأجسام المضادة التي تلبي المعايير العالية للعملاء.

بوضوحالألبكةخلفية
لدينا مجموعة صحية من حيوانات الألبكة التي توفر الدعم لبرامج التحصين المختلفة.
إذا كان لديك أي أسئلة، فلا تتردد في الاتصال بنا في أي وقت.
Leave Your Message
0102