خدمة نضج تقارب الأجسام المضادة

شركة ألفا لايف تيكيمكننا تقديم خدمة نضج تقارب الأجسام المضادة باستخدام تقنيات الطفرة والاختيار. نستخدم عادةً صيغة scFv للأجسام المضادة في عمليات خدمة نضج التقارب، بالإضافة إلى نظام فاجيميد أحادي التكافؤ، والذي يُستخدم لتقليل آثار التقارب أثناء فحص ارتباط المستضد. كما يمكن لفريقنا المتخصص تقديم خدمات نضج التقارب للأجسام المضادة أحادية النطاق.

شركة ألفا لايف تيكتفخر شركة ناشونال بيزنس آند كونسلتينغ سيرفيسز بتقديم خدمات شاملة لتلبية الاحتياجات المتنوعة لعملائنا حول العالم. هدفنا هو فهم وتلبية متطلبات عملائنا المختلفة، والمساعدة في حل أي مشاكل ناشئة أو مستقبلية في مجال البحث العلمي.

ما هو النضج القرابي؟

نضج الألفة هو العملية التي تخضع فيها الأجسام المضادة لطفرات متكررة وانتخابًا لزيادة تقاربها مع مستضدات محددة. تحدث الخلايا البائية بشكل رئيسي في المركز الجرثومي للأعضاء اللمفاوية الثانوية، وتخضع لطفرة جسدية مفرطة وانتخابًا تحت تأثير الخلايا التائية والخلايا الشجيرية الجريبية.
خلال عملية نضج الألفة، تُنشَّط الخلايا البائية ذات مستقبلات الغلوبولين المناعي السطحي منخفضة الألفة عن طريق ملامسة المستضد، وتخضع للتكاثر والتمايز. ومن خلال نضج الألفة الناتج عن فرط الطفرات الجسدية، تحدث استبدالات عشوائية للنيوكليوتيدات في المنطقة المتغيرة من جينات الغلوبولين المناعي، مما يؤدي إلى إنتاج متغيرات مختلفة من الأجسام المضادة. بعد فرط الطفرات الجسدية، يُجرى الانتقاء المُوجَّه بالمستضد على الخلايا البائية ذات مستقبلات الغلوبولين المناعي الطافرة. تُحفظ الخلايا البائية التي تُنتج أجسامًا مضادة ذات ألفة مستضدية متزايدة بشكل تفضيلي ويُسمح لها بالتكاثر، بينما تخضع الخلايا البائية ذات الألفة المنخفضة أو الثابتة للموت الخلوي المبرمج. تؤدي هذه العملية التكرارية من الطفرات والانتقاء إلى إنتاج مستنسخات من الخلايا البائية، مما يُنتج أجسامًا مضادة ذات ألفة أعلى تدريجيًا تجاه المستضد.

خدمة نضج تقارب الأجسام المضادة

تتمثل المزايا الرئيسية لطرق تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) في استهداف الطفرات بدقة للجزء المُضخَّم؛ وسهولة التحكم في معدل الخطأ، وسرعة وسهولة إعداد الطريقة، وعدم استخدام مواد كيميائية خطرة. من المعروف أن بوليميراز Taq DNA يُضاعف الحمض النووي بدقة منخفضة، ويعود ذلك بشكل أساسي إلى غياب نشاط التدقيق من 3' إلى 5'.ألفا لايف تيكتطبق منصة هندسة الأجسام المضادة أسلوب تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) المعرض للخطأ، وذلك لتحوير مناطق CDR بشكل رئيسي أثناء إنشاء المكتبة الفرعية. وكثيرًا ما نُحدث طفرات في مواقع عشوائية تمامًا عبر شظايا VH وVL بأكملها، وذلك لزيادة التنوع الجيني للمكتبة الفرعية. بعد إنشاء مكتبة جينات الأجسام المضادة المتحولة باستخدام تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) المعرض للخطأ، يتم اختيار المتغيرات عالية الألفة (يمكن أن تصل ألفة أجسام scFv المضادة إلى 10^8 - 10^10 مولار) إما عن طريق التنقية في المحلول أو على مستضد مُثبّت مع ظروف غسل مُحسّنة للاختيار المعتمد على المعدل.
  
العلماء فيشركة ألفا لايف تيكاستخدمنا سلالات الإشريكية القولونية المتحولة mutAD5TM كواحدة من استراتيجيات الطفرات المتعددة لإدخال طفرات عشوائية، وبالتالي تعديل تقارب وتعبير شظايا الأجسام المضادة المُعاد تركيبها. يمكن تعديل شروط الانتقاء لشظايا الأجسام المضادة ذات مستويات الإنتاج المتزايدة. كما يمكن تعديل شروط النمو في خلايا الإشريكية القولونية المتحولة لإدخال طفرة نقطية عشوائية واحدة لكل كيلو قاعدة من الحمض النووي، وهو ما يعادل تقريبًا تغييرًا واحدًا في الكودون لكل شظية scFv. بعد عدة دورات من الطفرة والعرض والانتقاء، يمكننا تحسين ثابت التقارب من 10^5 - 10^6 مولار إلى 10^8 - 10^10 مولار.

تحسين استراتيجيات نضج التقارب

يمكن عشوائية مواقع معينة من الأجسام المضادة عند تنوع محدد (مثل العشوائية الكاملة لجميع الأحماض الأمينية العشرين أو العشوائية المتحيزة مع أحماض أمينية مختارة بنسب مئوية ثابتة) لتحسين ألفة الأجسام المضادة. لدينا استراتيجيتان لتحسين ألفة الأجسام المضادة: أولاً، يتم إدخال الطفرات في مواقع محدودة في مناطق تحديد التكامل (CDRs) عن طريق الطفرات الموجهة للموقع؛ ثانياً، يتم إدخال الطفرات في جميع مناطق ترميز V عن طريق الطفرات العشوائية. باستخدام هاتين الطريقتين، سيتم استبدال تسلسلات الأحماض الأمينية المحفوظة أو منطقة الإطار الكاملة للجسم المضاد بأحماض أمينية أخرى، والتي يمكن أن تزيد بشكل كبير، إلى جانب تقنيات مسح مكتبة الببتيد لدينا، من ألفة الأجسام المضادة موضع الاهتمام إلى مستوى عالٍ جدًا.

تقارب عرض البكتيريا العاثية والأجسام المضادة

بعد إنشاء مكتبة طفرات scFv، تتوفر استراتيجيتان للفحص: التصفية الحيوية (biopanning) وفرز المستضدات الصلبة. في الأولى، يُستخدم تركيز طرحي من الركيزة لعزل الجسم المضاد عالي الألفة، حيث تُغسل الطفرات منخفضة الألفة، تاركةً جزيئات العاثيات عالية الشراهة. أما الاستراتيجية الثانية، فتستخدم مستضدًا مُوسومًا في محلول، واختيارًا قائمًا على ثابت التوازن (Kd)، واختيارًا قائمًا على حركية الارتباط. يُميز هذا النهج الاختياري متغيرات الجسم المضاد ذات ثابت التوازن المُحسّن (Kd).

إذا كان لديك أي أسئلة، فلا تتردد في الاتصال بنا في أي وقت.