منصة تطوير أنسنة الأجسام المضادة

تُثير الأجسام المضادة المُؤنسنة استجابة ضئيلة أو معدومة من جهاز المناعة البشري. ووفقًا لأبحاث السوق المعرفية، يبلغ حجم سوق مُؤنسنة الأجسام المضادة العالمي 92.5 مليون دولار أمريكي في عام 2024، ومن المتوقع أن ينمو بمعدل نمو سنوي مركب قدره 13.00% من عام 2024 إلى عام 2031. تمتلك شركة ألفا لايف تيك منصة مُتطورة لإنسنة الأجسام المضادة، بمعدل نجاح يتجاوز 98% للأجسام المضادة المُؤنسنة. لدينا استراتيجيات مُتعددة لإنسنة الأجسام المضادة، بما في ذلك تطعيم CDR وتطعيم SDR وخلط السلسلة وعرض البكتيريا، وغيرها، والتي يُمكن اختيارها وفقًا لاحتياجاتك التجريبية. لا يقتصر دورنا على توفير إنسنة الأجسام المضادة من أنواع مُتعددة، مثل الفئران والأرانب والألباكا والإبل، ولكننا نُقدم أيضًا إنسنة الأجسام المضادة بأشكال مُختلفة، مثل scFv وFab والأجسام النانوية. لدينا كوادر فنية متخصصة لتقديم خدمات إنتاج الأجسام المضادة وتنقيتها والتحقق من صحتها، بما في ذلك إنتاج الأجسام المضادة وحيدة النسيلة للفأر، وإنتاج الأجسام المضادة الكيميرية، والتعبير عن الأجسام المضادة المأكولة وتنقيتها، وتوصيفها وتحليلها. بفضل معدل نجاحها العالي، ونقائها العالي، ومناعتها المنخفضة، نضمن إنتاج الأجسام المضادة المأكولة.

مقدمة في أنسنة الأجسام المضادة

يمكن استخدام العلاج بالأجسام المضادة وحيدة النسيلة لعلاج أمراض المناعة الذاتية والسرطان وأمراض أخرى. تُنتج الأجسام المضادة وحيدة النسيلة عن طريق تحصين الفئران أو حيوانات أخرى. عند استخدامها لعلاج الأمراض في المرحلة المتأخرة من إنتاج الأجسام المضادة وحيدة النسيلة، لا يمكن تجاهل مناعة الأجسام المضادة غير البشرية. يتمثل المبدأ الرئيسي للإنسنة في دمج بقايا الإطار غير البشري، مثل مناطق تحديد التكاملية شديدة التغير (CDRs)، في الإطار البشري، مما ينتج تسلسلات تحتفظ بخصائص الأجسام المضادة الأصلية مع منع المناعة. يظل تحصين الفئران وما يليه من إنسنة لتسلسلات الفئران مسارين رئيسيين لاكتشاف الأجسام المضادة العلاجية، والتي تمر بشكل رئيسي بعدة مراحل: إنتاج الأجسام المضادة للفأر، وتهجين الأجسام المضادة وحيدة النسيلة، والأجسام المضادة البشرية وحيدة النسيلة الفأرية التهجينية، وعملية تطوير الأجسام المضادة وحيدة النسيلة المؤنسنة بالكامل. في الوقت الحاضر، يتضمن البحث بشكل رئيسي الفئران المعدلة وراثيًا (نقل جينات الخلايا البائية البشرية إلى الفئران)، والفحص عالي الإنتاجية باستخدام تقنية عرض الخميرة أو البكتيريا العاثية، وتطعيم CDR (إدراج CDRs الأبوية في تسلسلات بشرية)، وبقايا التحديد الخاصة بالزرع (SDR)، وخلط الإطار، وطرق أخرى.

الشكل 1: لمحة عامة تخطيطية عن تحويل الأجسام المضادة إلى أجسام بشرية بالكامل من الأجسام المضادة للفئران (المجالات الخضراء) إلى أجسام مضادة بشرية بالكامل.

استراتيجية إضفاء الطابع الإنساني على الأجسام المضادة

تطعيم CDR

يتم تحقيق تطعيم CDR من خلال نظام تعبير الثدييات الذي يعتمد على تقنية الحمض النووي المؤتلف، وخطواته الرئيسية هي:

(1) تطوير الأجسام المضادة المقابلة في الفئران (أو المصادر غير البشرية)، وعزل الأجسام المضادة المشفرة للحمض النووي، واستنساخها في ناقلات للتسلسل (أو إجراء تسلسل الخلية الفردية بشكل مباشر).

(2) لتحديد تسلسل الحمض النووي المقابل لـ CDR للجسم المضاد وتحديد خصوصية ارتباط الهدف؛

(3) حدد منطقة الإطار البشري (FR) لزرع CDRs غير البشرية وإنشاء جين جسم مضاد جديد.

(4) إجراء تحليل ثلاثي الأبعاد للصراعات بين مستقبلات CDR غير البشرية ومستقبلات FR البشرية لتوليد طفرات الاسترداد لتثبيت الحلقة ومنع فقدان التقارب أو السلامة البنيوية للجسم المضاد البشري النهائي.

الشكل 2: نظرة عامة تخطيطية على تطعيم منطقة تحديد التكامل (CDR).

خلط الإطار

يعتمد خلط الأطر على تقنية عرض العاثيات وتقنية فحص مكتبة العاثيات للحصول على أجسام مضادة عالية الألفة. تُستخدم الأوليغونوكليوتيدات المُرمِّزة لأطر السلسلة الثقيلة للأجسام المضادة البشرية كقوالب، وتُرمَّز مناطق CDR كبادئات، ويُجرى تضخيم تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) لتشويه ناتج تفاعل البوليميراز المتسلسل للحصول على الحمض النووي أحادي السلسلة. يُعاد بناء الحمض النووي أحادي السلسلة لجينات VL وVH، المُنقَّاة باستخدام الستربتافيدين، على نواقل باستخدام ليجاز الحمض النووي T4 وإنزيمات القيد، ويُحضَّن مع العاثيات، ويُضخَّم بواسطة العاثيات، ثم تُبنى مكتبة عرض العاثيات. تُجرى ثلاث جولات من الفحص باستخدام المستضدات المقابلة، ويُتحقق أخيرًا من النُسخ الإيجابية باستخدام اختبار الإليزا (ELISA) وطرق أخرى.

الشكل 3: رسم تخطيطي لاستراتيجيات تطعيم منطقة تحديد التكامل (CDR) وخلط الإطار (FR). (أ) الإجراء الرئيسي لتطعيم منطقة تحديد التكامل (CDR). (ب) العملية الرئيسية لخلط الإطار (FR). (المصدر المرجعي:وانغ يونغمي وآخرون، مقارنة بين "خلط الإطار" و"تطعيم CDR" في إضفاء الصفة الإنسانية على جسم مضاد PD-1 الفأري.)

عرض البكتيريا العاثية

يعتمد إنتاج الأجسام المضادة البشرية على طريقة عرض أجسام مضادة محددة على سطح العاثيات، والتي تُصنع بشكل رئيسي من خلال مكتبات عاثيات الأجسام المضادة البشرية. مصدر هذه المكتبات هو خلايا الدم المحيطية المحيطية المعزولة من الدم المحيطي البشري لإنشاء مكتبات عاثيات، والتي تُفحص منها التسلسلات المقابلة. يحتوي هذا التسلسل على التسلسل البشري الكامل، لكن الأجسام المضادة المنتجة هي شظايا أجسام مضادة، مثل scFv وFab وnanobody.

سير عمل خدمة إضفاء الطابع الإنساني على الأجسام المضادة

خطوات الخدمة	معيار مراقبة الجودة	الجدول الزمني
عزل الأجسام المضادة	نقاء >95%	1-2 أسابيع
تحليل التسلسل	التعرف الدقيق على التسلسلات غير البشرية	أسبوع واحد
تطعيم CDR وتطعيم الإطار	التكامل والتعبير الناجح	2-3 أسابيع
التعبير والتطهير	غلة عالية ونقاء	2-3 أسابيع
التحقق الوظيفي	تقييم التقارب والخصوصية	أسبوع واحد