منصة تطوير تجسيد الأجسام المضادة البشرية

تُثير الأجسام المضادة المُؤنسنة استجابة ضئيلة أو معدومة من الجهاز المناعي البشري. ووفقًا لشركة أبحاث السوق المعرفية، بلغ حجم سوق تأنيسية الأجسام المضادة عالميًا 92.5 مليون دولار أمريكي في عام 2024، ومن المتوقع أن ينمو بمعدل نمو سنوي مركب قدره 13.00% خلال الفترة من 2024 إلى 2031. تمتلك شركة ألفا لايف تك منصة متطورة لتأنيسية الأجسام المضادة، بنسبة نجاح تتجاوز 98%. لدينا استراتيجيات تأنيسية متعددة، تشمل تطعيم مناطق تحديد المكمل (CDR)، وتطعيم مناطق تحديد البادئات (SDR)، وإعادة ترتيب السلاسل، وعرض العاثيات، وغيرها، والتي يمكن اختيارها وفقًا لاحتياجات تجاربكم. لا نقتصر على توفير تأنيسية الأجسام المضادة من أنواع حيوانية متعددة، مثل الفئران والأرانب والألبكة والإبل، بل نوفر أيضًا تأنيسية الأجسام المضادة بأشكال متنوعة، مثل الأجسام المضادة أحادية السلسلة (scFv) وأجزاء Fab والأجسام النانوية. لدينا فريق فني متخصص لتقديم خدمات إنتاج الأجسام المضادة وتنقيها والتحقق من صحتها، بما في ذلك إنتاج الأجسام المضادة وحيدة النسيلة للفئران، وإنتاج الأجسام المضادة الكيميرية، وتعبير الأجسام المضادة المؤنسنة وتنقيها، بالإضافة إلى توصيفها وتحليلها. نضمن لكم إنتاج أجسام مضادة مؤنسنة بنسبة نجاح عالية ونقاء فائق وانخفاض في الاستجابة المناعية.

مقدمة في تحويل الأجسام المضادة إلى أجسام مضادة بشرية

يمكن استخدام العلاج بالأجسام المضادة وحيدة النسيلة لعلاج أمراض المناعة الذاتية والسرطان وأمراض أخرى. تُنتَج الأجسام المضادة وحيدة النسيلة عن طريق تحصين الفئران أو حيوانات أخرى. عند استخدامها لعلاج الأمراض في المراحل المتأخرة من إنتاج الأجسام المضادة وحيدة النسيلة، لا يمكن تجاهل قدرة الأجسام المضادة غير البشرية على إثارة استجابة مناعية. يتمثل المبدأ الأساسي لإضفاء الطابع البشري على الأجسام المضادة في دمج بقايا هيكلية غير بشرية، مثل مناطق تحديد التكامل شديدة التغير (CDRs)، في الهيكل البشري، مما ينتج عنه تسلسلات تحتفظ بخصائص الجسم المضاد الأصلي مع منع إثارة الاستجابة المناعية. لا يزال تحصين الفئران وإضفاء الطابع البشري على تسلسلها لاحقًا من المسارات الرئيسية لاكتشاف الأجسام المضادة العلاجية، والتي تمر بشكل أساسي بعدة مراحل: إنتاج الأجسام المضادة في الفئران، وتكوين أجسام مضادة وحيدة النسيلة هجينة، وجسم مضاد وحيد النسيلة هجين بين الفأر والإنسان، وعملية تطوير جسم مضاد وحيد النسيلة بشري بالكامل. في الوقت الحاضر، تشمل الأبحاث بشكل رئيسي الفئران المعدلة وراثيًا (نقل جينات الخلايا البائية البشرية إلى الفئران)، والفحص عالي الإنتاجية باستخدام تقنية عرض الخميرة أو العاثيات، وتطعيم CDR (إدخال CDRs الأبوية في التسلسلات البشرية)، وبقايا تحديد خاصة بالزرع (SDR)، وإعادة ترتيب الإطار، وغيرها من الطرق.

إضفاء الطابع البشري على الأجسام المضادة - ألفا لايفتك

الشكل 1: نظرة عامة تخطيطية على عملية تحويل الأجسام المضادة إلى أجسام مضادة بشرية من الأجسام المضادة الفأرية (المجالات الخضراء) إلى الأجسام المضادة البشرية بالكامل.

استراتيجية إضفاء الطابع البشري على الأجسام المضادة

تطعيم CDR

يتم تحقيق تطعيم CDR من خلال نظام تعبير الثدييات القائم على تقنية الحمض النووي المؤتلف، وتتمثل خطواته الرئيسية فيما يلي:

(1) تطوير الأجسام المضادة المقابلة في الفئران (أو مصادر غير بشرية)، وعزل الحمض النووي الذي يشفر الأجسام المضادة، واستنساخها في نواقل للتسلسل (أو إجراء تسلسل الخلية المفردة مباشرة).

(2) لتحديد تسلسل الحمض النووي المقابل لمنطقة CDR للأجسام المضادة ولتحديد خصوصية ارتباط الهدف؛

(3) تحديد منطقة الإطار البشري (FR) لزرع مناطق CDR غير البشرية وبناء جين جديد للأجسام المضادة.

(4) إجراء تحليل ثلاثي الأبعاد للصراعات بين مناطق CDR غير البشرية و FRs البشرية لتوليد طفرات استعادة لتثبيت الحلقة ومنع فقدان الألفة أو السلامة الهيكلية للأجسام المضادة المؤنسنة النهائية.

الشكل 2: نظرة عامة تخطيطية على تطعيم منطقة تحديد التكامل (CDR).

إعادة ترتيب الإطار

تعتمد عملية إعادة ترتيب الإطار على تقنية عرض العاثيات وتقنية فحص مكتبة العاثيات للحصول على أجسام مضادة عالية الألفة. تُستخدم قليل النوكليوتيدات التي تشفر أطر السلسلة الثقيلة للأجسام المضادة البشرية كقوالب، وتُشفر مناطق CDR كبادئات، ويُجرى تضخيم PCR لفصل سلسلتي ناتج PCR والحصول على حمض نووي أحادي السلسلة. يُعاد بناء الحمض النووي أحادي السلسلة لجينات VL وVH، المنقى باستخدام الستربتافيدين، على نواقل باستخدام إنزيم T4 DNA ligase وإنزيمات التقييد، ويُحضن مع العاثيات، ويُضخم بواسطة العاثيات، ثم تُنشأ مكتبة عرض العاثيات. تُجرى ثلاث جولات من الفحص باستخدام المستضدات المناسبة، ويتم التحقق من المستنسخات الإيجابية باستخدام اختبار ELISA وطرق أخرى.

الشكل 3: رسم تخطيطي لاستراتيجيات تطعيم منطقة تحديد التكامل (CDR) وإعادة ترتيب الإطار (FR) لتحسين جودة الصورة البشرية. (أ) الإجراء الرئيسي لتطعيم منطقة تحديد التكامل. (ب) العملية الرئيسية لإعادة ترتيب الإطار. (مصدر المرجع: وانغ يونغمي وآخرون، مقارنة بين "خلط الإطار" و "تطعيم CDR" في تحويل جسم مضاد فأري PD-1 إلى جسم مضاد بشري.)

عرض العاثيات

تعتمد عملية إنتاج الأجسام المضادة المؤنسنة على عرض أجسام مضادة محددة على سطح العاثيات، والتي تُبنى أساسًا من خلال مكتبات عاثيات الأجسام المضادة البشرية. مصدر هذه المكتبات هو الخلايا الليمفاوية أحادية النواة في الدم المحيطي البشري، والتي تُستخلص منها التسلسلات المطابقة. يحتوي هذا التسلسل على التسلسل البشري الكامل، ولكن الأجسام المضادة المنتجة هي أجزاء من الأجسام المضادة، مثل scFv وFab والأجسام النانوية.

سير عمل خدمة تحويل الأجسام المضادة إلى أجسام مضادة بشرية

خطوات الخدمة	معيار مراقبة الجودة	الجدول الزمني
عزل الأجسام المضادة	نقاء >95%	أسبوع إلى أسبوعين
تحليل التسلسل	التعرف الدقيق على التسلسلات غير البشرية	أسبوع واحد
تطعيم CDR وتطعيم الإطار	التكامل والتعبير الناجح	2-3 أسابيع
التعبير والتنقية	إنتاجية عالية ونقاء	2-3 أسابيع
التحقق الوظيفي	تقييم الألفة والخصوصية	أسبوع واحد