خدمة فحص المكتبات القائمة على الخلايا

تمتلك شركة Alpha Lifetech مجموعة واسعة من منهجيات فحص مكتبات عرض العاثيات المثبتة، بما في ذلك الفحص في الطور الصلب، والطور السائل باستخدام الخرز المغناطيسي، والفحص الخلوي، والفحص في الفئران الحية.

اتصل بنا

خدمة فحص المكتبات القائمة على الخلايا

فحص المكتبات الخلوية

تتيح هذه الطريقة فحص مستضدات الغشاء التي يصعب التعبير عنها أو تنقيتها. ويتم فحص مكتبة الأجسام المضادة المعروضة على العاثيات مباشرةً باستخدام خلايا سليمة نامية على طبقة أحادية، أو ملتصقة، أو معلقة، وذلك لفحص الأجسام المضادة النوعية لعلامات (مستضدات) محددة على سطح الخلية.

تشمل طرق فحص الخلايا بشكل رئيسي الفحص الاستنتاجي،فحص الاستيعاب الداخلي، وفحص المنافسة، وما إلى ذلك.

يشير الفحص الاستبعادي إلى ربط مكتبات الأجسام المضادة بالخلايا السالبة قبل تفاعلها مع الخلايا الموجبة المراد فحصها، وذلك لاستبعاد الأجسام المضادة للفيروسات التي لا ترتبط تحديدًا بالخلايا الموجبة. تُفحص الخلايا الموجبة أولًا، ثم تُستخدم الخلايا السالبة في عملية الامتصاص العكسي. يمكن استخدام هذه الطريقة لفحص الأجسام المضادة التي قد تُحدد جزيئات سطح الخلية التي يصعب عزلها وتنقيها أو التي لا تزال مجهولة، كما يمكن استخدام الأجسام المضادة المفحوصة للبحث عن مستضدات غير معروفة وعلامات محددة على سطح الخلايا السرطانية.

تتمثل طريقة فحص الاستيعاب الداخلي فيما يلي: أولاً، تُستخدم الخلايا السالبة للمستضد لاستخلاص وفحص مكتبة الأجسام المضادة، ثم يتم تحضين مكتبة الأجسام المضادة المستخلصة مع الخلايا الموجبة للمستضد، بحيث يتم استيعاب الجسم المضاد المحدد داخل الخلية، ثم يتم غسل الجسم المضاد المرتبط بمستضد الغشاء وتحلل الخلية لإطلاق الجسم المضاد داخل الخلايا، ويقوم العاثي المحدد الموجود في المحلول بإصابة البكتيريا للتكاثر ثم الانتقال إلى الجولة التالية من الفحص.

هناك أيضًا فحص تنافسي وطريقتان رئيسيتان لإعادة التدوير هما فرز الخلايا المنشطة بالفلورة (FACS) وطريقة فصل الخلايا المنشطة بالفلورة (طريقة فصل الخلايا المناعية المغناطيسية) والتي يمكن استخدامها للفحص التنافسي.

عرض العاثيات

أصبح اكتشاف الأجسام المضادة ذا أهمية متزايدة في الطب الحديث. منذ عام 1990، استُخدمت أشكال مختلفة من الأجسام المضادة لإنشاء مكتبات العاثيات، بما في ذلك VHs وVHHs وscFvs وdiabodies ومكتبات الأجسام المضادة Fab. تُدمج هذه الأجزاء من الأجسام المضادة مع G3P لعاثية M13، ومن خلال استنساخ أعداد كبيرة من الجينات التي تُشفّر جزءًا من الجسم المضاد، يُمكن توليد مكتبات كبيرة لعرض الأجسام المضادة على العاثيات، والتي يُمكن من خلالها اختيار العديد من الأجسام المضادة المتنوعة.

توجد طرق مختلفة لاكتشاف الأجسام المضادة، لكن الفحص عالي الإنتاجية يُستخدم على نطاق أوسع في العلوم الطبية. ويمكن الحصول على تنوع كبير في ذخيرة الأجسام المضادة باستخدام هذه الطريقة. كما أن دمجها مع طرق فحص مكتبات الأجسام المضادة التقليدية يُحسّن جودة فحص مكتبات عرض العاثيات.

بحسب أنواع العاثيات، يمكن تقسيمها إلى M13 وT7 وT4 وλ وغيرها. وبحسب نوع المكتبة، يمكن تقسيمها إلى مكتبة ببتيدات عشوائية، ومكتبة cDNA، ومكتبة أجسام مضادة، ومكتبة بروتينات. تتميز تقنية عرض العاثيات بسهولة التشغيل وانخفاض التكلفة.

بنية العاثية T7-9-11-24: الأسطوانة الداخلية المدببة والذيل

مخطط عاثية M13-أ-العاثية من النوع البري-ب-العاثية التي تعرض نسخًا متعددة التكافؤ

الشكل 1: تمثيل تخطيطي لبكتيريا العاثية T7

(مرجع: سيرور، فيليب ورايت، إيلينا وهاكالا، كيفن ووينتروب، سوزان. (2008). دليل على امتداد ذيل العاثية T7 أثناء حقن الحمض النووي. ملاحظات بحثية في BMC. 1. 36. 10.1186/1756-0500-1-36. )

الشكل 2: تمثيل تخطيطي لبكتيريا العاثية M13

(مرجع: بالما، ماركو. (2023). جوانب اللقاحات القائمة على العاثيات لتحصين البروتين والمستضدات. اللقاحات. 11. 436. 10.3390/vaccines11020436. )

طرق أخرى لفحص عرض العاثيات

الفحص في الطور الصلب

تعتمد طريقة الفحص في الطور الصلب على إثراء العاثيات ذات الألفة العالية عن طريق تغليفها على صفيحة إنزيمية أو وسط صلب آخر. بعد ذلك، يتم الحصول على العاثية المستهدفة من خلال 3-5 دورات من "الربط-الإذابة-الإثراء"، والتي يمكن استخدامها مباشرةً في التسلسل عالي الإنتاجية وتسلسل البروتين. بالمقارنة مع فحص المستضدات في الطور السائل، يتم تدمير عدد أكبر من المستضدات وبعض محددات المستضد.

الفحص في الطور السائل

تُجرى عملية فحص المستضدات في الطور السائل عن طريق حضانة مكتبات عرض العاثيات المستهدفة والمضادة الموسومة بالبيوتين، ثم التقاط العاثيات المرتبطة باستخدام حبيبات مغناطيسية. يتميز فحص الطور السائل بالكفاءة العالية والإثراء، إلا أن الأجسام المضادة الناتجة تكون أقل تخصصًا.

تعتمد طريقة انتقاء العاثيات على الاحتياجات التجريبية، وكلها سيكون لها تأثير معين على تأثير إنتاج الأجسام المضادة المعروضة على العاثيات.

مقطع نسيجي أو فحص حيوي

تُعدّ هذه الطريقة مناسبة عمومًا لعزل الأجسام المضادة التي تُمثّل مؤشرات نوعية للأنسجة، مثل الخلايا البطانية للأورام. في هذه الطريقة، تُحقن مكتبات الأجسام المضادة المُوسومة إشعاعيًا بجرعات منخفضة في الوريد للحيوانات، ثم تُجمع الأعضاء أو الأنسجة المستهدفة، وتُستخلص العاثيات المرتبطة بها بشكلٍ نوعي للتعبير عنها بعد إصابتها ببكتيريا الإشريكية القولونية. بعد ذلك، تُكشف المنتجات المُعبَّر عنها مناعيًا باستخدام مقاطع نسيج العضو المستهدف للحصول على أجسام مضادة نوعية ذات ألفة فعلية.

الفحص الانتقائي للعدوى

تعتمد هذه الطريقة على الحصول على عاثيات بكتيرية محددة من خلال الفرز والتضخيم. توجد طريقتان: الأولى هي استبدال الطرف الأميني لبروتين PⅢ في غلاف العاثية بجزء من الجسم المضاد المعروض، ثم ربط جزيء المستضد المستهدف المراد فرزه بالطرف الأميني لبروتين PⅢ كمسبار فرز. أما الثانية، فتعتمد على دمج جزيئات المستضد المراد فرزها مع زوائد F في بكتيريا الإشريكية القولونية، حيث يرتبط الجسم المضاد الخاص بالعاثية بزوائد F المعدلة، مما يعيد قدرة زوائد F على إحداث العدوى، وبالتالي تتمكن العاثية من دخول الخلية والتكاثر.

بإمكان شركة ألفا لايفتك توفير

تُعدّ شركة ألفا لايفتك رائدةً في مجال تقنية عرض العاثيات منذ سنوات عديدة. وقد طورت منصةً مثاليةً ومستقرةً لهذه التقنية، مما يوفر الوقت اللازم للبحث العلمي أو مشاريع البحث، ويُسهّل عملية الإنتاج اللاحقة. كما تُقدّم ألفا لايفتك لعملائها خدماتٍ مثل إنتاج الأجسام المضادة vhh، وإنتاج الأجسام المضادة scFv، وإنتاج الأجسام المضادة Fab.

تمتلك شركة ألفا لايف تيك منصة عرض شاملة لفيروسات M13/T7 لضمان بناء وإنتاج مكتبات الأجسام المضادة. كما نوفر خدمات مخصصة، مثل إنتاج الأجسام المضادة أحادية السلسلة (scFv)، والفحص عالي الإنتاجية لتلبية احتياجاتكم.تمتلك شركة Alpha Lifetech مجموعة واسعة من منهجيات فحص مكتبات عرض العاثيات المثبتة، بما في ذلك الفحص في الطور الصلب، والطور السائل باستخدام الخرز المغناطيسي، والفحص الخلوي، والفحص في الفئران الحية.

سير عمل خدمة فحص المكتبات القائمة على الخلايا

محتوى الخدمة	معيار مراقبة الجودة	الجدول الزمني
تغليف المستضد؛ تم إجراء الفحص القائم على الخلايا باستخدام خطوط خلايا CHO (مبيض الهامستر الصيني) أو HEK (الكلى الجنينية البشرية)، وتم تحضين مكتبات عرض العاثيات مع الخلايا. ثلاث جولات افتراضية من الفحص: فحص الضغط، وإزالة قصوى للأجسام المضادة المحددة؛ تم اختيار العاثيات المضخمة أحادية الاستنساخ، والتعبير المحفز بواسطة IPTG، والمستنسخات الإيجابية في اختبار ELISA؛ تم اختيار جميع المستنسخات الإيجابية لإجراء تسلسل الجيل التالي (NGS)؛	معايير إيجابية اختبار ELISA: P/N>3؛ معايير فحص VHH: يختلف تسلسل الأحماض الأمينية CDR	2-3 أسابيع