خدمة فحص المكتبات القائمة على الخلايا

تتمتع شركة Alpha Lifetech بمجموعة واسعة من منهجيات فحص مكتبة عرض البكتيريا العاثية المثبتة، بما في ذلك الفحص باستخدام حبيبات مغناطيسية في الطور الصلب والطور السائل والفحص الخلوي وفحص الفئران الحية.

اتصل بنا

خدمة فحص المكتبات القائمة على الخلايا

فحص المكتبة القائمة على الخلايا

يمكن لهذه الطريقة فحص مستضدات الغشاء التي يصعب التعبير عنها أو تنقيتها. تُفحص مكتبة الأجسام المضادة للعاثيات مباشرةً باستخدام خلايا سليمة أحادية الطبقة، أو ملتصقة، أو معلقة، لفحص أجسام مضادة محددة لعلامات (مستضدات) محددة على سطح الخلية.

تشمل طرق فحص الخلايا بشكل أساسي فحص الاستنتاج،فحص الاستيعاب، وفحص المنافسة، وما إلى ذلك.

يشير الفحص الطرحي إلى ربط مجموعات الأجسام المضادة بالخلايا السالبة قبل التفاعل مع الخلايا الموجبة المراد فحصها، وذلك لاستبعاد الأجسام المضادة للعاثيات غير المرتبطة تحديدًا بالخلايا الموجبة. تُفحص الخلايا الموجبة فحصًا أماميًا، ثم تُستخدم الخلايا السالبة للامتصاص العكسي. يمكن استخدام هذه الطريقة لفحص الأجسام المضادة التي يمكنها الحصول على جزيئات سطح الخلية التي يصعب عزلها وتنقيتها أو غير المعروفة، واستخدام الأجسام المضادة المفحوصة للبحث بشكل أعمق عن مستضدات غير معروفة وعلامات محددة على سطح الخلايا السرطانية.

طريقة فحص الاستيعاب هي: أولاً، يتم استخدام الخلايا السلبية للمستضد لاستخلاص وفحص مكتبة الأجسام المضادة، ثم يتم تحضين مكتبة الأجسام المضادة المختزلة مع الخلايا الإيجابية للمستضد، بحيث يتم استيعاب الجسم المضاد المحدد في الخلية، ثم يتم غسل الجسم المضاد للعاثية المرتبط بمستضد الغشاء ويتم تحليل الخلية لإطلاق الجسم المضاد داخل الخلايا، ويقوم العاثية المحددة في المحلول المحلول بإصابة البكتيريا للتوسع ثم الانتقال إلى الجولة التالية من الفحص.

هناك أيضًا فحص تنافسي وطريقتان رئيسيتان لإعادة التدوير هما فرز الخلايا المنشطة بالفلورسنت (FACS) وطريقة فصل الخلايا المنشطة بالفلورسنت (طريقة فصل الخلايا المناعية المغناطيسية) والتي يمكن استخدامها في الفحص التنافسي.

فحص عرض البكتيريا العاثية

أصبح اكتشاف الأجسام المضادة ذا أهمية متزايدة في الطب الحديث. منذ عام ١٩٩٠، استُخدمت صيغ مختلفة من الأجسام المضادة لبناء مكتبات العاثيات، بما في ذلك مكتبات VHs وVHHs وscFvs والأجسام المضادة diabodies ومكتبات الأجسام المضادة Fab. تُدمج شظايا الأجسام المضادة هذه مع G3P للعاثية M13، وباستنساخ أعداد كبيرة من الجينات التي تُشفّر شظية جسم مضاد، يمكن إنشاء مكتبات كبيرة من الأجسام المضادة لعرض العاثيات، والتي يمكن من خلالها اختيار العديد من الأجسام المضادة المتنوعة.

توجد طرق مختلفة لاكتشاف الأجسام المضادة، إلا أن الفحص عالي الإنتاجية يُستخدم أكثر في العلوم الطبية. يمكن الحصول على تنوع كبير في ذخيرة الأجسام المضادة بهذه الطريقة. ويمكن تحسين جودة فحص مكتبات عرض العاثيات باستخدام طرق الفحص التقليدية لمكتبات الأجسام المضادة.

وفقًا لأنواع العاثيات، يمكن تقسيمها إلى أنظمة M13، T7، T4، λ، وغيرها. أما بالنسبة لنوع المكتبة، فتشمل مكتبة ببتيد عشوائي، ومكتبة cDNA، ومكتبة أجسام مضادة، ومكتبة بروتين. تتميز تقنية عرض العاثيات بسهولة التشغيل وقلة التكلفة.

بنية البكتيريا العاثية T7-9-11-24-الأسطوانة المخروطية الداخلية والذيل

مخطط بكتيريا فاج من النوع البري M13a، وفاج من النوع b يعرض نسخًا متعددة التكافؤ

الشكل 1. تمثيل تخطيطي لبكتيريا T7

(مرجع:سيروير، فيليب ورايت، إيلينا وهاكالا، كيفن ووينتراوب، سوزان. (2008). دليل على امتداد ذيل العاثية T7 أثناء حقن الحمض النووي. ملاحظات بحثية من BMC. 1. 36. 10.1186/1756-0500-1-36.)

الشكل 2: تمثيل تخطيطي لبكتيريا M13

(مرجع:بالما، ماركو. (2023). جوانب اللقاحات القائمة على العاثيات لتحصين البروتين والنمط المصلي. اللقاحات. 11. 436. 10.3390/vaccines11020436.)

طرق أخرى لفحص عرض البكتيريا العاثية

فحص الطور الصلب

تُثري طريقة فحص الطور الصلب العاثيات البكتيرية بألفة عالية عن طريق تغليفها بلوحة إنزيمية أو بيئات أخرى في الطور الصلب. بعد ذلك، يتم الحصول على العاثية المستهدفة من خلال 3-5 دورات من "الربط - الشطف - الإثراء"، والتي يمكن استخدامها مباشرةً في عمليات التسلسل عالية الإنتاجية اللاحقة وتسلسل البروتين. بالمقارنة مع فحص المستضد في الطور السائل، يتم تدمير عدد أكبر من المستضدات وبعض مُستضدات المستضد.

فحص الطور السائل

يُجرى فحص المستضد في الطور السائل عن طريق حضانة مكتبات عرض العاثيات المستهدفة والأجسام المضادة المُوسومة بالبيوتين، والتقاط العاثيات المرتبطة باستخدام خرزات مغناطيسية. يتميز فحص الطور السائل بكفاءة عالية وإثراء، إلا أن الأجسام المضادة المُنتَجة تكون أقل تحديدًا.

تعتمد طريقة التنقيب عن البكتيريا على الاحتياجات التجريبية، والتي سيكون لها جميعًا تأثير معين على تأثير إنتاج الأجسام المضادة لعرض البكتيريا.

قسم الأنسجة أو الفحص الحيوي

هذه الطريقة مناسبة عمومًا لعزل الأجسام المضادة التي تُعدّ علامات محددة لأنسجة مثل الخلايا البطانية الورمية. في هذه الطريقة، تُحقن مجموعات أجسام مضادة فاجيّة مُعَلَّمة إشعاعيًا بجرعات منخفضة عن طريق الوريد في الحيوانات، وتُجمع الأعضاء أو الأنسجة المستهدفة، وتُستخلَص العاثيات المرتبطة تحديدًا للتعبير عنها بعد الإصابة بالإشريكية القولونية. ثم تُكتَشَف النواتج المُعَبَّر عنها مناعيًا باستخدام مقاطع أنسجة العضو أو الأنسجة المستهدفة المقابلة للحصول على أجسام مضادة محددة ذات ألفة فعلية.

فحص العدوى الانتقائية

تعتمد هذه الطريقة على الحصول على عاثيات بكتيرية محددة عن طريق الفحص والتضخيم. هناك طريقتان: الأولى هي استبدال الطرف الأميني لبروتين PⅢ لغلاف العاثية بقطعة الجسم المضاد المعروضة، ثم يُوصل جزيء المستضد المستهدف المراد فحصه بالطرف الأميني لبروتين PⅢ كمسبار فحص. والثانية هي دمج جزيئات المستضد المراد فحصها على خياشيم F لبكتيريا الإشريكية القولونية، حيث يرتبط الجسم المضاد الخاص بالعاثية بخياشيم F المعدلة، مما يُعيد قدرة خياشيم F على التوسط في العدوى، مما يسمح للعاثية بدخول الخلية والتكاثر.

يمكن لشركة ألفا لايف تيك أن تقدم

لطالما انخرطت شركة ألفا لايف تيك في مجال تقنية عرض البكتيريا العصوية (Phage). وقد طورت منصة عرض مثالية ومستقرة، تُوفر الوقت والجهد اللازمين للبحث العلمي أو أبحاث المشاريع، وتُسهّل الإنتاج اللاحق. كما تُقدم ألفا لايف تيك خدماتٍ للعملاء، مثل إنتاج الأجسام المضادة vhh وscFv وFab.

تمتلك ألفا لايف تيك منصة عرض شاملة لبكتيريا M13/T7 لضمان بناء وإنتاج مكتبات الأجسام المضادة. كما نقدم خدمات مخصصة، مثل إنتاج scFv للأجسام المضادة، وخدمات الفحص عالية الإنتاجية لتلبية احتياجاتكم.تتمتع شركة Alpha Lifetech بمجموعة واسعة من منهجيات فحص مكتبة عرض البكتيريا العاثية المثبتة، بما في ذلك الفحص باستخدام حبيبات مغناطيسية في الطور الصلب والطور السائل والفحص الخلوي وفحص الفئران الحية.

سير عمل خدمة فحص المكتبة القائمة على الخلايا

محتوى الخدمة	معيار مراقبة الجودة	الجدول الزمني
تغليف المستضد؛ تم إجراء الفحص القائم على الخلايا باستخدام خطوط خلايا CHO (مبيض الهامستر الصيني) أو HEK (الكلى الجنينية البشرية)، وتم حضن مكتبات عرض البكتيريا مع الخلايا. 3 جولات افتراضية من الفحص: فحص الضغط، وإزالة الحد الأقصى من الأجسام المضادة المحددة؛ تم اختيار استنساخات مفردة مضخمة، مستحثة بـ IPTG واستنساخات إيجابية لـ ELISA؛ تم اختيار جميع النسخ الإيجابية لتسلسل NGS؛	معايير ELISA الإيجابية: P/N>3؛ معايير فحص VHH: تسلسل الأحماض الأمينية CDR مختلف	2-3 أسابيع