خدمة إنشاء مكتبة الأجسام المضادة المناعية

مكتبة العاثيات للأجسام المضادة المناعية

تُنتَج معظم تقنيات تحضير الأجسام المضادة وحيدة النسيلة عن طريق تحصين الفئران وتحضير الخلايا الهجينة، وهي تقنيات راسخة. ومع ذلك، فقد واجه إنتاج الأجسام المضادة وحيدة النسيلة غير الفأرية باستخدام تقنية الخلايا الهجينة عقباتٍ بسبب نقص سلالات الخلايا الشريكة الاندماجية المناسبة أو صعوبة نمو واستنساخ الخلايا الاندماجية. وبينما يُمكن الحصول على بعض سلالات الخلايا الشريكة الاندماجية والأجسام المضادة وحيدة النسيلة من الحيوانات، مثل الجرذان والأرانب، إلا أن هذه التقنية ليست بنفس نضج الخلايا الهجينة في الفئران، ولا تُستخدم على نطاق واسع.

تُمكّن تقنية عرض الأجسام المضادة الفاجية من اختيار مستنسخات الأجسام المضادة المستهدفة بسرعة في المختبر من بين عدد كبير من شظايا الأجسام المضادة المعروضة على سطح الفاج. ويتم اختيار وتضخيم وإثراء مستنسخات الأجسام المضادة المرتبطة بالهدف من مكتبات الأجسام المضادة من خلال الفحص البيولوجي المتكرر.

يُعدّ وجود مكتبة أجسام مضادة عالية الجودة شرطًا أساسيًا لنجاح توليد الأجسام المضادة من خلال عرض العاثيات، ويمكن عزل الأجسام المضادة من مكتبات أجسام مضادة بسيطة أو من مكتبات أجسام مضادة مناعية. يمكن تصنيع أو بناء الأولى من بنوك الخلايا البائية للحيوانات غير المحصنة، وتتطلب درجة عالية من التنوع لإنتاج اقترانات محددة للمستضدات المستهدفة. أما الثانية، فتُصنع من الخلايا البائية للحيوانات المحصنة، وهي غنية بالاقترانات الناتجة عن الاستجابات المناعية الخلطية. عند تحصين حيوانات التجارب (مثل الفئران أو الأرانب) لبناء مكتبات مناعية، يُقتل الحيوان بعد إكمال برنامج التحصين، ويُزال طحاله. يحتوي الطحال على خلايا بائية كبيرة وخلايا بلازما، وبالتالي فهو مصدر جيد للعديد من جينات الأجسام المضادة، بما في ذلك الجينات التي تُشفّر الأجسام المضادة الخاصة بالهدف.

إنشاء مكتبة العاثيات للأجسام المضادة المناعية

الجسم المضاد وحيد النسيلة (mAb) هو جسم مضاد متجانس للغاية، يُنتج من استنساخ خلية بائية واحدة، ويستهدف نمطًا محددًا فقط باستخدام تقنية الورم الهجين. تشمل أنواع الأجسام المضادة وحيدة النسيلة الفأرية، والأجسام المضادة وحيدة النسيلة الكيميرية، والأجسام المضادة وحيدة النسيلة البشرية، والأجسام المضادة وحيدة النسيلة البشرية بالكامل. تشمل تقنيات تحضير الأجسام المضادة وحيدة النسيلة تقنية الورم الهجين، وتقنية عرض العاثيات، وتقنية إنتاج الأجسام المضادة وحيدة الخلية البائية. من بين هذه التقنيات، تُعد تقنية الورم الهجين أكثر تطورًا واستخدامًا، وتتميز بانخفاض تكلفة البحث فيها.

تُستخدم الأجسام المضادة وحيدة النسيلة في الوقاية من الأمراض وتشخيصها وعلاجها، وخاصةً في العلاج السريري للأورام. وقد تمت الموافقة على أول جسم مضاد وحيد النسيلة علاجي (لمنع رفض الجسم لزراعة الكلى) عام ١٩٨٦. ثم تمت الموافقة على العديد من منتجات الأجسام المضادة وحيدة النسيلة لعلاج أمراض مختلفة (مثل الربو، والتهاب المفاصل الروماتويدي، وغيرها).

تُستخدم حاليًا العديد من صيغ الأجسام المضادة لإنشاء مكتبات عرض فاجات الأجسام المضادة، بما في ذلك مكتبة الأجسام المضادة scFv، ومكتبة الأجسام المضادة Fab، ومكتبة الأجسام المضادة VHH. يتكون scFv من نطاقات هيكلية VH وVL، وهي أجسام مضادة أحادية السلسلة تُستخدم لإنشاء مكتبات الأجسام المضادة scFv. يتميز scFv بعمر نصف قصير ومناعة منخفضة. تتكون مكتبة الأجسام المضادة Fab من VH وVL وCL وCH1، مما يُمكّنها من استبعاد الأجسام المضادة المثالية ذات الألفة العالية بسرعة. تُشكل مكتبة الأجسام النانوية حاليًا أصغر وحدة يمكنها الارتباط بمستضد VHH المستهدف، وتتميز VHH ببنية بسيطة، وسهولة تحضيرها وتعبيرها.

لبناء مجموعة مناعية، يجب أولاً تحصين حيوانات الألبكة السليمة. عادةً، تُعطى الجرعة المناعية المحددة وفقًا لإجراء التحصين القياسي، وتعتمد على الوزن الجزيئي للمستضد والسمية المناعية. يُنصح باستخدام البروتينات المُعاد تركيبها القابلة للذوبان والمطوية بشكل صحيح، بالإضافة إلى تحصين الحمض النووي. يمكن أيضًا استخدام مزيج من البروتينات لتحصين الحيوانات. يمكن تحصين عدة حيوانات، مما يزيد من احتمالية اكتساب الأجسام النانوية بنجاح لأجسام مضادة محددة، والحصول على مكتبة أكبر من الأجسام النانوية.

أظهرت بعض الدراسات نسبةً أعلى من الأجسام المضادة لـ HCAb مقارنةً بالأجسام المضادة التقليدية لدى الإبل أو الجمال العربية، مقارنةً باللاما والألبكة. في الحالات التي يصعب فيها الحصول على المستضدات، تُعدّ الفئران المعدلة وراثيًا بديلًا جيدًا للإبل.

الشكل 1 رسم تخطيطي لتوليد الأجسام المضادة وحيدة النسيلة من أخذ العينات إلى عزل الأجسام المضادة.(المصدر المرجعي: أناأجسام مضادة للأمراض المعدية للتطبيقات الطبية الحيوية: مراجعة موجزة لمكتبة الأجسام المضادة المناعية - PubMed (nih.gov))

تطبيق بناء مكتبة الأجسام المضادة المناعية

اكتشاف الأجسام المضادة

أصبح اكتشاف الأجسام المضادة ذا أهمية متزايدة في الطب الحديث. توجد مناهج مختلفة لاكتشاف الأجسام المضادة، إلا أن تقنية عرض العاثيات تُستخدم بشكل أكبر في العلوم الطبية. منذ عام ١٩٩٠، استُخدمت صيغ مختلفة من الأجسام المضادة لبناء مكتبات العاثيات، بما في ذلك VHs وVHHs وscFvs والأجسام المضادة للفيروسات القهقرية (diabodies) وأجسام Fab المضادة.
مكتبة الببتيدات العاثية

تسمح مكتبات الببتيدات العاثية بالتحديد السريع لتسلسل النمط البروتيني وأصبحت أداة قوية للتحقيق في التفاعل بين النمط البروتيني ومستقبلات المستضد
إنتاج شظايا الأجسام المضادة

يتم دمج أجزاء الأجسام المضادة مع G3P من البكتيريا العصوية M13، ومن خلال استنساخ أعداد كبيرة من الجينات التي تشفر جزء من الجسم المضاد، يمكن إنشاء مكتبات كبيرة من الأجسام المضادة لعرض البكتيريا العصوية والتي يمكن من خلالها اختيار العديد من الأجسام المضادة المتنوعة.
نظام عرض البكتيريا العاثية T7

يتمتع نظام عرض البكتيريا العصوية T7 بالعديد من المزايا، بما في ذلك البساطة والسلامة العالية والاستقرار وسهولة التخزين والنقل، لذلك يتم استخدام النظام في اللقاحات الوقائية والعلاجية،يمكنه الكشف عن مستضدات مختلفة، مثل مستضدات السطح للكائنات الحية الدقيقة المسببة للأمراض ومستضدات السرطان.

يمكن لشركة ألفا لايف تيك أن تقدم

لطالما انخرطت شركة ألفا لايف تيك في مكتبة عرض البكتيريا العصوية (Phage). وقد بنت منصة عرض مثالية ومستقرة لتكنولوجيا البكتيريا العصوية، مما يوفر الوقت للأبحاث العلمية أو مشاريع البحث، ويسهل الإنتاج اللاحق. كما تقدم ألفا لايف تيك خدمات للعملاء، مثل إنتاج الأجسام النانوية، وإنتاج الأجسام المضادة SCFV، وإنتاج الأجسام المضادة Fab.

تمتلك ألفا لايف تيك منصة عرض شاملة لبكتيريا T7 لضمان بناء وإنتاج مكتبات الأجسام المضادة. كما نقدم خدمات مخصصة، مثل إنتاج الأجسام المضادة بتقنية Fab والأجسام النانوية، لتلبية احتياجاتكم.

سير عمل إنشاء مكتبة الأجسام المضادة المناعية

خطوات	مواصفة
الخطوة 1: اختبار المناعة واختبار ELISA	1) الحيوانات التجريبية المناعية (التطعيم القياسي 5 حقن)؛ 2) الكشف عن عيار الأجسام المضادة في المصل 4 و5 على التوالي، إذا كان الكشف عن عيار الأجسام المضادة للجرعة الرابعة يلبي المتطلبات (بروتين يلبي عيار المصل ELISA >10^5؛ جزيء صغير >10^4)، ثم قبل 7 أيام من جمع الدم، يتم التحصين مرة أخرى، إذا لم يتم تلبية المتطلبات، يستمر التحصين الروتيني (إرسال نتائج اختبار العيار والمصل المناعي إلى العميل، وفقًا لنتائج اختبار العيار، يتم اختيار الحيوانات المصلية الإيجابية لعمليات المتابعة) تم تحديد العيار وتم عزل PBMC عن طريق أخذ عينات الدم
الخطوة 2: خدمة فحص الأجسام المضادة	1) باستخدام cDNA للمكتبة كقالب، تم تضخيم جين V بواسطة تفاعل البوليميراز المتسلسل ثلاثي العجلات 2) بناء وتحويل ناقل عرض البكتيريا العصوية: ربط جين V بناقل عرض البكتيريا العصوية، وتحويل الصدمة الكهربائية للبكتيريا المضيفة، وبناء مكتبة الأجسام المضادة 3) التعريف: تم اختيار 24 مستنسخًا عشوائيًا وتم تحديد المعدل الإيجابي بواسطة تفاعل البوليميراز المتسلسل 4) 3 جولات افتراضية من الفحص: تسلسل NGS للجولة الثالثة من المنتجات؛ وفي الوقت نفسه، تم اختيار 192 استنساخًا للتعبير التحريضي والكشف عن ELISA. 5) تم اختيار جميع النسخ الإيجابية لتسلسل الجينات (>60 نسخة إيجابية لكل فحص، حتى 192)؛ 6) التسليم: تسلسل الأجسام المضادة Fab 5-10 (تسلسل غير متكرر)؛ تقرير المختبر، بيانات الاختبار الخام، مكتبة العاثيات
الخطوة 3: التعبير عن الأجسام المضادة المؤتلفة	1) وفقًا لنتائج التحقق من العميل، نوصي العميل بإعادة تنظيم تعبير 5 تسلسلات؛ 2) إنشاء متجه + تعبير الخلية + التنقية