خدمة إنشاء مكتبة عرض العاثيات

تمتلك شركة ألفا لايفتك منصة عرض شاملة لفيروسات M13/T7 لضمان بناء وإنتاج مكتبات الأجسام المضادة. كما نوفر خدمات مخصصة، مثل إنتاج الأجسام المضادة أحادية السلسلة (scFv)، لتلبية احتياجاتكم.

اتصل بنا

خدمة إنشاء مكتبة عرض العاثيات

تُعدّ شركة ألفا لايفتك رائدةً في مجال تقنية عرض العاثيات منذ سنوات عديدة. وقد طورت منصةً مثاليةً ومستقرةً لهذه التقنية، مما يوفر الوقت اللازم للبحث العلمي أو مشاريع البحث، ويُسهّل عملية الإنتاج اللاحقة. كما تُقدّم ألفا لايفتك لعملائها خدماتٍ مثل إنتاج الأجسام المضادة vhh، وإنتاج الأجسام المضادة scFv، وإنتاج الأجسام المضادة Fab.

تمتلك شركة ألفا لايف تيك منصة عرض شاملة لفيروسات M13/T7 لضمان بناء وإنتاج مكتبات الأجسام المضادة. كما نوفر خدمات مخصصة، مثل إنتاج الأجسام المضادة أحادية السلسلة (scFv) وفحص الأجسام المضادة عالي الإنتاجية، لتلبية احتياجاتكم.

مقدمة عن عرض العاثيات

تقنية عرض العاثيات هي تقنية تستخدم العاثيات (فيروس يصيب البكتيريا) للبحث عن جزيئات ربط وظيفية لبروتينات أو ببتيدات محددة. تشمل تقنيات بناء مكتبات الأجسام المضادة للعاثيات بناء مكتبات الأجسام المضادة من نوع Fab، ومكتبات الأجسام المضادة من نوع scFv، ومكتبات الأجسام النانوية، وغيرها. ويمكن تقسيم العاثيات، بحسب أنواعها، إلى M13 وT7 وT4 وλ وغيرها. أما بحسب نوع المكتبة، فيمكن تقسيمها إلى مكتبات ببتيدات عشوائية، ومكتبات cDNA، ومكتبات أجسام مضادة، ومكتبات بروتينات. تتميز تقنية عرض العاثيات بسهولة التشغيل وانخفاض التكلفة. مع ذلك، تحد هذه التقنية من تنوع الجينات الجزيئية في المكتبة، إذ لا يمكنها التعبير عن تسلسلات طويلة جدًا.

في الوقت الحاضر، تُستخدم تقنية عرض العاثيات على نطاق واسع. ومن بينها، هناك إنجازات كبيرة في البحث والتطوير للقاحات جديدة (لقاحات اصطناعية منخفضة التكلفة وفعالة)، وتطوير الأدوية المضادة للأجسام (فحص مثبطات الإنزيم)، ونقل إشارات الخلية (فحص الحواتم المحاكاة)، وبحث حواتم المستضد (تحضير الأجسام المضادة وحيدة النسيلة).

مقدمة عن العاثية T7

العاثية T7 عبارة عن حمض نووي مزدوج السلسلة، يبلغ طوله 40 كيلوبايت، ومُغلّف بغلاف بروتيني قطره 60 نانومتر. الرابط بين الرأس والذيل عبارة عن بنية حلقية تتكون من نسخ متعددة من البروتين السكري gp8. يشكل رأس العاثية T7 وقلبها بنية أسطوانية ترتبط بالبروتين السكري gp8، مما يسمح بربط الرأس والذيل.

الشكل 1: تمثيل تخطيطي لبكتيريا العاثية T7.(مرجع: التطورات في نظام عرض العاثيات T7 (مراجعة))

مقدمة عن العاثية M13

ينتمي العاثي البكتيري M13 إلى مجموعة من العاثيات الخيطية تُعرف مجتمعةً باسم عاثيات Ff. يبلغ طوله 900 نانومتر وعرضه 6.5 نانومتر. يحتوي على جينوم من الحمض النووي أحادي السلسلة (ssDNA) بطول 6407 زوجًا قاعديًا، ويتألف من تسعة جينات تُشفّر 11 بروتينًا مختلفًا. من بينها، خمسة بروتينات هي بروتينات الغلاف، وستة بروتينات أخرى تُشارك في تضاعف العاثي وتجميعه. أعلى تركيز لبروتينات الغلاف هو بروتين القفيصة G8P، الذي يتكون من حوالي 2700 وحدة بروتينية ويُشكّل غلافًا حول الكروموسوم.

الشكل 2: تمثيل تخطيطي للبكتيريا العاثية M13.(مرجع: أساسيات تقنية عرض العاثيات للأجسام المضادة)

مقدمة إلى مكتبة الأجسام المضادة بتقنية عرض العاثيات

أصبح اكتشاف الأجسام المضادة ذا أهمية متزايدة في الطب الحديث. توجد طرق مختلفة لاكتشاف الأجسام المضادة، ولكن مكتبة الأجسام المضادة المعروضة على العاثيات هي الأكثر استخدامًا في العلوم الطبية.

منذ عام 1990، استُخدمت أشكال مختلفة من الأجسام المضادة لإنشاء مكتبات العاثيات، بما في ذلك الأجسام المضادة من نوع VH وVHH وscFv والأجسام المضادة ثنائية السلسلة وأجسام Fab المضادة. تُعد أجسام scFv، المكونة من نطاقي VH وVL البنيويين، أجسامًا مضادة أحادية السلسلة تُستخدم لإنشاء مكتبات الأجسام المضادة من نوع scFv. تتميز أجسام scFv بعمر نصف قصير ومناعة منخفضة. تتكون مكتبة أجسام Fab المضادة من VH وVL وCL وCH1، مما يُتيح فحصًا سريعًا للأجسام المضادة المثالية ذات الألفة العالية. تُشكل وحدة VHH، وهي أصغر وحدة قادرة على الارتباط بالمستضد المستهدف، مكتبة الأجسام النانوية حاليًا. تتميز VHH ببساطة تركيبها، وصغر حجمها، وذوبانها العالي، واستقرارها الجيد، وسهولة تحضيرها وتعبيرها. تبرز مكتبات الأجسام النانوية الاصطناعية (Nb) كبديل جذاب لتحصين الحيوانات نظرًا لاستقرارها وألفة ارتباطها العالية. بشكل عام، يتم دمج أجزاء الأجسام المضادة هذه مع G3P الخاص بفيروس M13، ومن خلال استنساخ أعداد كبيرة من الجينات التي تشفر جزءًا من الأجسام المضادة، يمكن إنشاء مكتبات كبيرة لعرض الأجسام المضادة على العاثيات والتي يمكن من خلالها اختيار العديد من الأجسام المضادة المتنوعة.

عملية بناء مكتبة العاثيات

تتم عملية بناء مكتبة العاثيات على النحو التالي: تُصمم بادئات محددة لتضخيم الحمض النووي باستخدام تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR)، حيث تُربط النواتج بواسطة إنزيم مع ناقل العاثية T7/M13، وبذلك يتم بناء بلازميد العاثية المؤتلف بنجاح. يُنقل بلازميد العاثية المؤتلف إلى خلايا مستقبلة TG1، ثم تُغطى بوسط يحتوي على مضادات حيوية مناسبة، وتُجرى عملية استزراع موسعة بعد فحص الخلايا المحولة. بعد عدة دورات من الاستزراع، تتكاثر العاثية داخل البكتيريا وتُعبر بنجاح عن البروتين أو الببتيد المستهدف. بعد ذلك، تُنقى مكتبة العاثيات لإزالة بعض الشوائب والعاثيات غير المرتبطة.

ترتبط المناطق المتغيرة (VH وVL) بتنوع الأجسام المضادة، وقد أُدخلت VH وVL في ناقل العاثية مع تسلسل يُشفّر بروتين العاثية PIII. بعد التجميع، تُكشف جسيمات العاثية وتُدمج مع الطرف الأميني لبروتين الغلاف الثانوي III لتكوين جزء وظيفي من الجسم المضاد، مما يُنتج مكتبة تحتوي على تسلسل الحمض النووي للجسم المضاد.

بعد انتهاء عملية التحصين، تم قياس مستوى الأجسام المضادة، وسُحبت عينة دم من الحيوان بعد التأكد من صحة هذا المستوى. عُزلت الخلايا اللمفاوية من الدم، واستُخلص الحمض النووي الريبوزي (RNA)، ثم أُجري تفاعل البوليميراز المتسلسل العكسي (RT-PCR) لتضخيم الجزء المستهدف، وتم الحصول على جزء من جين المنطقة V. تم تضخيم جين V باستخدام بادئ نوعي.

تتضمن المكتبات الطبيعية المُنشأة أجسامًا مضادة ضعيفة الاستمناع في الحيوانات، قادرة على استهداف أي هدف. ويمكن جمع الأجسام المضادة للفيروسات التي ترتبط تحديدًا بالمستضد باستخدام تقنيات الفحص التي تثبت المستضد أو تُوسمه.

يُثبَّت المستضد المستهدف على حامل صلب، مثل ثقب في صفيحة دقيقة، أو يُربط بحبيبة مغناطيسية. ثم تُضاف مكتبة الأجسام المضادة للفيروسات العاثية لربطها بالمستضد. بعد عدة عمليات غسل، تُزال الفيروسات العاثية ذات الألفة المنخفضة أو غير النوعية، بينما تُحتفظ بالفيروسات التي تحمل أجسامًا مضادة نوعية.

تطبيق عرض العاثيات

أصبح اكتشاف الأجسام المضادة ذا أهمية متزايدة في الطب الحديث. توجد طرق مختلفة لاكتشاف الأجسام المضادة، لكن تقنية عرض العاثيات هي الأكثر استخدامًا في العلوم الطبية. منذ عام 1990، استُخدمت أشكال مختلفة من الأجسام المضادة لإنشاء مكتبات العاثيات، بما في ذلك الأجسام المضادة من نوع VHs وVHHs وscFvs وdiabodies وFab.
تتيح مكتبات ببتيدات العاثيات تحديدًا سريعًا لتسلسل محددات المستضدات البروتينية، وقد أصبحت أداة قوية لدراسة التفاعل بين محددات المستضدات ومستقبلات المستضدات.
*يتم دمج أجزاء الأجسام المضادة مع G3P الخاص بفيروس M13، ومن خلال استنساخ أعداد كبيرة من الجينات التي تشفر جزءًا من الأجسام المضادة، يمكن إنشاء مكتبات كبيرة لعرض الأجسام المضادة على العاثيات والتي يمكن من خلالها اختيار العديد من الأجسام المضادة المتنوعة.
*يتمتع نظام عرض العاثيات T7 بالعديد من المزايا، بما في ذلك البساطة والسلامة العالية والاستقرار وسهولة التخزين والنقل، لذلك يتم استخدام النظام في اللقاحات الوقائية والعلاجية.
*يمكن لنظام عرض العاثيات T7 اكتشاف مستضدات مختلفة، مثل المستضدات السطحية للكائنات الحية الدقيقة المسببة للأمراض ومستضدات السرطان.

العاثيات