خدمة إنشاء مكتبة عرض البكتيريا

تمتلك ألفا لايف تيك منصة عرض شاملة لبكتيريا M13/T7 لضمان بناء وإنتاج مكتبات الأجسام المضادة. كما نقدم خدمات مخصصة، مثل إنتاج scFv للأجسام المضادة، لتلبية احتياجاتكم.

اتصل بنا

خدمة إنشاء مكتبة عرض البكتيريا

لطالما انخرطت شركة ألفا لايف تيك في مجال تقنية عرض البكتيريا العصوية (Phage). وقد طورت منصة عرض مثالية ومستقرة، تُوفر الوقت والجهد اللازمين للبحث العلمي أو أبحاث المشاريع، وتُسهّل الإنتاج اللاحق. كما تُقدم ألفا لايف تيك خدماتٍ للعملاء، مثل إنتاج الأجسام المضادة vhh وscFv وFab.

تمتلك ألفا لايف تيك منصة عرض شاملة لبكتيريا M13/T7 لضمان بناء وإنتاج مكتبات الأجسام المضادة. كما نقدم خدمات مخصصة، مثل إنتاج scFv للأجسام المضادة وفحص الأجسام المضادة عالي الإنتاجية، لتلبية احتياجاتكم.

مقدمة عن عرض البكتيريا العاثية

تقنية عرض العاثيات هي تقنية تستخدم العاثيات (فيروس يصيب البكتيريا) للبحث عن جزيئات ربط وظيفية لبروتينات أو ببتيدات محددة. تشمل تقنيات بناء مكتبة الأجسام المضادة للعاثيات بناء مكتبة الأجسام المضادة Fab، وبناء مكتبة الأجسام المضادة scFv، وبناء مكتبة الأجسام النانوية، وغيرها. وفقًا لأنواع العاثيات، يمكن تقسيمها إلى أنظمة M13، وT7، وT4، وλ، وغيرها. وفقًا لنوع المكتبة، يمكن تقسيمها إلى مكتبة ببتيد عشوائية، ومكتبة cDNA، ومكتبة أجسام مضادة، ومكتبة بروتين. تتميز تقنية عرض العاثيات بسهولة التشغيل وقلة التكلفة. ومع ذلك، فإن هذه التقنية تحد من تنوع الجينات الجزيئية في المكتبة التي لا يمكنها التعبير عن تسلسلات طويلة جدًا.

تُستخدم تقنية عرض العاثيات على نطاق واسع حاليًا. ومن بين هذه الإنجازات، تحقيق إنجازات مهمة في مجال البحث والتطوير للقاحات الجديدة (لقاحات اصطناعية منخفضة التكلفة وفعالة)، وتطوير أدوية الأجسام المضادة (مثبطات إنزيم الفحص)، ونقل إشارات الخلايا (فحص النظائر المُحاكاة)، وأبحاث النظائر المُستضدية (تحضير الأجسام المضادة وحيدة النسيلة).

مقدمة عن البكتيريا العاثية T7

البكتيريا العاثية T7 عبارة عن حمض نووي ثنائي السلسلة، يبلغ طوله 40 كيلو قاعدة، ومُغلَّف بقفيصة قطرها 60 نانومتر. الرابط بين الرأس والذيل عبارة عن بنية حلقية تتكون من نسخ متعددة من gp8. يُشكِّل رأس ونواة البكتيريا العاثية T7 بنية أسطوانية ترتبط بـ gp8، ويمكنها ربط الرأس والذيل.

الشكل 1. التمثيل التخطيطي للبكتيريا T7.(مرجع:التطورات في نظام عرض البكتيريا العصوية T7 (مراجعة))

مقدمة عن البكتيريا العاثية M13

ينتمي العاثي M13 إلى مجموعة من العاثيات الخيطية تُسمى مجتمعةً عاثيات Ff. يبلغ طوله 900 نانومتر وعرضه 6.5 نانومتر. يحتوي على جينوم من الحمض النووي أحادي السلسلة (ssDNA) بطول 6407 زوجًا قاعديًا، ويتألف من تسعة جينات تُشفّر 11 بروتينًا مختلفًا. من بينها، تُعدّ البروتينات الخمسة بروتينات غلاف، وتُشارك هذه البروتينات الستة في تكاثر العاثي وتجميعه. أعلى تركيز لبروتينات الغلاف هو بروتين القفيصة G8P، الذي يتكون من حوالي 2700 وحدة بروتينية ويُشكّل غلافًا حول الكروموسوم.

الشكل 2 التمثيل التخطيطي للبكتيريا M13.(مرجع:أساسيات تقنية عرض البكتيريا العاثية للأجسام المضادة)

مقدمة لمكتبة الأجسام المضادة للعرض البكتيري

أصبح اكتشاف الأجسام المضادة ذا أهمية متزايدة في الطب الحديث. توجد طرق مختلفة لاكتشاف الأجسام المضادة، إلا أن مكتبة الأجسام المضادة للعاثيات تُستخدم بشكل أكبر في العلوم الطبية.

منذ عام ١٩٩٠، استُخدمت صيغٌ مختلفة من الأجسام المضادة لبناء مكتبات العاثيات، بما في ذلك VHs وVHHs وscFvs والأجسام المضادة للفيروسات القهقرية (diabodies) والأجسام المضادة لـ Fab. يتكون scFv من نطاقات هيكلية VH وVL، وهو أجسام مضادة أحادية السلسلة تُستخدم لبناء مكتبات scFv للأجسام المضادة. يتميز scFv بعمر نصف قصير ومناعة منخفضة. تتكون مكتبة Fab للأجسام المضادة من VH وVL وCL وCH1، والتي يمكنها فرز الأجسام المضادة المثالية ذات الألفة العالية بسرعة. تُشكل مكتبة الأجسام النانوية حاليًا أصغر وحدة يمكنها ربط مستضد VHH المستهدف، وتتميز VHH بمزايا البنية البسيطة والحجم الصغير والذوبان العالي والاستقرار الجيد وسهولة التحضير والتعبير الجيني. تبرز مكتبات الأجسام النانوية الاصطناعية (Nb) كبديل جذاب لتحصين الحيوانات، نظرًا لامتلاكها جسمًا نانويًا اصطناعيًا مستقرًا وعالي الألفة. بشكل عام، يتم دمج أجزاء الأجسام المضادة هذه مع G3P من البكتيريا العصوية M13، ومن خلال استنساخ أعداد كبيرة من الجينات التي تشفر جزء من الجسم المضاد، يمكن إنشاء مكتبات كبيرة من الأجسام المضادة لعرض البكتيريا العصوية والتي يمكن من خلالها اختيار العديد من الأجسام المضادة المتنوعة.

عملية بناء مكتبة العاثيات

تتم عملية بناء مكتبة العاثيات كما يلي: تُصمَّم بادئات خاصة لتضخيم تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) للحصول على النواتج، التي تُربط إنزيميًا بناقل العاثيات T7/M13، ويُبنى بلازميد العاثيات المُعاد تركيبه بنجاح. يُحوَّل بلازميد العاثيات المُعاد تركيبه إلى خلايا مستقبلات TG1، ثم يُغلَّف بوسط يحتوي على مضادات حيوية مناسبة، وتُجرى زراعة مُوسَّعة بعد فحص المُحوِّلات. بعد جولات زراعة متعددة، يُضاعف العاثيات أزمنة التضاعف في البكتيريا ويُعبِّر بنجاح عن البروتين أو البوليببتيد المُستهدف. ثم تُنقى مكتبة العاثيات لإزالة بعض الشوائب والعاثيات غير المُرتبطة.

ارتبطت المناطق المتغيرة (VH وVL) بتنوع الأجسام المضادة، وأُدخلت VH وVL في ناقل العاثية مع تسلسل يُشفِّر بروتين العاثية PIII. بعد التجميع، يُعرَّض جسيم العاثية ويُدمَج مع الطرف الأميني لبروتين الغلاف الثانوي III لتكوين قطعة جسم مضاد وظيفية، مما يُتيح الحصول على مكتبة تحتوي على تسلسل الحمض النووي للأجسام المضادة.

بعد انتهاء التحصين، تم تحديد مستوى العيار، وسُحب دم الحيوان بعد تحديد مستوى العيار. عُزلت الخلايا الليمفاوية من الدم، واستُخلص الحمض النووي الريبي (RNA)، وضخّم تفاعل البوليميراز المتسلسل العكسي (RT-PCR) الجزء المستهدف، وحصل على جزء جين المنطقة V. يُضخّم الجين V باستخدام بادئ مُخصّص.

تتضمن المكتبات الطبيعية المُنشأة أجسامًا مضادة ضعيفة المناعة لدى الحيوانات، قادرة على استهداف أي هدف. يمكن جمع أجسام مضادة للعاثيات ترتبط تحديدًا بالمستضد باستخدام تقنيات فحص تُثبّت المستضد أو تُسمّيه.

يُثبَّت المستضد المستهدف على حامل صلب، مثل ثقب في صفيحة دقيقة، أو يُربط بخرزة مغناطيسية. ثم تُضاف مكتبة الأجسام المضادة للعاثيات لربطها بالمستضد. بعد عمليات غسل متعددة، تُغسل العاثيات منخفضة الألفة أو غير النوعية، وتُحتفظ بتلك التي تُظهر أجسامًا مضادة محددة.

تطبيق عرض البكتيريا العاثية

*أصبح اكتشاف الأجسام المضادة ذا أهمية متزايدة في الطب الحديث. توجد مناهج مختلفة لاكتشاف الأجسام المضادة، إلا أن تقنية عرض العاثيات تُستخدم بشكل أكبر في العلوم الطبية. منذ عام ١٩٩٠، استُخدمت صيغ مختلفة من الأجسام المضادة لبناء مكتبات العاثيات، بما في ذلك VHs وVHHs وscFvs والأجسام المضادة للفيروسات القهقرية (diabodies) والأجسام المضادة لـ Fab.
*تسمح مكتبات الببتيدات العاثية بالتحديد السريع لتسلسل النمط البروتيني وأصبحت أداة قوية للتحقيق في التفاعل بين النمط البروتيني ومستقبلات المستضد
*يتم دمج أجزاء الأجسام المضادة مع G3P من البكتيريا العصوية M13، ومن خلال استنساخ أعداد كبيرة من الجينات التي تشفر جزء من الجسم المضاد، يمكن إنشاء مكتبات كبيرة من الأجسام المضادة لعرض البكتيريا العصوية والتي يمكن من خلالها اختيار العديد من الأجسام المضادة المتنوعة.
*يتميز نظام عرض البكتيريا العصوية T7 بالعديد من المزايا، بما في ذلك البساطة والسلامة العالية والاستقرار وسهولة التخزين والنقل، لذلك يتم استخدام النظام في اللقاحات الوقائية والعلاجية.
*يمكن لنظام عرض البكتيريا العاثية T7 اكتشاف مستضدات مختلفة، مثل مستضدات السطح للكائنات الحية الدقيقة المسببة للأمراض ومستضدات السرطان.

العاثيات