خدمة فحص مكتبة عرض البكتيريا
لطالما انخرطت شركة ألفا لايف تيك في مجال تقنية عرض البكتيريا العصوية (Phage). وقد طورت منصة عرض مثالية ومستقرة، تُوفر الوقت والجهد اللازمين للبحث العلمي أو أبحاث المشاريع، وتُسهّل الإنتاج اللاحق. كما تُقدم ألفا لايف تيك خدماتٍ للعملاء، مثل إنتاج الأجسام المضادة vhh وscFv وFab.
تمتلك ألفا لايف تيك منصة عرض شاملة لبكتيريا M13/T7 لضمان بناء وإنتاج مكتبات الأجسام المضادة. كما نقدم خدمات مخصصة، مثل إنتاج scFv للأجسام المضادة وفحص الأجسام المضادة عالي الإنتاجية، لتلبية احتياجاتكم.
عملية إنشاء مكتبة عرض البكتيريا العاثية
تتم عملية بناء مكتبة العاثيات كما يلي: تُصمَّم بادئات خاصة لتضخيم تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) للحصول على النواتج، التي تُربط إنزيميًا بناقل العاثيات T7/M13، ويُبنى بلازميد العاثيات المُعاد تركيبه بنجاح. يُحوَّل بلازميد العاثيات المُعاد تركيبه إلى خلايا مستقبلات TG1، ثم يُغلَّف بوسط يحتوي على مضادات حيوية مناسبة، وتُجرى زراعة مُوسَّعة بعد فحص المُحوِّلات. بعد جولات زراعة متعددة، يُضاعف العاثيات أزمنة التضاعف في البكتيريا ويُعبِّر بنجاح عن البروتين أو البوليببتيد المُستهدف. ثم تُنقى مكتبة العاثيات لإزالة بعض الشوائب والعاثيات غير المُرتبطة.
طرق فحص مكتبة عرض البكتيريا العاثية
يعتمد نجاح إنتاج الأجسام المضادة لعرض العاثيات بشكل أساسي على مكتبات عرض العاثيات، والطرق الشائعة لفحص العاثيات هي فحص الطور الصلب والطور السائل. يُثري فحص المستضد في الطور الصلب أجسامًا مضادة محددة من خلال 3-4 دورات من الشطف للحصول على مكتبات عرض العاثيات؛ أما فحص المستضد في الطور السائل فيُجرى عن طريق حضانة مكتبات عرض العاثيات المستهدفة والأجسام المضادة المُوسومة بالبيوتين، والتقاط العاثيات المرتبطة باستخدام خرزات مغناطيسية. يستهلك فحص الطور الصلب كمية أكبر من المستضد، ويُدمر بعض مُستضدات المستضد. يتميز فحص الطور السائل بالكفاءة العالية والإثراء، إلا أن الأجسام المضادة الناتجة أقل تحديدًا. تعتمد طريقة فحص العاثيات على الاحتياجات التجريبية، والتي سيكون لها جميعًا تأثير مُعين على إنتاج الأجسام المضادة لعرض العاثيات.
فحص الأجسام المضادة عالي الإنتاجية
تطورت عملية تطوير الأجسام المضادة بوتيرة سريعة في الطب الحديث. تتوفر طرق مختلفة لتطوير الأجسام المضادة، إلا أن فحص الأجسام المضادة عالي الإنتاجية يُستخدم بشكل أكبر في العلوم الطبية. يمكن لهذه العملية الحصول على تنوع كبير في مخزون الأجسام المضادة. كما أن دمجها مع طرق فحص مكتبة الأجسام المضادة التقليدية يُحسّن جودة فحص مكتبات عرض العاثيات. بعد الفحص البيولوجي، يمكن تمييز الأجسام المضادة باستخدام اختبار ELISA منخفض الإنتاجية أو فحص الأجسام المضادة عالي الإنتاجية.

الشكل 1 مخطط انسيابي يوضح تسلسل الأحداث من بناء مكتبات الأجسام المضادة للعاثيات إلى توليد الأجسام المضادة وحيدة النسيلة ذات التقارب العالي للمستضدات ومناعة منخفضة.(المصدر المرجعي:تقنية عرض البكتيريا العاثية كمنصة قوية لاكتشاف الأدوية المضادة للأجسام المضادة- PMC (nih.gov))
احتياطات فحص عرض العاثيات المضادة للأجسام المضادةاحتياطات
اعتبارات المخزن المؤقت
يجب أن يُراعى عند اختيار المحاليل العازلة استقرار الهدف، وبيئة الارتباط الدقيقة، والحد الأدنى من الارتباط غير النوعي في سيناريو التطبيق الفعلي. تُسهم البروتينات غير المرتبطة، والمنظفات غير الأيونية، وتركيزات الأملاح الفسيولوجية في تقليل الخلفية. كما توجد شروط أخرى، مثل أن تتطلب بعض الأهداف إضافة كاتيونات ثنائية التكافؤ أو عوامل مساعدة أخرى إلى المحلول العازل، ويمكن تثبيت العوامل المساعدة البروتينية مع الهدف، ويمكن إضافتها إلى محلول الفرز، بل ويمكن استخدامها كوسيلة لالتقاط الهدف.
اعتبارات الضغط
تشمل اعتبارات ضغط الاختيار الشائعة تركيز جزيئات الهدف، ووقت الارتباط، وكثافة الغسيل، وما إلى ذلك. تشمل التقنيات الأخرى لزيادة ضغط الاختيار استخدام المواد المفسدة (مثل الأحماض واليوريا والغوانيدين)، والمذيبات العضوية، وزيادة درجة الحرارة، أو زيادة تركيز الربيطة أو الأهداف المتنافسة في محلول الغسيل.
من بينها، تُعدّ الجولة الأولى من الفحص مهمة. تهدف هذه الجولة إلى التقاط أكبر عدد ممكن من النُسخ الإيجابية من المكتبة المُنشأة مع إزالة النُسخ غير النوعية. يجب استخدام أهداف مغلفة بمسامات أو عدد كبير من الأهداف القابلة للذوبان لضمان التقاط عدد كبير من العاثيات المرتبطة للحفاظ على تنوع المكتبة. في جولات الفحص اللاحقة، يجب زيادة ضغط الاختيار بزيادة التخصيب والغسل المتكرر، وزيادة وقت الغسل، ويمكن فحص النُسخ ذات الألفة العالية.
من بينها، تُعدّ الجولة الأولى من الفحص مهمة. تهدف هذه الجولة إلى التقاط أكبر عدد ممكن من النُسخ الإيجابية من المكتبة المُنشأة مع إزالة النُسخ غير النوعية. يجب استخدام أهداف مغلفة بمسامات أو عدد كبير من الأهداف القابلة للذوبان لضمان التقاط عدد كبير من العاثيات المرتبطة للحفاظ على تنوع المكتبة. في جولات الفحص اللاحقة، يجب زيادة ضغط الاختيار بزيادة التخصيب والغسل المتكرر، وزيادة وقت الغسل، ويمكن فحص النُسخ ذات الألفة العالية.
استراتيجية الفحص السلبي
علامات المستضد والمواد الحاملة: تتضمن عملية الفحص فحص جميع المواد الموجودة على مُقترنات المستضد، مثل العلامات وبروتينات الاندماج والركائز الداعمة. قد يُؤدي الفحص السلبي للأجسام غير المستهدفة إلى الحد من إثراء الأجسام المضادة الأخرى غير المستضد المستهدف.
يمكن فحص الخلايا الكاملة والليبوزومات وأقراص النانو الفوسفوليبيد والـVLPs بشكل سلبي باستخدام خلايا محولة محاكاة أو خلايا غير محولة عند فحص خطوط الخلايا المحولة.
إزالة مخاليط المستضدات المعقدة يمكن إجراء فحص سلبي صارم للجزيئات المستهدفة غير المعروفة أو المعقدة، مثل الخلايا الكاملة أو البروتينات غير النقية.
استراتيجية الأجسام المضادة ضد مواقع محددة من المستضدات، الأولى هي استخلاص الجسم المضاد الذي يمكنه التنافس مع الربيطة عن طريق إضافة تركيز عالي من الربيطة، والثانية هي منع الجسم المضاد.
يمكن فحص الخلايا الكاملة والليبوزومات وأقراص النانو الفوسفوليبيد والـVLPs بشكل سلبي باستخدام خلايا محولة محاكاة أو خلايا غير محولة عند فحص خطوط الخلايا المحولة.
إزالة مخاليط المستضدات المعقدة يمكن إجراء فحص سلبي صارم للجزيئات المستهدفة غير المعروفة أو المعقدة، مثل الخلايا الكاملة أو البروتينات غير النقية.
استراتيجية الأجسام المضادة ضد مواقع محددة من المستضدات، الأولى هي استخلاص الجسم المضاد الذي يمكنه التنافس مع الربيطة عن طريق إضافة تركيز عالي من الربيطة، والثانية هي منع الجسم المضاد.
تطبيق عرض البكتيريا العاثية
*أصبح اكتشاف الأجسام المضادة ذا أهمية متزايدة في الطب الحديث. توجد مناهج مختلفة لاكتشاف الأجسام المضادة، إلا أن تقنية عرض العاثيات تُستخدم بشكل أكبر في العلوم الطبية. منذ عام ١٩٩٠، استُخدمت صيغ مختلفة من الأجسام المضادة لبناء مكتبات العاثيات، بما في ذلك VHs وVHHs وscFvs والأجسام المضادة للفيروسات القهقرية (diabodies) والأجسام المضادة لـ Fab.
*تسمح مكتبات الببتيدات العاثية بالتحديد السريع لتسلسل النمط البروتيني وأصبحت أداة قوية للتحقيق في التفاعل بين النمط البروتيني ومستقبلات المستضد
*يتم دمج أجزاء الأجسام المضادة مع G3P من البكتيريا العصوية M13، ومن خلال استنساخ أعداد كبيرة من الجينات التي تشفر جزء من الجسم المضاد، يمكن إنشاء مكتبات كبيرة من الأجسام المضادة لعرض البكتيريا العصوية والتي يمكن من خلالها اختيار العديد من الأجسام المضادة المتنوعة.
*يتميز نظام عرض البكتيريا العصوية T7 بالعديد من المزايا، بما في ذلك البساطة والسلامة العالية والاستقرار وسهولة التخزين والنقل، لذلك يتم استخدام النظام في اللقاحات الوقائية والعلاجية.
*يمكن لنظام عرض البكتيريا العاثية T7 اكتشاف مستضدات مختلفة، مثل مستضدات السطح للكائنات الحية الدقيقة المسببة للأمراض ومستضدات السرطان.
*تسمح مكتبات الببتيدات العاثية بالتحديد السريع لتسلسل النمط البروتيني وأصبحت أداة قوية للتحقيق في التفاعل بين النمط البروتيني ومستقبلات المستضد
*يتم دمج أجزاء الأجسام المضادة مع G3P من البكتيريا العصوية M13، ومن خلال استنساخ أعداد كبيرة من الجينات التي تشفر جزء من الجسم المضاد، يمكن إنشاء مكتبات كبيرة من الأجسام المضادة لعرض البكتيريا العصوية والتي يمكن من خلالها اختيار العديد من الأجسام المضادة المتنوعة.
*يتميز نظام عرض البكتيريا العصوية T7 بالعديد من المزايا، بما في ذلك البساطة والسلامة العالية والاستقرار وسهولة التخزين والنقل، لذلك يتم استخدام النظام في اللقاحات الوقائية والعلاجية.
*يمكن لنظام عرض البكتيريا العاثية T7 اكتشاف مستضدات مختلفة، مثل مستضدات السطح للكائنات الحية الدقيقة المسببة للأمراض ومستضدات السرطان.
العاثيات
01020304
0102030405
010203
If you have any questions, please feel free to contact us at any time.
Leave Your Message
0102