خدمة تحليل التفاعل بين البروتينات
يمكن لشركة Alpha Lifetech أيضًا أن تقدم للعملاء اختبارات البروتين، وتحليل التفاعل البروتيني، واختبار التفاعل بين البروتينات (CO-IP، Western Blot، اختبار ترسب الكروماتين المناعي)، واختبار وظيفة البروتين لتلبية الاحتياجات التجريبية للعملاء المختلفين.
اتصل بنا01
خدمة تحليل التفاعل بين البروتينات
لقد شاركت شركة Alpha Lifetech بعمق في اختبارات البروتين لسنوات عديدة، حيث بنت منصة سليمة لاختبار وظيفة البروتين، وأتقنت مجموعة متنوعة من الوسائل التقنية للتحقق من تفاعل البروتين، مما يمكن أن يوفر الوقت للبحث العلمي أو بحث المشروع مع تقديم نتائج مستقرة.
يمكن لشركة Alpha Lifetech أيضًا أن تقدم للعملاء اختبارات البروتين، وتحليل التفاعل البروتيني، واختبار التفاعل بين البروتينات (CO-IP، Western Blot، اختبار ترسب الكروماتين المناعي)، واختبار وظيفة البروتين لتلبية الاحتياجات التجريبية للعملاء المختلفين.
مقدمة لتحليل تفاعل البروتين مع البروتين
البروتينات هي الجزيئات التنفيذية الأكثر أهمية في أي شكل من أشكال الحياة، إذ تستجيب للتعليمات المخزنة في المواد الوراثية. وفي أغلب الأحيان، تؤدي البروتينات وظائفها من خلال التفاعل مع بروتينات أخرى، وهو ما يتضح أكثر عند دراسة وظيفة البروتين في سياق الخلية. يُعد تحديد التفاعلات بين البروتينات أمرًا بالغ الأهمية للبحث الكيميائي الحيوي لكل بروتين على حدة. وفيما يلي تحليل تفاعلات البروتينات الشائعة:
اختبار الترسيب المناعي المشترك
مبدأ طريقة الترسيب المناعي المشترك هو خلط البروتين المستهدف والأجسام المضادة المحددة والخرز المغناطيسي للبروتين A/G للحضانة، ويتم التخلص من السائل العلوي للبروتين غير المرتبط من خلال امتصاص الخرز المغناطيسي على الرف المغناطيسي، ويتم غسل الخرز المغناطيسي لإزالة البروتين والشوائب الأخرى ما لم تكن مرتبطة بشكل خاص.
الشكل 1 رسم تخطيطي لتجارب Co-IP.(المصدر المرجعي:اختبار ترسب المناعة المشترك - PubMed (nih.gov))
اختبار السحب للأسفل
اختبار السحب للأسفل هو تثبيت البروتين المعروف على حبة مغناطيسية وإضافة المادة المراد كشفها. يُكشف عن المحلول لامتصاص البروتينات المتفاعلة.
في عام 1988، قام سميث وآخرون بتنقية بروتين الاندماج GST، والذي تم تطبيقه في اختبارات السحب لأسفل ويسمى Gst pull down، والذي يهدف إلى إضافة علامة GST إلى البروتين المستهدف، والتقاط البروتين المتفاعل من خلال GSH، واستخلاص الارتباط، والتحقق منه من خلال اختبارات WB.
الشكل 2 رسم تخطيطي لتحليلات السحب للأسفل لـ GST.(المصدر المرجعي:اختبار سحب GST لدراسة ارتباط PIF4 في المختبر - PubMed (nih.gov))
وتتمثل خطته في استخدام أيونات معدنية مثل النيكل أو الكوبالت كوسط، وتنقية البروتين من خلال كروماتوغرافيا التقارب، واستخلاص الرابطة من خلال تجربة WB للتحقق.
بالإضافة إلى ذلك، هناك اختبارات DNA Pull-down (اختبار ربط البروتين بالحمض النووي)، وRNA Pull-down (اختبار تفاعل البروتين بالحمض النووي الريبي)، واختبارات الجزيئات الصغيرة Pull-down.
اختبار ربط الحمض النووي (DNA pull-down) هو طريقةٌ مختبريةٌ لتحديد ارتباط البروتين بالحمض النووي. وقد تم الكشف عن ارتباط بروتيناتٍ محددةٍ بالحمض النووي المستهدف من خلال اختبارات WB؛ شظايا الحمض النووي غير المعروفة المرتبطة بالبروتينات، والتي تُعرف من خلال الكشف عن MS.
اختبار تفاعل الحمض النووي الريبوزي (RNA pull-down) هو طريقةٌ مختبريةٌ لتحديد ارتباط الحمض النووي الريبوزي بالبروتينات. وقد تم الكشف عن ارتباط بروتيناتٍ محددةٍ بالحمض النووي الريبوزي المستهدف من خلال اختبارات WB؛ شظايا الحمض النووي الريبوزي غير المعروفة المرتبطة بالبروتينات، والتي تُعرف من خلال الكشف الطيفي بالمسح الضوئي (MS).
يمكن لطريقة السحب للأسفل SM (اختبارات السحب للأسفل للجزيئات الصغيرة) العثور على بروتينات مستهدفة ترتبط بشكل خاص بجزيئات صغيرة، وعند دمجها مع MS، يمكن فحص بروتينات الهدف الجزيئية الصغيرة بدقة، والتي يمكن تقسيمها إلى طريقة الوسم في المختبر والطريقة المتعامدة البيولوجية.
تجربة WB
تجربة WB (المعروفة أيضًا باسم تجربة Western Blot أو Western blot)، يكمن جوهرها في التفاعل النوعي بين المستضد والجسم المضاد. يتمثل المبدأ الأساسي في فصل البروتينات المشوهة باستخدام الرحلان الكهربائي لهلام بولي أكريلاميد SDS ونقلها إلى ناقل في طور صلب (مثل غشاء PVDF أو غشاء NC) عبر نقل الغشاء (دوران رطب أو شبه جاف). بعد الحجب (باستخدام BSA أو اللبن الرائب، إلخ)، يُوضع الجسم المضاد الأولي ليرتبط تحديدًا بالبروتين، ثم يُضاف الجسم المضاد الثانوي المُوسوم بالفلوريسين بعد غسل الغشاء. بربط الجسم المضاد الثاني بالجسم المضاد الأولي، يمكن ملاحظة البروتين المستهدف من خلال تطور لون الركيزة والتألق الكيميائي. تُستخدم هذه الطريقة عادةً لتحديد ما إذا كان بروتين معين مُعبَّر عنه في العينة، وتحليل مستوى تعبيره بشكل تقريبي.
مقارنة طريقة التفاعل بين البروتينات
تُشبه اختبارات سحب البروتين اختبارات Co-IP، وكلاهما يُعنى بتجارب الكشف عن تفاعلات البروتينات. يكمن الفرق بين الطريقتين في أن اختبارات Co-IP تحصل على البروتينات المتفاعلة مع البروتينات المعروفة، والتي تتمتع بمستوى معين من الموثوقية، لكنها لا تُؤكد ما إذا كانت البروتينات المتفاعلة تتفاعل بشكل مباشر أو غير مباشر. أما اختبارات السحب، فتهدف إلى العثور على البروتين المجهول المتفاعل مع البروتين المعروف. ويمكنها تأكيد تفاعل البروتين المعروف مع البروتين المكتشف مباشرةً، لكنها لا تُحدد حالة الارتباط داخل الجسم الحي.
تُستخدم تقنية الترسيب المناعي المشترك لتحليل ما إذا كان هناك تفاعل بين بروتينين أو أكثر، بناءً على تجارب الترسيب المناعي، وبالمقارنة مع تحليل تفاعل البروتين الآخر للتقنيات التجريبية (GST Pull-down، Western Blot، Chromatin immunoprecceptation assay، إلخ)، تتمتع تقنية Co-IP بخصوصية وحساسية أعلى وقابلية تكرار عالية، مما يمكن أن يتجنب تداخل الارتباط غير المحدد ويعكس تفاعل البروتينات في الحالة الطبيعية.
| سحب ضريبة السلع والخدمات للأسفل | الملكية الفكرية المشتركة | البنك الدولي | |
|---|---|---|---|
| ميزة | *سهل التشغيل *مناسب لتنقية البروتينات المختلفة | *لتحليل التفاعل الحيوي *يمكن التعرف عليه من خلال البروتين الموجود أسفله | *تحديد قوي *النوعية والكمية في المختبر |
| القيود | *ربما يكون الارتباط غير محدد *مطلوب مزيد من التحقق من التفاعل | *الاعتماد القوي على الأجسام المضادة *قد يحدث ارتباط غير محدد | *يستغرق وقتا طويلا *من الصعب استخدامه لتحليل البروتين على نطاق واسع |
| مثال للتطبيق | *تحديد التفاعلات *مجمع بروتين نقي | *دراسة نقل الإشارة * آلية المرض | التحليل اللاحق للتفاعلات بين البروتين والبروتين، والبروتين والحمض النووي، والبروتين والحمض النووي الريبوزي منقوص الأكسجين |
مخصص
تخصيص الخدمات لتلبية احتياجاتك
خبرة
سنوات من الخبرة في إنتاج البروتين
تكنولوجيا
نتائج تسليم عالية الجودة
عملية التجربة
عملية إدارة الجودة الصارمة
إذا كان لديك أي أسئلة، فلا تتردد في الاتصال بنا في أي وقت.
Leave Your Message
2018-07-16 
0102