خدمة تحليل تفاعلات البروتين-البروتين

كما يمكن لشركة Alpha Lifetech تزويد العملاء باختبارات البروتين، وتحليل تفاعل البروتين، واختبار تفاعل البروتين-البروتين (CO-IP، وWestern Blot، واختبار الترسيب المناعي للكروماتين)، واختبار وظيفة البروتين لتلبية الاحتياجات التجريبية للعملاء المختلفين.

اتصل بنا

خدمة تحليل تفاعلات البروتين-البروتين

لقد انخرطت شركة Alpha Lifetech بعمق في فحوصات البروتين لسنوات عديدة، وقامت ببناء منصة سليمة لفحص وظائف البروتين، وأتقنت مجموعة متنوعة من الوسائل التقنية للتحقق من تفاعل البروتين، مما يمكن أن يوفر وقت البحث العلمي أو وقت البحث في المشروع مع تقديم نتائج مستقرة.

مقدمة في اختبار تفاعل البروتين-البروتين

تُعدّ البروتينات أهم الجزيئات التنفيذية في جميع أشكال الحياة، إذ تستجيب للتعليمات المخزنة في المادة الوراثية. وفي أغلب الأحيان، تؤدي البروتينات وظائفها من خلال التفاعل مع بروتينات أخرى، وهو ما يتضح جليًا عند دراسة وظيفة البروتين في سياق الخلية. يُعدّ تحديد التفاعلات بين البروتينات أمرًا بالغ الأهمية لدراسة الكيمياء الحيوية لبروتين معين. وفيما يلي أنواع شائعة لتحليل تفاعلات البروتينات:

اختبار الترسيب المناعي المشترك

مبدأ طريقة الترسيب المناعي المشترك هو خلط البروتين المستهدف والأجسام المضادة المحددة وخرز البروتين A/G المغناطيسي للحضانة، ويتم التخلص من المادة الطافية للبروتين غير المرتبط من خلال امتصاص الخرز المغناطيسي على الحامل المغناطيسي، ويتم غسل الخرز المغناطيسي لإزالة البروتين والشوائب الأخرى ما لم يكن مرتبطًا بشكل خاص.

الشكل 1: رسم تخطيطي لفحوصات Co-IP.(مصدر المرجع: اختبار الترسيب المناعي المشترك - PubMed (nih.gov))

اختبار السحب لأسفل

تعتمد تقنية الترسيب المغناطيسي على تثبيت البروتين المعروف على الخرزة المغناطيسية وإضافة المادة المراد الكشف عنها. ويتم الكشف عن المذيب الناتج من خلال قياس امتصاص البروتينات المتفاعلة.

في عام 1988، قام سميث وآخرون بتنقية بروتين الاندماج GST، والذي تم تطبيقه في فحوصات السحب ويسمى سحب Gst، أي إضافة علامة GST إلى البروتين المستهدف، والتقاط البروتين المتفاعل من خلال GSH، وفصل الارتباط، والتحقق منه من خلال فحوصات WB.

الشكل 2: رسم تخطيطي لاختبارات سحب GST.(مصدر المرجع: اختبار سحب البروتين GST لدراسة ارتباط PIF4 في المختبر - PubMed (nih.gov) )

تتمثل طريقته في استخدام أيونات معدنية مثل النيكل أو الكوبالت كوسيط، وتنقية البروتين من خلال كروماتوغرافيا التقارب، وفصل الارتباط من خلال تجربة WB للتحقق.

بالإضافة إلى ذلك، هناك اختبارات سحب الحمض النووي (اختبار ربط البروتين بالحمض النووي)، واختبار سحب الحمض النووي الريبي (اختبار تفاعل البروتين مع الحمض النووي الريبي)، واختبارات سحب الجزيئات الصغيرة.

اختبار سحب الحمض النووي (اختبار ارتباط البروتين بالحمض النووي) هو طريقة مخبرية لتحديد ارتباط البروتين بالحمض النووي. يتم الكشف عن ارتباط بروتينات محددة بالحمض النووي المستهدف بواسطة اختبارات التلطيخ الغربي (WB). ترتبط شظايا الحمض النووي غير المعروفة بالبروتينات، ويتم تحديد هذه الشظايا بواسطة مطياف الكتلة (MS).

اختبار سحب الحمض النووي الريبوزي (اختبار تفاعل البروتين مع الحمض النووي الريبوزي) هو طريقة مخبرية لتحديد ارتباط الحمض النووي الريبوزي بالبروتينات. يتم الكشف عن ارتباط بروتينات محددة بالحمض النووي الريبوزي المستهدف بواسطة اختبارات التلطيخ الغربي؛ ترتبط شظايا الحمض النووي الريبوزي غير المعروفة بالبروتينات، ويتم تحديد هذه الشظايا بواسطة الكشف باستخدام مطياف الكتلة.

يمكن لتقنية SM pull-down (اختبارات سحب الجزيئات الصغيرة) أن تجد البروتينات المستهدفة التي ترتبط بشكل خاص بالجزيئات الصغيرة، وعند دمجها مع MS، يمكن فحص البروتينات المستهدفة للجزيئات الصغيرة بدقة، والتي يمكن تقسيمها إلى طريقة الوسم في المختبر والطريقة البيولوجية المتعامدة.

تجربة WB

تجربة WB (المعروفة أيضًا باسم تجربة Western Blot أو Western blot) تعتمد أساسًا على التفاعل النوعي بين المستضد والضد. وتتمثل الفكرة الرئيسية في فصل البروتينات المتغيرة طبيعتها باستخدام الرحلان الكهربائي على هلام بولي أكريلاميد SDS، ثم نقلها إلى غشاء حامل ذي طور صلب (مثل غشاء PVDF أو غشاء NC) عبر عملية نقل الغشاء (الدوران الرطب أو شبه الجاف). بعد عملية الحجب (باستخدام BSA أو اللبن الرائب، إلخ)، يُضاف الجسم المضاد الأولي ليرتبط بشكل نوعي بالبروتين، ثم يُضاف الجسم المضاد الثانوي الموسوم بالفلوريسين بعد غسل الغشاء. وبارتباط الجسم المضاد الثانوي بالجسم المضاد الأولي، يمكن ملاحظة البروتين المستهدف من خلال ظهور لون على الركيزة وتألق كيميائي. تُستخدم هذه التجربة عمومًا لتحديد ما إذا كان بروتين معين موجودًا في العينة، ولتحليل مستوى تعبيره بشكل تقريبي.

مقارنة طرق تفاعل البروتين مع البروتين

تُشبه اختبارات سحب البروتين اختبارات الترسيب المناعي المشترك (Co-IP)، وكلاهما يُستخدم في تجارب الكشف عن تفاعلات البروتينات. يكمن الفرق بين الطريقتين في أن اختبارات الترسيب المناعي المشترك (Co-IP) تُحدد البروتينات المتفاعلة مع بروتينات معروفة، مما يُضفي مصداقية معينة، لكنها لا تُؤكد ما إذا كان التفاعل مباشرًا أم غير مباشر. أما اختبارات سحب البروتين، فتُستخدم للكشف عن تفاعل بروتين غير معروف مع بروتين معروف. تُؤكد هذه الاختبارات بشكل مباشر تفاعل البروتين المعروف مع البروتين المُكتشف، لكنها لا تُحدد طبيعة هذا التفاعل داخل الكائن الحي.

تُستخدم تقنية الترسيب المناعي المشترك لتحليل ما إذا كان هناك تفاعل بين بروتينين أو أكثر، بناءً على تجارب الترسيب المناعي. وبالمقارنة مع تقنيات تحليل تفاعل البروتين الأخرى (مثل سحب GST، والتلطيخ الغربي، وفحص الترسيب المناعي للكروماتين، وما إلى ذلك)، تتميز تقنية الترسيب المناعي المشترك بدقة وحساسية وقابلية تكرار عالية، مما يسمح بتجنب تداخل الارتباط غير المحدد ويعكس تفاعل البروتينات في حالتها الطبيعية.

	قائمة ضريبة السلع والخدمات	الملكية الفكرية المشتركة	وارنر براذرز
ميزة	سهل التشغيل *مناسب لتنقية البروتينات المختلفة	لتحليل التفاعلات داخل الجسم الحي يمكن التعرف عليه من خلال البروتين الموجود في اتجاه المصب	خصوصية قوية التحليل النوعي والكمي في المختبر
القيود	ربما يكون الارتباط غير محدد يلزم إجراء مزيد من التحقق من صحة التفاعل	*اعتماد قوي على الأجسام المضادة قد يحدث ارتباط غير محدد	يستغرق وقتاً طويلاً يصعب استخدامه لتحليل البروتينات على نطاق واسع
مثال تطبيقي	تحديد التفاعلات مركب بروتيني منقى	*دراسة نقل الإشارة آلية المرض	التحليل اللاحق لتفاعلات البروتين-البروتين، والبروتين-الحمض النووي، والبروتين-الحمض النووي الريبي