خدمة إنشاء مكتبة الأجسام المضادة شبه الاصطناعية

مكتبة العاثيات المضادة شبه الاصطناعية

تتضمن مكتبة عرض العاثيات أربعة أنواع: المكتبات المناعية، والمكتبات الأصلية، والمكتبات شبه الاصطناعية، والمكتبات الاصطناعية.

تتكون مكتبة الأجسام المضادة شبه الاصطناعية من تسلسل منطقة متغيرة اصطناعي وتسلسل طبيعي آخر. وتستخدم بشكل رئيسي السلسلة الثقيلة، أو السلسلة الخفيفة، أو شريحة المنطقة المتغيرة المُعاد ترتيبها من السلالة الجرثومية، حيث يكون واحد أو أكثر من CDRS عشوائيًا. وتتمتع بآفاق تطبيقية جيدة للأجسام المضادة التي يصعب تحصينها داخل الجسم الحي.يتمتع الجسم المضاد الساذج بثبات وذوبان ومستويات تعبير جيدة بعد التطور داخل الجسم الحي. يتميز تصميم مكتبة الأجسام المضادة الاصطناعية بالكامل بتنوعه، كما أن أنماط التعرف على الأجسام المضادة متنوعة مقارنةً بمكتبة الأجسام المضادة الطبيعية.

تتمتع مكتبة الأجسام المضادة شبه الاصطناعية بمزايا مكتبة الأجسام المضادة الساذجة ومكتبة الأجسام المضادة الاصطناعية بالكامل، مما يقلل من نسبة التصميم الاصطناعي ويضمن تنوعًا كافيًا للأجسام المضادة.تتم عملية بناء مكتبة العاثيات كما يلي: تُصمَّم بادئات خاصة لتضخيم تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) للحصول على النواتج، التي تُربط إنزيميًا بناقل العاثيات T7/M13، ويُبنى بلازميد العاثيات المُعاد تركيبه بنجاح. يُحوَّل بلازميد العاثيات المُعاد تركيبه إلى خلايا مستقبلات TG1، ثم يُغلَّف بوسط يحتوي على مضادات حيوية مناسبة، وتُجرى زراعة مُوسَّعة بعد فحص المُحوِّلات. بعد جولات زراعة متعددة، يُضاعف العاثيات أزمنة التضاعف في البكتيريا ويُعبِّر بنجاح عن البروتين أو البوليببتيد المُستهدف. ثم تُنقى مكتبة العاثيات لإزالة بعض الشوائب والعاثيات غير المُرتبطة.

مقدمة عن Nanobody

الجسم النانوي (Nb) هو المجال المتغير للأجسام المضادة ذات السلسلة الثقيلة (VHH)، قطره 2.5 نانومتر وطوله 4 نانومتر، وهو أصغر جزء طبيعي يرتبط بالمستضد. يتميز VHH بمنطقة CDR3 طويلة، ويمكنه الارتباط بسطح البروتين المطوي وسطحه وشقوقه، حيث لا ترتبط الأجسام المضادة التقليدية.

الشكل 1 أشكال مختلفة من هياكل الأجسام المضادة

يتميز VHH بالخصائص التالية: ① تحمّل درجات الحرارة العالية ودرجة الحموضة العالية، والمذيبات العضوية، والبروتيازات. بعد التحلل الحراري والكيميائي، يُعيد VHH طيّ الرابطة ثنائية الكبريتيد بين CDR1 وCDR3، مما يُحسّن الاستقرار الهيكلي ويضمن النشاط البيولوجي. في الوقت نفسه، يُساعد تحمّل درجات الحرارة العالية على تعزيز ديناميكيات القياسات الحيوية عن طريق زيادة درجة الحرارة. ② يُعدّ Nbs مرشحًا مثاليًا للبلمرة. يُمكنه تحقيق هندسة متعددة التكافؤ، ومتعددة النُسَخ، ومتعددة الأنواع، مما يُسهّل زيادة الألفة والارتباط بمستضدات متعددة أو الألفة الناضجة في المختبر. يُعبّر عن بنيته الجزيئية البسيطة بسهولة أكبر بكميات كبيرة في أنظمة تعبير مختلفة، مثل البكتيريا والخميرة وخلايا الثدييات. وهو نوع مُحتمل من الأجسام المضادة مناسب للهندسة والإنتاج على نطاق واسع.بناءً على الخصائص المذكورة أعلاه، استُخدمت الأجسام المضادة النيبروستاتية على نطاق واسع في البحث العلمي والتشخيص السريري، بما في ذلك تشخيص التصوير المقطعي بالإصدار البوزيتروني، وعلاج مستقبلات المستضدات الكيمرية (CAR-T)، والعلاج بالميكروبات المضادة للفيروسات، وعلاج السرطان الصلب وسرطان الدم. وقد أصبحت فئة جديدة ومؤثرة من الأجسام المضادة في الأبحاث الأساسية والطب الحيوي.

إنشاء مكتبة العاثيات المضادة شبه الاصطناعية

وفقًا لاختلاف تقنيات العرض، يمكن تقسيم مكتبة الأجسام المضادة إلى ثلاث فئات: مكتبة الأجسام المضادة لعرض العاثيات، ومكتبة الأجسام المضادة لعرض الجزيئات الخالية من الخلايا، ومكتبة الأجسام المضادة لعرض سطح الخلية. تنقسم مكتبة الأجسام المضادة لعرض الجزيئات الخالية من الخلايا إلى ثلاثة أنواع: مكتبة عرض الريبوسوم، ومكتبة عرض الحمض النووي الريبوزي المرسال، ومكتبة عرض الحمض النووي الريبوزي منقوص الأكسجين (DNA). وفقًا لاختلاف خلايا المضيف، تنقسم مكتبة الأجسام المضادة لعرض سطح الخلية إلى أربعة أنواع: مكتبة عرض سطح البكتيريا، ومكتبة عرض سطح الفطريات، ومكتبة عرض سطح الخميرة، ومكتبة عرض سطح الخلايا الثديية.

نظرًا لقيود كفاءة التحويل، وكثافة مزارع الخلايا، وحجم مزارع الخلايا، فإن الحد الأقصى لمكتبة الأجسام المضادة لسطح الخلية صغير (عادةً أقل من 10^9)، وهو مناسب لتحسين الأجسام المضادة مثل نضج الألفة. في مختلف مكتبات الأجسام المضادة لسطح الخلية، تُعدّ خلايا الخميرة والثدييات أكثر ملاءمة لنشاط ارتباط الأجسام المضادة المُحصاة من مكتبات الأجسام المضادة لسطح الخلية المُناظرة، وأكثر انعكاسًا لنشاط الأجسام المضادة الطبيعية.

تتمتع مكتبة الأجسام المضادة لعرض الجزيئات الخالية من الخلايا بأقصى حد تخزين (أكبر من 10^16). ولأن خطوة تحليل التقارب تُنجز بالكامل في بيئة مختبرية خالية من الخلايا، يُسهّل إضافة ضغوط الفحص (مثل درجة الحرارة، ودرجة الحموضة، وتركيز الملح، وتركيز المنظف، إلخ)، مما يُعطيها ميزة فريدة في تحسين الخصائص الفيزيائية والكيميائية للأجسام المضادة.

نظرًا لصغر حجم جسيمات البكتيريا المضيفة والعاثيات، وكثافة الاستزراع الكبيرة وحجمها الأصغر، وكفاءة تحويل البكتيريا الأعلى مقارنةً بخلايا الخميرة والثدييات، فإن السعة القصوى لمكتبة الأجسام المضادة العاثية تقع بين مكتبة الأجسام المضادة العاثية على سطح الخلية ومكتبة الأجسام المضادة العاثية على الجزيئات الحرة. بالمقارنة مع النوعين الآخرين من تقنيات فحص مكتبة الأجسام المضادة، يمكن تلخيص مزايا مكتبة الأجسام المضادة العاثية على النحو التالي: سعة تخزين كبيرة، سهولة التشغيل، تكلفة منخفضة، إنتاجية عالية، مما يُساعد على فحص الأجسام المضادة الوظيفية.

يمكن لشركة ألفا لايف تيك أن تقدم

توفر ألفا لايف تيك منصة عرض شاملة لبكتيريا M13/T7 لضمان بناء وإنتاج مكتبات الأجسام المضادة. كما نقدم خدمات مخصصة، مثل عرض بكتيريا scFv، وعرض بكتيريا Fab، وعرض بكتيريا nanobody، لتلبية احتياجاتكم.لطالما انخرطت شركة ألفا لايف تيك في مجال تقنية عرض البكتيريا العصوية (Phage Display). وقد طورت منصة عرض مثالية ومستقرة، تُوفر الوقت والجهد اللازمين للبحث العلمي أو لأبحاث المشاريع، وتُسهّل الإنتاج اللاحق. كما تُزوّد ألفا لايف تيك عملائها بشاشات عرض البكتيريا العصوية النانوية (nanobody)، وشاشات عرض البكتيريا العصوية scFv، وشاشات عرض البكتيريا العصوية Fab.

حالة بناء مكتبة الأجسام المضادة شبه الاصطناعية

صمم بو وانغ جسمًا مضادًا شبه اصطناعيًا أحادي النطاق، يتكون من منطقة FR1-FR3 مُضخَّمة بتقنية تفاعل البوليميراز المتسلسل العكسي (RT-PCR)، ومنطقة CDR3-FR4 مُصنَّعة بواسطة أوليجونوكليوتيدات تحتوي على منطقة عشوائية من CDR3. تم الحصول على النطاق المتغير للأجسام المضادة للسلسلة الثقيلة (VHHs) بتقنية تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR ass). ثم فُحصت المكتبة شبه الاصطناعية باستخدام LcrV المُؤتلف كمستضد مستهدف.