تُعدّ الأجسام المضادة وحيدة النسيلة (mAb) رائدةً في مجال الأدوية المضادة، حيث تمت الموافقة على أكثر من 100 جسم مضاد وحيد النسيلة لعلاج السرطان والأمراض المعدية، مما يُبرز قيمتها العلاجية الفريدة في سوق تطوير الأدوية. وتُعتبر تقنية الأجسام المضادة من الخلايا البائية المفردة، كجيل جديد من تقنيات تطوير الأجسام المضادة، قادرةً على عزل الأجسام المضادة بكفاءة وسرعة من الخلايا البائية المفردة، وهو ما يُمثل طفرةً في تقنية إنتاج الأجسام المضادة بعد تقنيتي الهيبريدوما وعرض العاثيات. يُمكن استخدام تقنية فرز الخلايا البائية المفردة لإنتاج أجسام مضادة ضد أنواع متعددة من الحيوانات، مثل الأرانب والفئران والإبل والأغنام والدجاج. تتميز هذه التقنية بمزايا بارزة، كالدقة العالية والنشاط العالي والألفة العالية. وبفضل منصة فرز الخلايا البائية المفردة، تتمتع شركة ألفا لايف تك بمزايا في سرعة الفرز والحصول على أجسام مضادة عالية الجودة. كما تُقدم الشركة خدمات تصميم المستضدات وتخليقها وتعديلها، ودراسة مناعة الحيوانات، وفحص إثراء الخلايا البائية المفردة، وتسلسل الخلايا المفردة، والفحص عالي الإنتاجية، والتعبير الجيني، والتنقية، بالإضافة إلى خدمات تقنية متكاملة، كالتحقق الوظيفي، لتلبية الاحتياجات المتنوعة للعملاء.

اختر المستضد المناسب للحيوانات التجريبية (مثل الفئران والأرانب وما إلى ذلك) لتحفيز المناعة، حتى تتمكن من إنتاج أجسام مضادة محددة ضد المستضد.

يُعدّ تحصين الحيوانات المرحلة الأولى من تكوين الأجسام المضادة. ويعتمد تحصين الحيوانات على استخدام آلية الاستجابة المناعية الخلطية للكائن الحي نفسه، فمن خلال التحفيز المستمر للمستضدات، تُنتج الحيوانات استجابة مناعية قوية، ثم تُفرز أجسامًا مضادة نوعية ضد مستضدات محددة.

تم عزل الخلايا البائية من الدم المحيطي أو الطحال أو العقد اللمفاوية لحيوانات محصنة. وقد تم تحفيز هذه الخلايا البائية مناعياً لإنتاج أجسام مضادة ضد مستضدات محددة.

عن طريق الطرق الفيزيائية أو الكيميائية (مثل الطرد المركزي بتدرج الكثافة، وفصل الخرز المغناطيسي، وما إلى ذلك) إثراء الخلايا البائية، وإزالة الخلايا الشائبة، وتحسين نقاء الخلايا البائية وكفاءة الفصل اللاحق.

يمكن استخدام تقنيات الفرز الخلوي المنشط بالفلورة (FACS)، أو الفصل الخلوي المغناطيسي (MACS)، أو الفرز الخلوي الميكروفلويدي (MCS)، أو غيرها من تقنيات الفحص عالية الإنتاجية، بالإضافة إلى وضع علامات خاصة بالمستضد، لفحص الخلايا البائية الفردية من الخلايا البائية المخصبة لإنتاج الأجسام المضادة المستهدفة.

عند عزل خلية بائية واحدة من مجموعة خلايا بائية مختلطة، يلزم تحديد تسلسل جينات الأجسام المضادة الخاصة بها باستخدام تقنية تسلسل الخلايا المفردة، وتحليلها للحصول على معلومات تسلسل الحمض النووي لمنطقة السلسلة الثقيلة المتغيرة (VH) ومنطقة السلسلة الخفيفة المتغيرة (VL). تتضمن تقنية تسلسل الخلايا المفردة ثلاث خطوات رئيسية: عزل الخلية المفردة، وتضخيم الحمض النووي داخل الخلية، وتحليل التسلسل. ويعتمد مبدأ تسلسل الخلايا المفردة على تضخيم كمية ضئيلة من الحمض النووي (DNA) أو الحمض النووي الريبوزي (RNA) للجينوم الكامل للخلايا المفردة المعزولة، وذلك للحصول على جينوم أو ترانسكريبتوم كامل بتغطية عالية لتسلسل عالي الإنتاجية.

بفضل تقنية الفحص عالي الإنتاجية، يمكن الحصول على تسلسلات جينات الأجسام المضادة لآلاف الخلايا البائية دفعة واحدة، مما يُسرّع بشكل كبير عملية اكتشاف الأجسام المضادة. ويمكن استخدام هذه المعلومات التسلسلية لاحقًا في بناء مكتبات الأجسام المضادة وفحصها.

الشكل 2: رسم تخطيطي لعملية التقاط الخلايا البائية المفردة، وبناء المكتبة، والفحص عالي الإنتاجية والتسلسل.(مصدر المرجع: يُمكّن التسلسل المتوازي واسع النطاق لمستقبلات الخلايا البائية أحادية الخلية من الاكتشاف السريع للأجسام المضادة المتنوعة المتفاعلة مع المستضدات.)

(1) البروتين المُعاد تركيبه: ≥ 2.5 ملغ، نقاء البروتين > 85%، الوزن الجزيئي للبروتين أكبر من 10 كيلو دالتون، تركيز البروتين الذائب بين 0.5 و 5 ملغ/مل. في حال تطلب الأمر تنقية البروتين باستخدام تقنية فصل البروتينات عن المستضد، يلزم إضافة 10 ملغ من البروتين المُعاد تركيبه.

(2) الببتيدات والجزيئات الصغيرة: ببتيد عارٍ ≥10 ملغ، نقاء الببتيد >90%، لا يقل عن 10 أحماض أمينية، اقتران KLH/BSA/OVA أو بروتينات حاملة أخرى؛ تتطلب الجزيئات الصغيرة تقييمًا هيكليًا مسبقًا.