الأجسام المضادة وحيدة النسيلة (mAb) رائدة في مجال أدوية الأجسام المضادة، وقد تمت الموافقة على أكثر من 100 جسم مضاد وحيد النسيلة لعلاج السرطان والأمراض المعدية، وسوق تطوير الأدوية الخاصة بها، وتُظهر قيمتها العلاجية الفريدة. تُمكّن تقنية الأجسام المضادة وحيدة الخلية البائية، كجيل جديد من تقنيات تطوير الأجسام المضادة، من عزل الأجسام المضادة بكفاءة وسرعة من الخلايا البائية المفردة، وهو ما يُعدّ نقلة نوعية في تكنولوجيا إنتاج الأجسام المضادة بعد ظهور الخلايا الهجينة والعاثية. يمكن استخدام تقنية فرز الخلايا البائية المفردة لتوليد أجسام مضادة ضد أنواع متعددة من الحيوانات، مثل الأرانب والفئران والإبل والأغنام والدجاج. تتميز تقنية الخلايا البائية المفردة بمزايا بارزة، مثل الخصوصية العالية والنشاط العالي والألفة العالية. بالاعتماد على منصة فرز الخلايا البائية المفردة، تتميز ألفا لايف تيك بمزايا في وقت الفحص والحصول على أجسام مضادة عالية الجودة. كما يمكنها توفير تصميم المستضدات، وتخليقها، وتعديلها، ومناعة الحيوانات، وفحص إثراء الخلايا البائية المفردة، وتسلسل الخلايا المفردة، والفحص عالي الإنتاجية، والتعبير الجيني، والتنقية، بالإضافة إلى خدمات تقنية شاملة، مثل التحقق الوظيفي، لتلبية الاحتياجات المتنوعة للعملاء.

اختيار المستضد المناسب للحيوانات التجريبية (مثل الفئران والأرانب وغيرها) لتحفيز المناعة، حتى تتمكن من إنتاج أجسام مضادة محددة ضد المستضد.

تحصين الحيوانات هو المرحلة الأولى من إنتاج الأجسام المضادة. وهو استخدام آلية الاستجابة المناعية الخلطية للكائن الحي نفسه، فمن خلال التحفيز المستمر للمستضدات، تُنتج الحيوانات استجابة مناعية قوية، ثم تُفرز أجسامًا مضادة محددة ضد مستضدات محددة.

عُزلت الخلايا البائية من الدم المحيطي أو الطحال أو العقد اللمفاوية لحيوانات مناعية. حُفِّزت هذه الخلايا مناعيًا لإنتاج أجسام مضادة لمستضدات محددة.

من خلال الطرق الفيزيائية أو الكيميائية (مثل الطرد المركزي لتدرج الكثافة، وفصل الخرز المغناطيسي، وما إلى ذلك) إثراء الخلايا البائية، وإزالة الخلايا الشوائب، وتحسين نقاء الخلايا البائية وكفاءة الفصل اللاحق.

يمكن استخدام فرز الخلايا المنشطة بالفلورسنت (FACS)، وفصل الخلايا المغناطيسي (MACS)، وفرز الخلايا الميكروفلويدية (MCS) أو غيرها من تقنيات الفحص عالية الإنتاجية، جنبًا إلى جنب مع وضع العلامات الخاصة بالمستضد، لفحص الخلايا البائية الفردية من الخلايا البائية المخصبة لإنتاج أجسام مضادة مستهدفة.

عند عزل خلية بائية واحدة من مجموعة خلايا بائية مختلطة، يجب تسلسل جينات الأجسام المضادة الخاصة بها باستخدام تقنية تسلسل الخلية المفردة، ثم تحليلها للحصول على معلومات تسلسل الحمض النووي لمنطقة متغيرة السلسلة الثقيلة (VH) ومنطقة متغيرة السلسلة الخفيفة (VL). تتضمن تقنية تسلسل الخلية المفردة ثلاث خطوات رئيسية: عزل الخلية المفردة، وتضخيم الأحماض النووية داخل الخلايا، وتحليل التسلسل. يقوم مبدأ تسلسل الخلية المفردة على تضخيم الحمض النووي أو الحمض النووي الريبوزي منقوص الأكسجين (DNA) للخلايا المفردة المعزولة للحصول على جينوم كامل أو نسخة منقولة ذات تغطية عالية، مما يسمح بتسلسل عالي الإنتاجية.

من خلال الفحص عالي الإنتاجية، يُمكن الحصول على تسلسلات جينات الأجسام المضادة لآلاف الخلايا البائية دفعةً واحدة، مما يُسرّع اكتشاف الأجسام المضادة بشكل كبير. ويمكن استخدام معلومات التسلسل هذه لاحقًا في بناء مكتبة الأجسام المضادة وفحصها.

الشكل 2 رسم تخطيطي لالتقاط خلية B واحدة، وبناء المكتبة، والفحص عالي الإنتاجية والتسلسل.(المصدر المرجعي:يتيح تسلسل مستقبلات الخلايا البائية أحادية الخلية المتوازية بشكل كبير اكتشافًا سريعًا للأجسام المضادة المتنوعة المتفاعلة مع المستضد.)

(1) بروتين مُعاد التركيب: ≥ 2.5 ملغ، نقاء البروتين > 85%، الوزن الجزيئي للبروتين أكبر من 10 كيلو دالتون، تركيز البروتين الذائب بين 0.5 و5 ملغ/مل. في حال الحاجة إلى تنقية تقارب المستضد، يلزم إضافة 10 ملغ من البروتين المُعاد التركيب.

(2) البوليببتيدات والجزيئات الصغيرة: الببتيد العاري ≥ 10 ملغ، نقاء الببتيد > 90٪، لا يقل عن 10 AA، اقتران KLH / BSA / OVA أو بروتينات حاملة أخرى؛ تتطلب الجزيئات الصغيرة تقييمًا هيكليًا مسبقًا.