خدمة فحص المكتبات ذات الطور الصلب

تتمتع شركة Alpha Lifetech بمجموعة واسعة من منهجيات فحص مكتبة عرض البكتيريا العاثية المثبتة، بما في ذلك الفحص باستخدام حبيبات مغناطيسية في الطور الصلب والطور السائل والفحص الخلوي وفحص الفئران الحية.

اتصل بنا

خدمة فحص المكتبات ذات الطور الصلب

مقدمة عن عرض البكتيريا العاثية

تقنية عرض العاثيات هي تقنية تستخدم العاثيات (فيروس يصيب البكتيريا) للبحث عن جزيئات ربط وظيفية لبروتينات أو ببتيدات محددة. تشمل تقنيات بناء مكتبة الأجسام المضادة للعاثيات بناء مكتبة الأجسام المضادة Fab، وبناء مكتبة الأجسام المضادة scFv، وبناء مكتبة الأجسام النانوية، وغيرها. وفقًا لأنواع العاثيات، يمكن تقسيمها إلى أنظمة M13، وT7، وT4، وλ، وغيرها. وفقًا لنوع المكتبة، يمكن تقسيمها إلى مكتبة ببتيد عشوائية، ومكتبة cDNA، ومكتبة أجسام مضادة، ومكتبة بروتين. تتميز تقنية عرض العاثيات بسهولة التشغيل وقلة التكلفة. ومع ذلك، فإن هذه التقنية تحد من تنوع الجينات الجزيئية في المكتبة التي لا يمكنها التعبير عن تسلسلات طويلة جدًا.

تُستخدم تقنية عرض العاثيات على نطاق واسع حاليًا. ومن بين هذه الإنجازات، تحقيق إنجازات مهمة في مجال البحث والتطوير للقاحات الجديدة (لقاحات اصطناعية منخفضة التكلفة وفعالة)، وتطوير أدوية الأجسام المضادة (مثبطات إنزيم الفحص)، ونقل إشارات الخلايا (فحص النظائر المُحاكاة)، وأبحاث النظائر المُستضدية (تحضير الأجسام المضادة وحيدة النسيلة).

عملية بناء مكتبة العاثيات

تتم عملية بناء مكتبة العاثيات كما يلي: تُصمَّم بادئات خاصة لتضخيم تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) للحصول على النواتج، التي تُربط إنزيميًا بناقل العاثيات T7/M13، ويُبنى بلازميد العاثيات المُعاد تركيبه بنجاح. يُحوَّل بلازميد العاثيات المُعاد تركيبه إلى خلايا مستقبلات TG1، ثم يُغلَّف بوسط يحتوي على مضادات حيوية مناسبة، وتُجرى زراعة مُوسَّعة بعد فحص المُحوِّلات. بعد جولات زراعة متعددة، يُضاعف العاثيات أزمنة التضاعف في البكتيريا ويُعبِّر بنجاح عن البروتين أو البوليببتيد المُستهدف. ثم تُنقى مكتبة العاثيات لإزالة بعض الشوائب والعاثيات غير المُرتبطة.

في الوقت الحاضر، يقتصر عدد مكتبات عرض البكتيريا العاثية المستخدمة بشكل شائع والتي تحتوي على جزيئات ذات تسلسلات مختلفة على 109. علاوة على ذلك، بمجرد بناء مكتبة عرض البكتيريا العاثية، من الصعب إجراء طفرة وإعادة تركيب فعالة في المختبر، وبالتالي الحد من التنوع الجيني الجزيئي في المكتبة.

فحص مكتبة العاثيات للطور الصلب

يعتمد نجاح إنتاج الأجسام المضادة لعرض البكتيريا العاثية بشكل أساسي على مكتبات عرض البكتيريا العاثية للأجسام المضادة، والتقنيات الشائعة لفحص مكتبة البكتيريا العاثية هي فحص الطور الصلب والطور السائل.

تُثري طريقة فحص الطور الصلب العاثيات بألفة عالية عن طريق تغليفها بلوحة إنزيمية أو غيرها من وسائط الطور الصلب. بعد ذلك، يتم الحصول على العاثية المستهدفة من خلال 3-5 دورات من "الربط-الشطف-الإثراء"، والتي يمكن استخدامها مباشرةً في التسلسل عالي الإنتاجية وتسلسل البروتين اللاحق. بالمقارنة مع فحص مستضد الطور السائل، تستهلك هذه الطريقة مستضدات أكثر، وتُدمر بعض مُستضدات المستضد. تعتمد طريقة تحليل العاثيات على الاحتياجات التجريبية، والتي سيكون لها تأثير مُعين على إنتاج الأجسام المضادة لعرض العاثيات.

بالإضافة إلى طريقة الفحص التقليدية، هناك طرق فحص جديدة مناسبة للمستضدات التي لا يمكن تنقيتها أو التي تكون طبيعتها غير واضحة. تشمل طرق الفحص الجديدة حاليًا فحص الخلايا، وفحص مقطع الأنسجة أو فحص الجسم الحي، وفحص العدوى الانتقائية، وفحص شريحة البروتين، وغيرها.

فحص مكتبة البكتيريا العاثية للفحص عالي الإنتاجية

أصبح اكتشاف الأجسام المضادة ذا أهمية متزايدة في الطب الحديث. منذ عام ١٩٩٠، استُخدمت صيغ مختلفة من الأجسام المضادة لبناء مكتبات العاثيات، بما في ذلك VHs وVHHs وscFvs والأجسام المضادة للفيروسات القهقرية (diabodies) والأجسام المضادة لـ Fab. تُدمج شظايا الأجسام المضادة هذه مع G3P للعاثية M13، وباستنساخ أعداد كبيرة من الجينات التي تُشفّر شظية جسم مضاد، يمكن إنشاء مكتبات كبيرة من الأجسام المضادة لعرض العاثيات، والتي يمكن من خلالها اختيار العديد من الأجسام المضادة المتنوعة.

توجد طرق مختلفة لاكتشاف الأجسام المضادة، إلا أن الفحص عالي الإنتاجية يُستخدم بشكل أكبر في العلوم الطبية. يمكن الحصول على تنوع كبير في مخزون الأجسام المضادة بهذه الطريقة. كما أن دمجها مع طرق فحص مكتبة الأجسام المضادة التقليدية يُحسّن جودة فحص مكتبات عرض العاثيات. بعد الفحص البيولوجي، يمكن تمييز الأجسام المضادة باستخدام اختبار ELISA منخفض الإنتاجية أو الفحص عالي الإنتاجية.

يمكن لشركة ألفا لايف تيك أن تقدم

لطالما انخرطت شركة ألفا لايف تيك في مجال تقنية عرض البكتيريا العصوية (Phage). وقد طورت منصة عرض مثالية ومستقرة، تُوفر الوقت والجهد اللازمين للبحث العلمي أو أبحاث المشاريع، وتُسهّل الإنتاج اللاحق. كما تُقدم ألفا لايف تيك خدماتٍ للعملاء، مثل إنتاج الأجسام المضادة vhh وscFv وFab.

تمتلك ألفا لايف تيك منصة عرض شاملة لبكتيريا M13/T7 لضمان بناء وإنتاج مكتبات الأجسام المضادة. كما نقدم خدمات مخصصة، مثل إنتاج scFv للأجسام المضادة، وخدمات الفحص عالية الإنتاجية لتلبية احتياجاتكم.تتمتع شركة Alpha Lifetech بمجموعة واسعة من منهجيات فحص مكتبة عرض البكتيريا العاثية المثبتة، بما في ذلك الفحص باستخدام حبيبات مغناطيسية في الطور الصلب والطور السائل والفحص الخلوي وفحص الفئران الحية.

تطبيق عرض البكتيريا العاثيةطلب

تستطيع أنظمة عرض البكتيريا الكشف عن الببتيدات الخاصة بالسرطان من خلال الفحص البيولوجي. ويمكن استخدام مكتبات مصفوفات الببتيد الاصطناعية كطرق تكميلية لعرض البكتيريا لفحص وتحديد الروابط الخاصة بالسرطان. قامت كور ك. بتصنيع مكتبة مصفوفات ببتيدية تعتمد على قائد الاثني عشر وجهًا p160 على غشاء سليلوز وظيفي باستخدام كيمياء الطور الصلب وجهاز تخليق آلي، وقيّمت تقارب الارتباط النسبي لمكتبة الببتيد عن طريق حضانتها مع خلايا سرطانية مُوسومة بالفلورسنت أو خلايا غير سرطانية. تتميز الببتيدات بانتقائيتها وقدرتها العالية على الارتباط بالخلايا السرطانية، ويمكن استخدامها لتوصيل الأدوية الموجهة للسرطان، والتصوير، والتشخيص. الصورة 1

الشكل 1 تمثيل تخطيطي للتخليق التدريجي لمجموعة الببتيد على غشاء السليلوز الوظيفي (amino-PEG500-UC540) بعد تخليق SPOT.(المصدر المرجعي:مكتبة مصفوفات الببتيدات للفحص لتحديد الببتيدات المرتبطة بخلايا السرطان - PubMed (nih.gov))

سير عمل خدمة فحص المكتبة ذات الطور الصلب

محتوى الخدمة	معيار مراقبة الجودة	الجدول الزمني
تغليف المستضد (فحص البروتين الفردي، والافتراضي التقليدي هو فحص الطور الصلب أو فرز الخرز المغناطيسي)؛ 3 جولات افتراضية من الفحص: فحص الضغط، وإزالة الحد الأقصى من الأجسام المضادة المحددة؛ تم اختيار استنساخات مفردة مضخمة، مستحثة بـ IPTG واستنساخات إيجابية لـ ELISA؛ تم اختيار جميع النسخ الإيجابية لتسلسل الجينات؛	معايير ELISA الإيجابية: P/N>3؛ معايير فحص VHH: تسلسل الأحماض الأمينية CDR مختلف	2-3 أسابيع