خدمة إنشاء مكتبة التصنيع الصناعي

مقدمة لخدمة إنشاء مكتبة Synthetic Fabفاب

تُقسّم مكتبات الأجسام المضادة عادةً إلى مكتبات أصلية، أو مناعية، أو تركيبية. تشمل هذه المكتبات مكتبة الأجسام المضادة للعاثيات، ومكتبة الأجسام المضادة للجزيئات الحرة (الريبوسومات، mRNA، DNA)، ومكتبة الأجسام المضادة لسطح الخلية (البكتيريا، الفطريات، الخميرة، الثدييات).

Fab هو جزء كامل من الأجسام المضادة، يتكون من VH ومنطقة ثابتة من السلسلة الثقيلة CH1، وسلسلة خفيفة VL ومنطقة ثابتة من السلسلة الخفيفة CL، والتي ترتبط بروابط ثنائي كبريتيد بين السلاسل لتشكيل ثنائيات غير متجانسة، مع موقع ربط مستضد كامل واحد فقط، ويبلغ وزنه الجزيئي حوالي 1/3 من جزيء IgG الكامل، والذي يمكنه فحص الأجسام المضادة المثالية بسرعة ذات تقارب عالي.

الشكل 1 بنية IgG البشرية وأجزاءها.(المصدر المرجعي: الأجسام المضادة الاصطناعية في الأمراض المعدية - PubMed (nih.gov)

عرض الأجسام المضادة

الأجسام المضادة جزء لا يتجزأ من الجهاز المناعي للفقاريات، وتعمل عن طريق الارتباط النوعي بالمستضدات بألفة وخصوصية عاليتين. مع تطور التكنولوجيا، ظهرت تقنية الورم الهجين، وتم إنتاج أول جسم مضاد علاجي في العالم معتمد من قِبل إدارة الأغذية والأدوية الأمريكية (FAD) باستخدام هذه التقنية.

مع ذلك، فإن الأجسام المضادة وحيدة النسيلة المُنتَجة بتقنية الورم الهجين لها بعض القيود. فعند استخدامها كجسم مضاد علاجي لعلاج البشر، قد تُسبب رد فعل تحسسي قوي في الجسم. بناءً على ذلك، تم استخلاص أجسام مضادة هجينة ومؤنسنة ذات مناعة منخفضة للعلاج. يمكن لتقنيات عرض الفئران والعاثيات المُطوّرة حديثًا إنتاج أجسام مضادة بشرية بالكامل، حيث يتشابه تسلسل الأحماض الأمينية فيها مع الأجسام المضادة البشرية، وبالتالي تكون أقل مناعة.

يُنتج عرض الأجسام المضادة أجسامًا مضادة خاصة بالهدف، ويمكنه التغلب على بعض قيود طرق إنتاج الأجسام المضادة القائمة على مناعة الحيوانات. منذ عام ١٩٩٠، استُخدمت صيغ مختلفة من الأجسام المضادة لإنشاء مكتبات أجسام مضادة، بما في ذلك شظايا الأجسام المضادة البشرية ذات النطاق الثقيل (VHs)، وشظايا الأجسام المضادة لسمك الموظ وسمك القرش (VHHs)، وأجسام scFvs، وأجسام مضادة لمرض السكري (ثنائية التكافؤ scFvs)، وأجسام مضادة كاملة الربط للمستضد (Fab).

يمكن لشركة ألفا لايف تيك أن تقدم

لطالما انخرطت شركة ألفا لايف تيك في مجال تقنية عرض عاثيات الأجسام المضادة. وقد طورت منصة عرض عاثيات مستقرة ومثالية، مما يوفر الوقت للأبحاث العلمية أو مشاريع البحث، ويسهل الإنتاج اللاحق. كما توفر ألفا لايف تيك لعملائها عروض عاثيات الأجسام المضادة (مثل عرض عاثيات الجسم النانوي، وعرض عاثيات scFv، وعرض عاثيات Fab).

توفر ألفا لايف تيك منصة عرض شاملة لبكتيريا M13/T7 لضمان بناء وإنتاج مكتبات الأجسام المضادة. كما نقدم خدمات مخصصة، مثل عرض بكتيريا scFv، وإنتاج أجسام مضادة Fab، وتنقية أجسام مضادة Fab، لتلبية احتياجاتكم.

حالة بناء مكتبة الأجسام المضادة الاصطناعية

أنشأ هوانغ جي طريقة جديدة لعرض البكتيريا العصوية، والتي يمكن الحصول عليها بعد عملية كهرومسامية واحدة، وتنوع المكتبة هو 10^9-10^10.

تتضمن العملية التجريبية 1) إعداد خلايا ذات كفاءة كهربائية عالية؛ 2) استخلاص dU-ssDNA؛ 3) الطفرات الموجهة بالنيوكليوتيدات استنادًا إلى طريقة كونكل؛ 4) الكهرومسامية وحساب حجم المكتبة؛ 5) اختبار الممتز المناعي المرتبط بالإنزيم (ELISA) القائم على البروتين A/L لتقييم التنوع الوظيفي والطي؛ 6) تحليل تسلسل الحمض النووي المتنوع.

الشكل 2: معايرة البكتيريا العاثية لحساب حجم المكتبة. (المصدر المرجعي: إنشاء مكتبة فاب لعرض البكتيريا الاصطناعية مع تنوع مصمم خصيصًا - PubMed (nih.gov)

قام كيم واي جيه بفحص مكتبة عرض البكتيريا الاصطناعية Fab على RBD لبروتين S لفيروس SARS-CoV-2 وحصل على جسم مضاد وحيد النسيلة يمكنه تحييد SARS-CoV-2، ومنع غزو الفيروس بنجاح، وتوفير أساس لاستخدام الجسم المضاد كأداة علاجية.

الشكل 3: تحليل مكتبة Fab الاصطناعية المعروضة بواسطة البكتيريا على مجال ربط مستقبلات SARS-2 المثبت (RBD).(المصدر المرجعي: أجسام مضادة بشرية محايدة ضد فيروس كورونا 2 المسبب لمتلازمة الجهاز التنفسي الحادة الوخيمة المعزول من فاج صناعي بشري - مكتبة العرض - PubMed (nih.gov)

خدمة إنشاء مكتبة الأجسام المضادة الاصطناعية

تم بنجاح بناء بلازميد فاج مُعاد التركيب عن طريق دمج جزيء الجسم المضاد Fab مع بروتين غلاف فاج أحادي السلسلة (PⅢ أو PⅧ)، ثم حُوِّل إلى خلايا مستقبلات TG1، وغُطيت بالوسط المحتوي على المضادات الحيوية المناسبة، ثم ضُخِّمَت واستُزرعت بعد فحصها للكشف عن البروتيوس. بعد جولات زراعة متعددة، يتضاعف الفاج عدة مرات في البكتيريا ويعبر بنجاح عن البروتين أو البوليببتيد المستهدف. تُكرر عملية امتزاز المستضد واستخراجه وتضخيمه لفحص الجسم المضاد Fab المطلوب، ثم لتنقيته.

سير عمل إنشاء مكتبة الأجسام المضادة الاصطناعية

خطوات	مواصفة
الخطوة 1: اختبار المناعة واختبار ELISA	1) الحيوانات التجريبية المناعية (التطعيم القياسي 5 حقن)؛ 2) الكشف عن عيار الأجسام المضادة في المصل 4 و5 على التوالي، إذا كان الكشف عن عيار الأجسام المضادة للجرعة الرابعة يلبي المتطلبات (بروتين يلبي عيار المصل ELISA >10^5؛ جزيء صغير >10^4)، ثم قبل 7 أيام من جمع الدم، يتم التحصين مرة أخرى، إذا لم يتم تلبية المتطلبات، يستمر التحصين الروتيني (إرسال نتائج اختبار العيار والمصل المناعي إلى العميل، وفقًا لنتائج اختبار العيار، يتم اختيار الحيوانات المصلية الإيجابية لعمليات المتابعة) تم تحديد العيار وتم عزل PBMC عن طريق أخذ عينات الدم
الخطوة 2: خدمة فحص الأجسام المضادة وحيدة النسيلة	1) باستخدام cDNA للمكتبة كقالب، تم تضخيم جين V بواسطة تفاعل البوليميراز المتسلسل ثلاثي العجلات 2) بناء وتحويل ناقل عرض البكتيريا العصوية: ربط جين V بناقل عرض البكتيريا العصوية، وتحويل الصدمة الكهربائية للبكتيريا المضيفة، وبناء مكتبة الأجسام المضادة 3) التعريف: تم اختيار 24 مستنسخًا عشوائيًا وتم تحديد المعدل الإيجابي بواسطة تفاعل البوليميراز المتسلسل 4) 3 جولات افتراضية من الفحص: تسلسل NGS للجولة الثالثة من المنتجات؛ وفي الوقت نفسه، تم اختيار 192 استنساخًا للتعبير التحريضي والكشف عن ELISA. 5) تم اختيار جميع النسخ الإيجابية لتسلسل الجينات (>60 نسخة إيجابية لكل فحص، حتى 192)؛ 6) التسليم: تسلسل الأجسام المضادة Fab 5-10 (تسلسل غير متكرر)؛ تقرير المختبر، بيانات الاختبار الخام، مكتبة العاثيات
الخطوة 3: التعبير المؤتلف عن الأجسام المضادة وحيدة النسيلة IgG	1) وفقًا لنتائج التحقق من العميل، نوصي العميل بإعادة تنظيم تعبير 5 تسلسلات؛ 2) إنشاء متجه + تعبير الخلية + التنقية