خدمة فحص مكتبة عرض سطح الخميرة

تتخصص شركة ألفا لايف تيك في إنشاء مكتبات عرض الخميرة وفحص مكتبات الأجسام المضادة، مما يوفر إمكانية إنشاء أشكال مختلفة من مكتبات الخميرة وفحصها بحثًا عن أجسام مضادة عالية الألفة ومحددة لعملائها حول العالم. بفضل فريق من الباحثين الخبراء، وتقنياتنا ومعداتنا المتطورة، يمكننا إنشاء مكتبات خميرة تستهدف مجموعة واسعة من البروتينات المرتبطة بالأمراض. كما نقدم تقنيات عرض البكتيريا العاثية وعرض الخميرة، بما في ذلك عرض بروتين الخميرة، وعرض خميرة الجزيئات الصغيرة، وعرض خميرة الأجسام المضادة، وغيرها.

تتميز مكتبات عرض الخميرة لدينا بسعة كبيرة وتنوع عالٍ، مما يوفر أساسًا قويًا للفحص الفعال لتسلسلات الأجسام المضادة المحددة. يمكننا إنشاء أشكال مختلفة من مكتبات عرض الخميرة للأجسام المضادة (IgG، scFv، VHH، Fab)، ومكتبات البروتين، ومكتبات الببتيد، ومكتبات cDNA، وغيرها وفقًا لاحتياجاتكم. بالإضافة إلى ذلك، يمكننا أيضًا تطوير مكتبات أجسام مضادة ذات خصائص متنوعة، بما في ذلك مكتبات المناعة، والمكتبات الطبيعية، والمكتبات التركيبية، وشبه التركيبية، ومكتبات الأجسام المضادة للأمراض.

مقدمة لنظام عرض الخميرة

تقنية عرض سطح الخميرة هي طريقة لعرض البروتينات المُعاد تركيبها على سطح الخميرة من خلال اندماج الجينات. يستخدم نظام عرض الخميرة الأكثر شيوعًا البروتين المستهدف المندمج مع الطرف الكربوكسيلي للوحدة الفرعية Aga2p لبروتين تزاوج ألفا لكتين، والذي يتكون بشكل أساسي من علامات إبيتوبية على جانبي البروتين المستهدف: علامة الهيماغلوتينين (HA) ذات الطرف الأميني المكون من 9 أحماض أمينية، وعلامة c-myc ذات الطرف الكربوكسيلي المكون من 10 أحماض أمينية. ترتبط الوحدة الفرعية Aga2p، المكونة من 69 حمضًا أمينيًا، بالوحدة الفرعية Aga1p، المكونة من 725 حمضًا أمينيًا، من خلال رابطتين ثنائي الكبريتيد، بينما ترتبط Aga1p بجدار الخلية من خلال رابطة تساهمية β1,6-glucan. لذلك، يُعرض البروتين المستهدف على سطح خلايا الخميرة، ويتعرف عليه لاحقًا الربيطة المقابلة. افصل البروتينات الوظيفية من المكتبات من خلال فحص قياس التدفق الخلوي.

الشكل 1: مبدأ عرض سطح الخميرة. (مصدر الشكل:تطبيقات عرض سطح الخميرة في هندسة البروتين.)

مقدمة لمكتبة عرض سطح الخميرة

يعتمد فرز عرض الخميرة على عرض سطحها، ويُستخدم بشكل رئيسي لفحص مكتبات الأجسام المضادة التي تستهدف بروتينات سطح الخلية. ونظرًا لانخفاض الارتباط غير النوعي بين خلايا الخميرة وأسطح الخلايا الأخرى، يُمكن للانتقاء البيولوجي للخميرة فحص مكتبات الارتباط الكبيرة للعثور على مستنسخات نادرة.

خدمة فحص مكتبة عرض سطح الخميرة

حضّر البلازميدات وازرع خلايا الخميرة، ثم اصنع الحمض النووي المشفر للبروتين المستهدف، ثم استنسخه في ناقل تعبير خميرة يحتوي على محفزات قابلة للتحريض، وببتيدات إشارة، وجينات مستهدفة مندمجة مع بروتينات العرض السطحي (مثل Aga2p). يمكن دمج الجين المشفر للبروتين المستهدف مع الجين المشفر لبروتين جدار خلية الخميرة (عادةً Aga2p)، وتحويل الجين المندمج إلى خلايا خميرة عبر الكهروإبْرَاتْن. بعد التحويل، تخضع خلايا الخميرة التي تُعبِّر عن جينات الأجسام المضادة على سطحها لاختبارات فحص خاصة بالمستضد: تُحضَّن مكتبة الخميرة مع المستضد المستهدف، وتُختار خلايا الخميرة التي ترتبط به تحديدًا. باستخدام فرز الخلايا المنشَّطة بالفلورسنت (FACS) لعزل خلايا الخميرة التي تعرض بروتينات ذات خصائص مرغوبة، يمكن إجراء فحص مكتبة عرض الخميرة بحد أقصى لحجم مكتبة يتراوح بين 10 و10 خلايا خميرة. بعد ذلك، يمكن عزل النسخ الإيجابية لمزيد من التحليل أو التطبيقات اللاحقة. بمجرد تحديد مستنسخات الأجسام المضادة المحددة من مكتبة الأجسام المضادة، يمكن وصفها بشكل أكبر وإنتاجها بكميات كبيرة وتنقيتها باستخدام تقنيات مثل كروماتوغرافيا تقارب البروتين A/G لإكمال العملية الكاملة لفحص عرض الخميرة وإنتاج الأجسام المضادة.

عملية فحص مكتبة عرض الخميرة

الشكل 2 عملية فحص مكتبة عرض الخميرة

سير عمل خدمة فحص مكتبة عرض الخميرة

خطوات	محتوى الخدمة	الجدول الزمني
تحضير المستضد	نوع المستضد: إذا كان العميل قادرًا على توفير المستضدات، فيجب تسليم العينات المقابلة وفقًا للنوع: تتطلب البروتينات المعاد تركيبها 3-3.5 ملغ مع متطلبات نقاء تزيد عن 85٪، ويجب ربط الجزيئات الصغيرة بمتطلبات نقاء تزيد عن 90٪، ويجب ربط تخليق الببتيد بمتطلبات نقاء تزيد عن 90٪، ويجب تعطيل أنواع العينات مثل الفيروسات، ويجب فحص الحمض النووي الريبي لمنع التحلل، ويمكن أيضًا تخصيص أنواع المستضد المذكورة أعلاه للتخليق.	2-3 أسابيع
مناعة الحيوان	عدد التطعيمات الحيوانية هو ٥، ومن الضروري تحديد ما إذا كان ينبغي زيادة عدد التطعيمات بناءً على فحص عيار المصل. مناعة المستضد: قوة مستضد البروتين/الفيروس >١٠٥؛ قوة مستضد الببتيد/الجزيئات الصغيرة >١٠^٤	5-6 أسابيع
تحضير قالب cDNA	افصل خلايا الدم المحيطية البلازمية، واستخرج الحمض النووي الريبي الكلي (مجموعة استخراج الحمض النووي الريبي) ثم اعكسه إلى الحمض النووي الريبي التكميلي.	يوم واحد
بناء المكتبة	باستخدام الحمض النووي التكميلي للمكتبة كنموذج، تم تضخيم جين VHH بجولتين من تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR)، وتم بناء ناقل عرض خميرة لربط جين VHH. حُوِّل الناقل إلى خلايا خميرة بواسطة الكهروإدخال لبناء مكتبة أجسام مضادة. اختير 48 مستنسخًا عشوائيًا، وحُدِّد معدل النتائج الإيجابية (>90%) باستخدام طريقة تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR)؛ ثم احسب سعة المكتبة (10^7-10^8)، وتسلسل NGS لتحديد معدل إدراج المكتبة الصحيح (>90%) وتنوع المكتبة.	اسبوعين
عرض المكتبة	ثلاث جولات فحص افتراضية: فحص البروتين المُلوَّن بالفلورسنت بتقنية FACS، يليه تسلسل NGS في الجولة الثالثة. اختيرت النسائل الإيجابية للتعبير الجيني باستخدام جرام واحد والكشف باستخدام ELISA. اختيرت جميع النسائل الإيجابية لتسلسل الجينات، واختيرت تسلسلات مختلفة لمنطقة CDR.	2-3 أسابيع
التحقق من الأجسام المضادة	إن إنشاء متجهات التعبير المناسبة لتسلسلات الأجسام المضادة يمكن أن يسهل التعبير عن الأجسام المضادة، وتنقية الأجسام المضادة، والتحقق من صحة ارتباط المستضد بالأجسام المضادة باستخدام ELISA وBLI للتحقق من تقارب الأجسام المضادة، وحصار التدفق الخلوي للتحقق من صحة وظيفة الخلية.	أسبوع واحد

حالة عرض سطح الخميرة في المكتبة

في أدبيات منصة عرض سطح الخميرة لاكتشاف سريع للأجسام النانوية الانتقائية التكوينية، أنشأ الباحثون منصة اكتشاف كاملة للأجسام النانوية في المختبر تعتمد على عرض سطح الخميرة. في البداية، صُممت مكتبة أجسام نانوية اصطناعية انطلاقًا من جينات الإبل. يوضح الشكل د أن الجسم النانوي يحمل وسم HA عند الطرف الكربوكسيلي، ثم يُثبّت تساهميًا على جدار خلية الخميرة. يوضح الشكل هـ عملية فحص الأجسام النانوية. عُزلت الخميرة ذات الأجسام النانوية ذات ألفة المستضد، وكُبّر حجمها، ثم انتُقيت بشكل متكرر لإنتاج الأجسام المضادة بواسطة FACS. اكتشف الباحثون أجسامًا نانوية انتقائية التكوين تستهدف نوعين مختلفين من مستقبلات GPCR البشرية من خلال هذه المنصة.