خدمة فحص مكتبة عرض سطح الخميرة

تتخصص شركة ألفا لايف تك في بناء مكتبات عرض الخميرة وفحص مكتبات الأجسام المضادة، حيث توفر القدرة على إنتاج أنواع مختلفة من مكتبات الخميرة وفحصها بحثًا عن أجسام مضادة عالية الألفة والنوعية لعملائها في جميع أنحاء العالم. بفضل فريقنا من الباحثين الخبراء، وتقنياتنا ومعداتنا المتطورة، نستطيع بناء مكتبات الخميرة التي تستهدف مجموعة واسعة من البروتينات المرتبطة بالأمراض. كما نوفر تقنيات عرض العاثيات وعرض الخميرة، بما في ذلك عرض بروتينات الخميرة، وعرض الجزيئات الصغيرة في الخميرة، وعرض الأجسام المضادة في الخميرة، وغيرها.

تتميز مكتبات عرض الأجسام المضادة في الخميرة لدينا بسعة كبيرة وتنوع عالٍ، مما يوفر أساسًا متينًا لفحص تسلسلات الأجسام المضادة المحددة بكفاءة. يمكننا إنشاء أنواع مختلفة من مكتبات عرض الأجسام المضادة في الخميرة (مكتبات الأجسام المضادة IgG، وscFv، وVHH، وFab)، ومكتبات البروتينات، ومكتبات الببتيدات، ومكتبات الحمض النووي المكمل (cDNA)، وغيرها، وفقًا لاحتياجاتكم. بالإضافة إلى ذلك، يمكننا أيضًا تطوير مكتبات أجسام مضادة ذات خصائص متنوعة، بما في ذلك المكتبات المناعية، والمكتبات الطبيعية، والمكتبات الاصطناعية، والمكتبات شبه الاصطناعية، ومكتبات الأجسام المضادة للأمراض.

مقدمة إلى نظام عرض الخميرة

تقنية عرض البروتينات على سطح الخميرة هي طريقة لعرض البروتينات المُعاد تركيبها على سطح الخميرة من خلال دمج الجينات. يعتمد نظام عرض الخميرة الأكثر شيوعًا على دمج البروتين المستهدف مع الطرف الكربوكسيلي للوحدة الفرعية Aga2p من بروتين التزاوج ألفا ليكتين، والذي يتكون أساسًا من علامات محددة على جانبي البروتين المستهدف: علامة الهيماغلوتينين (HA) المكونة من 9 أحماض أمينية في الطرف الأميني، وعلامة c-myc المكونة من 10 أحماض أمينية في الطرف الكربوكسيلي. ترتبط الوحدة الفرعية Aga2p المكونة من 69 حمضًا أمينيًا بالوحدة الفرعية Aga1p المكونة من 725 حمضًا أمينيًا من بروتين ألفا ليكتين عبر رابطتين ثنائيتي الكبريتيد، وترتبط Aga1p بجدار الخلية عبر رابطة تساهمية من نوع β 1,6-غلوكان. بالتالي، يُعرض البروتين المستهدف على سطح خلايا الخميرة، ثم يتعرف عليه الربيطة المناسبة. يتم فصل البروتينات الوظيفية من المكتبات من خلال فحص التدفق الخلوي.

الشكل 1: مبدأ عرض الخميرة على السطح. (مصدر الشكل: تطبيقات عرض سطح الخميرة في هندسة البروتين.)

مقدمة إلى مكتبة عرض سطح الخميرة

تعتمد تقنية فرز عرض الخميرة على عرض البروتينات على سطحها، وتُستخدم بشكل أساسي لفحص مكتبات الأجسام المضادة التي تستهدف بروتينات سطح الخلية. ونظرًا لانخفاض الارتباط غير النوعي بين خلايا الخميرة وأسطح الخلايا الأخرى، يُمكن للاختيار البيولوجي للخميرة فحص مكتبات الارتباط الكبيرة للعثور على المستنسخات النادرة.

خدمة فحص مكتبة عرض سطح الخميرة

يتم تحضير البلازميدات وزراعة خلايا الخميرة، ثم يتم تصنيع الحمض النووي الذي يشفر البروتين المستهدف واستنساخه في ناقل تعبير الخميرة الذي يحتوي على محفزات قابلة للتحريض، وببتيدات إشارة، وجينات مستهدفة مدمجة مع بروتينات عرض سطحية (مثل Aga2p). يمكن دمج الجين المشفر للبروتين المستهدف مع الجين المشفر لبروتين جدار خلية الخميرة (عادةً Aga2p)، ويمكن تحويل الجين المدمج إلى خلايا الخميرة عن طريق التحويل الكهربائي. بعد التحويل، تخضع خلايا الخميرة التي تعبر عن جينات الأجسام المضادة على سطحها لاختبارات فحص خاصة بالمستضد: حيث يتم حضن مكتبة الخميرة مع المستضد المستهدف، ثم يتم اختيار خلايا الخميرة التي ترتبط به بشكل خاص. باستخدام فرز الخلايا المنشط بالفلورة (FACS) لعزل خلايا الخميرة التي تعرض بروتينات ذات خصائص مرغوبة، يمكن إجراء فحص مكتبة عرض الخميرة بحد أقصى لحجم المكتبة يتراوح بين 10^8 و10^9 خلية خميرة. بعد ذلك، يمكن عزل المستنسخات الإيجابية لمزيد من التحليل أو التطبيقات اللاحقة. بمجرد تحديد مستنسخات الأجسام المضادة المحددة من مكتبة الأجسام المضادة، يمكن توصيفها بشكل أكبر وإنتاجها بكميات كبيرة، وتنقيتها باستخدام تقنيات مثل كروماتوغرافيا تقارب البروتين A/G لإكمال العملية الكاملة لفحص عرض الخميرة وإنتاج الأجسام المضادة.

عملية فحص مكتبة عرض الخميرة

الشكل 2: عملية فحص مكتبة عرض الخميرة

سير عمل خدمة فحص مكتبة عرض الخميرة

خطوات	محتوى الخدمة	الجدول الزمني
تحضير المستضد	نوع المستضد: إذا كان بإمكان العميل توفير المستضدات، فيجب تسليم العينات المقابلة وفقًا للنوع: تتطلب البروتينات المؤتلفة 3-3.5 ملغ مع متطلبات نقاء تزيد عن 85٪، وتحتاج الجزيئات الصغيرة إلى الاقتران مع متطلبات نقاء تزيد عن 90٪، ويحتاج تخليق الببتيد إلى الاقتران مع متطلبات نقاء تزيد عن 90٪، وتحتاج أنواع العينات مثل الفيروسات إلى تعطيلها، ويحتاج الحمض النووي الريبي إلى الفحص لمنع التحلل، ويمكن أيضًا تخصيص أنواع المستضدات المذكورة أعلاه للتخليق.	2-3 أسابيع
مناعة الحيوانات	يبلغ عدد جرعات التطعيم للحيوانات 5 جرعات، ومن الضروري تحديد ما إذا كان ينبغي زيادة عدد الجرعات بناءً على اختبار عيار المصل. مناعة المستضد: فعالية مستضد البروتين/الفيروس > 10⁵؛ فعالية مستضد الببتيد/الجزيء الصغير > 10⁴	5-6 أسابيع
تحضير قالب الحمض النووي التكميلي (cDNA)	افصل خلايا الدم المحيطية أحادية النواة (PBMCs) من البلازما، واستخلص الحمض النووي الريبي الكلي (باستخدام مجموعة استخلاص الحمض النووي الريبي) وقم بتحويله إلى الحمض النووي التكميلي (cDNA).	يوم واحد
بناء مكتبة	باستخدام مكتبة الحمض النووي التكميلي (cDNA) كقالب، تم تضخيم جين VHH عبر جولتين من تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR)، وتم بناء ناقل عرض جين VHH في الخميرة. تم تحويل الناقل إلى خلايا الخميرة باستخدام التحويل الكهربائي لإنشاء مكتبة أجسام مضادة. تم اختيار 48 مستنسخًا عشوائيًا وتحديد معدل الإيجابية (>90%) باستخدام طريقة PCR؛ وحُسبت سعة المكتبة (10^7-10^8)، وتم إجراء تسلسل الجيل التالي (NGS) لتحديد معدل إدخال المكتبة الصحيح (>90%) وتنوع المكتبة.	أسبوعين
عرض المكتبة	تتضمن عملية الفحص ثلاث جولات افتراضية: فحص البروتينات الموسومة بالفلورة باستخدام تقنية FACS، يليه تسلسل الجيل التالي (NGS) في الجولة الثالثة. تم اختيار المستنسخات الإيجابية لتحفيز التعبير عن جين gram المفرد والكشف عنه باستخدام تقنية ELISA. تم اختيار جميع المستنسخات الإيجابية لتسلسل الجينات، وتم اختيار تسلسلات مناطق CDR المختلفة.	2-3 أسابيع
التحقق من الأجسام المضادة	إن بناء نواقل التعبير المناسبة لتسلسلات الأجسام المضادة يمكن أن يسهل التعبير عن الأجسام المضادة، وتنقية الأجسام المضادة، والتحقق من صحة ارتباط الأجسام المضادة بالمستضد باستخدام ELISA وBLI للتحقق من تقارب الأجسام المضادة، وحجب قياس التدفق الخلوي للتحقق من وظيفة الخلية.	أسبوع واحد

دراسة حالة فحص مكتبة عرض سطح الخميرة

في مجال منصات عرض البروتينات على سطح الخميرة لاكتشاف الأجسام النانوية الانتقائية بنيويًا بسرعة، أنشأ الباحثون منصة متكاملة لاكتشاف الأجسام النانوية في المختبر باستخدام تقنية عرض البروتينات على سطح الخميرة. في البداية، صُممت مكتبة أجسام نانوية اصطناعية انطلاقًا من جينات الإبل. يوضح الشكل (د) أن الجسم النانوي يحمل علامة HA في نهايته الكربوكسيلية، ثم يُثبت تساهميًا على جدار خلية الخميرة. يوضح الشكل (هـ) عملية فحص الأجسام النانوية. عُزلت الخميرة الحاملة للأجسام النانوية ذات الألفة للمستضد، وكُثفت، ثم اختيرت بشكل متكرر للأجسام المضادة باستخدام تقنية فرز الخلايا المنشطة بالفلورة (FACS). اكتشف الباحثون، من خلال هذه المنصة، أجسامًا نانوية انتقائية بنيويًا تستهدف نوعين مختلفين من مستقبلات البروتين المقترن بالبروتين ج (GPCRs) البشرية.