Yaxınlıq Ölçmə Platforması

Octet və Biacore-T2000 platformasına əsaslanan Alpha Lifetech etibarlı affinlik təyini xidmətləri təqdim edə bilər. Antikorlar, hüceyrələr, zülallar, kiçik molekullar və s. kimi birdən çox nümunə üçün affinlik təyini təmin edə bilərik. Səth plazmon rezonansı (SPR) və bio-təbəqə müdaxiləsi (BLI) affinlik təyini də daxil olmaqla müxtəlif affinlik təyini üsulları mövcuddur.

Alpha Lifetech, dünya miqyasında müştərilər üçün peşəkar, səmərəli, sürətli və dəqiq yaxınlıq təyini nəticələrini təmin edən ELISA ilə yaxınlıq təyinini birləşdirən peşəkar və dəqiq yaxınlıq təyini platformasına malikdir. Müştərilərimizin seçim edə biləcəyi iki üsul təklif edə bilərik: Sürətli Yaxınlıq Təyinatı və Dəqiq Yaxınlıq Təyinatı. Sürətli yaxınlıq təyinatı tək konsentrasiyalı təyinatdır, dəqiq yaxınlıq təyinatı isə müxtəlif konsentrasiyaların yaxınlığını ölçə bilər. Müxtəlif kiçik molekullu birləşmələr, peptidlər, zülallar, oliqonukleotidlər və oliqomerlər, eləcə də lipidlər, bakteriofaqlar, viruslar və hüceyrələr arasında qarşılıqlı təsirlərin öyrənilməsinə tətbiq olunur. Yaxınlıq ölçmə platforması yaxınlıq dərmanı testi və müayinəsi, antikor kəşfi üçün təməl qoya və sonrakı tədqiqatları asanlaşdıra bilər.

Bağlayıcı Yaxınlığa Giriş

Affinlik molekullararası qarşılıqlı təsirlərin qiymətləndirilməsində, dərman preparatlarının affinlik analizlərində və dərmanların skrininqində vacibdir. Molekullararası qarşılıqlı təsirlər aşağıdakı tənliklərlə təsvir edilə bilər: L + R = LR, burada L sərbəst ligandları, R bağlı olmayan reseptorları və LR bağlı ligand-reseptor komplekslərini təmsil edir. Bağlanma reaksiyaları, tarazlıq əldə edilənə qədər reaksiya zamanı bağlı və bağlı olmayan hallar arasında dinamik mübadilənin baş verdiyi molekullararası qarşılıqlı təsirləri təyin edir. Bu, reaksiyanın iki sürət sabiti, Kon (bağlanma sürəti sabiti) və Koff (dissosiasiya sürəti sabiti) ilə təsvir edilə bilər. Bağlanma sabitinin (Ka) əksi olan Kd dəyəri, reaksiya affinliyi üçün vacib bir sabit olan Koff/Kon-dur. Buna görə də, iki molekul arasındakı bağlanma nə qədər sıx olarsa, affinlik bir o qədər yüksəkdir. Kd dəyəri nə qədər kiçik olarsa, əksinədir. Bu tənlik, ligand konsentrasiyası x oxunda (loqarifmik miqyas oxunda) və y oxunda kəsr sərhədi olan yarımloqarifmik qrafikdə S formalı əyri kimi təmsil oluna bilər. Kəsikli xətt 0,5 bağlayıcı fraksiyanın Kd (1 nM)-də ligand konsentrasiyasını göstərir.

Şəkil 1: Hüceyrə səthi reseptoruna bağlı müxtəlif konsentrasiyalı ligandın sigmoidal bağlanma əyrisi. (İstinad mənbəyi: Hunter SA, Cochran JR. Zülal-Zülal Qarşılıqlı Təsirlərinin Yaxınlığını Müəyyən Etmək üçün Hüceyrə Bağlanması Testləri: Texnologiyalar və Mülahizələr.)

Yaxınlığın müəyyən edilməsi üsulları

ELISA bağlanma yaxınlıq analizi

Antikor yaxınlığını öyrənmək üçün geniş istifadə olunan texnika, rahatlığı, sürəti, sadəliyi, yüksək həssaslığı və güclü spesifikliyi ilə xarakterizə olunan ELISA metoduna əsaslanır. O, az miqdarda reagentlərdən (yəni antikorlar və antigenlər) istifadə edə və təmizləyici reagentlərə ehtiyac olmadan antikor yaxınlığını ölçə bilər. Antigeni bərk səthdə immobilizasiya edərək və birincil antikor istifadə edərək aşkarlayaraq, etiketlənmiş ikincil antikor, fermentlə əlaqəli immunosorbent analiz (ELISA) oxuyucusundakı məlumatları oxumaq və təhlil etmək üçün birincil antikorla reaksiyaya girir.

Şəkil 2: Dizayn edilmiş peptidlərin hədəflərinə bağlanmasını qiymətləndirmək üçün ELISA-ya bənzər analizlər. (İstinad mənbəyi: Hacıkarimlu, Məryəm və b., 2022. SARS-CoV-2 səth zülalı S-ni aşkar edən peptidlərin sürətli dizaynına hesablama yanaşması.)

Səth Plazmon Rezonansı (SPR) bağlanma yaxınlıq analizi

SPR texnologiyası əsasən refraktiv indeksdəki dəyişiklikləri aşkarlayır. Ənənəvi optik hadisələrin və işığın rezonans fenomeninin köməyi ilə biosensor çiplərindəki ligandlar və analitlər arasındakı qarşılıqlı təsiri aşkar etmək üçün biomolekullar arasındakı qarşılıqlı təsir üçün biosensor analiz texnologiyası qurula bilər. Bioloji reaksiyalar zamanı SPR bucaqlarındakı dinamik dəyişiklikləri izləməklə biomolekullar arasındakı bağlanma və qarşılıqlı təsirin spesifik siqnalları əldə edilə bilər.

Şəkil 3: H10/AGR2 bağlanmasının səth plazmon rezonansı (SPR) təhlili. (İstinad mənbəyi: Garri, Carolina və b., 2018. Yeni bir peptidin ön qradiyent homologu 2-yə (AGR2) qarşı identifikasiyası, xarakteristikası və tətbiqi.)

Bio Layer Interference (BLI) bağlanma affinlik analizi

Biofilm müdaxilə texnologiyası, əsasən molekullararası qarşılıqlı təsirlərin hərtərəfli kəmiyyət təhlili və zülal konsentrasiyasının təyini üçün istifadə olunan etiketsiz, real vaxt monitorinq optik aşkarlama texnikasıdır. Bu texnologiya nümunədəki biofilmin qalınlığındakı dəyişiklikləri birbaşa aşkar etmək üçün zond əsaslı biosensordan istifadə edir. Müdaxilə spektrinin yerdəyişmə dəyişikliklərini aşkar etməklə, sensor səthində qarşılıqlı təsir göstərən biomolekullar arasındakı bağlanma və dissosiasiya aşkar edilir və müdaxilə spektrinin real vaxt yerdəyişməsi (nm) göstərilir.

Şəkil 4: aLDRG və xitinoliqosaxaridlər arasında biolayer interferometriyası (BLI) analizi. (İstinad mənbəyi: Li, Bing, 2023. LysM Domenlərinə Vurğu Verərək Göbələk Simbiozunda İştirak Edən Armillaria sp. 541-in Rhizomorfları və Hyphaeləri Arasında Müqayisəli Transkriptomların Xüsusiyyətləri.)

BLI və SPR Texnologiyasının müqayisəsi

Texnologiyanın adı	BLI (Bio-Layer Interferometriyası)	SPR (Səth Plazmon Rezonansı)
Prinsip	Sensor səthində əks olunan işığın interferensiya modelindəki dəyişiklikləri ölçür, biotəbəqədə optik qalınlıqdakı dəyişikliklər vasitəsilə molekulyar qarşılıqlı təsirləri aşkarlayır. Real vaxt rejimində bağlanma əyrisi (birbaşa ölçmə) təmin edir.	Sensor çipinin səthinə yaxın refraktiv indeksdəki siqnal dəyişikliklərini aşkar etməklə molekulyar qarşılıqlı təsirləri ölçür (bu, işıq qızıl və şüşə interfeysi ilə qarşılıqlı təsir göstərdikdə və refraktiv indeksdə dəyişikliklərə səbəb olduqda baş verir). Məlumatlar rezonans bucağında dəyişikliklər kimi əks olunur (dolayı ölçmə).
İstehsalçı	Sartorius	GE
Alət	ForteBio Biosensorları	Açıq SPR Aləti
Sistem	ForteBio Oktet Sistemi (molekulyar qarşılıqlı təsir təhlili üçün)	TraceDrawer (Ridgeview Instruments, İsveç tərəfindən hazırlanmışdır)
Üstünlüklər	1. Geniş nümunə uyğunluğu, əla stabillik, xüsusən də kiçik molekulları aşkar etmək üçün (nümunə təmizliyi və bufer şərtləri üçün xüsusi tələblər daha az sərtdir). SSA çipləri bağlanma tədqiqatları üçün səmərəlidir. 2. SPR ilə müqayisədə daha sürətli məhsuldarlıq və daha qısa təcrübə müddəti.	1. BLI ilə müqayisədə daha uzun inkişaf tarixi, daha yüksək həssaslıq təklif edir. 2. Daha yüksək yaxınlıq və spesifiklik məlumatlarına malik nadir və ya dəyərli zülalların aşkarlanması kimi spesifik tətbiqlər üçün daha yüksək dəqiqlik və möhkəmlik.
Dezavantajları	1. Məlumatların dəqiqliyi SPR ilə müqayisədə bir qədər aşağıdır. 2. Cihazın diqqətlə saxlanılmasını tələb edir. 3. SSA çipinin qiyməti nisbətən yüksəkdir.	1. Çox kiçik molekulları aşkar etmək üçün bufer şəraiti çətin ola bilər və bu da aşkarlama uğursuzluğu riskini artırır. 2. Çiplər ümumiyyətlə BLI-də istifadə edilənlərdən daha bahadır. 3. Uzunmüddətli təcrübələr zamanı nümunənin buxarlanması problem yarada bilər.
Çip növü	SSA Çipi	NTA Çipi

Yaxınlıq Ölçməsinin Əhatə Dairəsi

Affinliyin təyini antigen-antikor (güclü antigen-antikor, zəif antigen-antikor), zülal-zülal, zülal-peptid, zülal-kiçik molekul və zülal DNT/RNT (aptamer) metodlarını əhatə edə bilər. KD-ni ölçərkən molar konsentrasiyalardan birini bilmək lazımdır. Kiçik molekullar birləşdikdə, bir molekulyar çəki 150 daltondan az ola bilməz.

Növü	Əhatə dairəsi	Ehtiyat tədbirləri
1. Antigen-Antikor	10^-6 ilə 10^-12 arasında	Əksər antikorların Kd dəyərləri 10^-6-10^-7 ilə 10^-9 arasındadır. Ümumiyyətlə, yüksək affinlikli antikorların 10^-9 daxilində, yüksək affinlikli antikorların isə 10^-12 daxilində olduğuna inanılır. Antikorlar isə 10^-12 daxilindədir.
2. Zülal - Kiçik Molekullar	10^-4 ilə 10^-5 arasında	Kiçik molekulların və zülalların KD-si 10^-4 ilə 10^-5 arasındadır, 10^-3 və 10^-7 isə normaldır və 10^-10-a çata bilməz. Kovalent kiçik molekullar 10^-10-a çata bilər.
3. Avidin-Biotin	10^-14	Affinlik asanlıqla qeyri-spesifik bağlanmaya məruz qala bilər və streptavidin və ya deglikozilləşdirilmiş affinlik istifadə edilə bilər.
4. DNT-Zülal	10^-8 ilə 10^-10 arasında	Yüksək keyfiyyətli və tam DNT; elektroforezin təsirinin qarşısını almaq üçün diqqətli olun.

Yaxınlığın müəyyən edilməsi üçün nümunə tələbləri

Nümunə	Tələblər
1. Böyük Molekul Nümunəsi	Zülal > 50 µq, antikor > 100 µq, biotinləşdirilmiş protein > 200 µq; biotinsiz protein > 2 mq, təmizlik tələbi > 90%, bufer məhlulu: PBS, HEPBS. İmidazol qrupları ehtiva edə bilməz; keyfiyyətə nəzarət tələb olunur.
2. Kiçik Molekul Nümunəsi	Miqdarı >1 mq, toz və ya maye halında, maye suda və ya DMSO-da həll olmalıdır. Qliserin, imidazol, trehaloza və ya digər duzlar ehtiva etməməyə çalışın; buferdə Tris kimi amin qrupları olan reagentlərdən, ümumiyyətlə PBS, HEPPS və s. üzvi reagentlər olmadan istifadə etməkdən çəkinin.

Affinity Ölçmə Platformasının Üstünlükləri

Çoxsaylı nümunə təhlili

Alpha Lifetech, antikorlar, hüceyrələr, zülallar və digər biomolekullar da daxil olmaqla müxtəlif nümunələr üçün affinlik testləri təmin edə bilər.

Yetkin texnologiya platforması

Bizdə spr bağlama analizi, bli bağlama analizi və elisa bağlama analizi kimi qabaqcıl texnologiyalar mövcuddur.

Çevik layihə seçimi

Müştərilər sürətli yaxınlıq təyini və dəqiq yaxınlıq təyini arasında seçim edə bilərlər.

Yüksək dəqiqlikli nəticələr

Peşəkar texniki komandamız səmərəli, dəqiq və etibarlı yaxınlıq təyini nəticələrini təmin edə bilər.

Case StudyHƏLL

BLI sürətli yaxınlıq analizi antikoru və aptamer yaxınlıq analizi

SA zond spesifikliyinə malik biotinləşdirilmiş aptamerləri tutun və həll edin. Nümunəni sabit bir konsentrasiyaya qədər həll edin və durulaşdırın, zondla əlaqəli tutulan 1-5 Hədəf aptamerlərini bərkidin və siqnal doyduqdan sonra nümunəyə yapışdırın. Sonra onları 96 quyulu lövhəyə əlavə edin.

Şəkil 5: 96 quyulu lövhə nümunələri üçün aşkarlama mövqelərinin paylanması. B sensorların balanslaşdırılması və dissosiasiyası üçün istifadə olunan buferə aiddir. L: Biotin Hədəf 1-5 aptamer, 221: Nümunə.

Məlumatların sabitliyini və dəqiqliyini təmin etmək üçün qazma işlərinə diqqət yetirin və nəticələri əldə etmək üçün müvafiq proqramı təyin edin:

Şəkil 6: Hədəf 1, 2 və 3 aptamerləri ilə nümunələr arasında qarşılıqlı təsir uyğunlaşdırma diaqramı. (CH 1 \ 3 \ 5, bərkimiş Hədəf 1 \ 2 \ 3 aptamer zondu ilə nümunə arasındakı qarşılıqlı təsirin siqnalını və məlumatlarını təmsil edir.)

Şəkil 7: Hədəf 4 və 5 aptamerləri ilə nümunələr arasında qarşılıqlı təsir uyğunlaşdırma diaqramı. (CH 1 \ 3, bərkimiş Hədəf 4 \ 5 aptamer zondu ilə nümunə arasındakı qarşılıqlı təsirin siqnalını və məlumatlarını təmsil edir.)

nəticələr göstərir

Aşağıdakı nəticələr əldə edildi: Target 1 adapterinin quraşdırıldıqdan sonra nümunəyə yaxınlığı 9.41 ^ -8 idi; Target 2 adapterinin quraşdırıldıqdan sonra nümunəyə yaxınlığı 8.32 ^ -8 idi; Target 3 adapterinin quraşdırıldıqdan sonra nümunəyə yaxınlığı 8.64 ^ -8 idi; Target 4 adapterinin quraşdırıldıqdan sonra nümunəyə yaxınlığı 3.70 ^ -8 idi; Target 5 adapterinin quraşdırıldıqdan sonra nümunəyə yaxınlığı 3.01 ^ -8 idi.

Hər hansı bir sualınız varsa, istənilən vaxt bizimlə əlaqə saxlamaqdan çəkinməyin.

Leave Your Message

Seçilmiş Xidmət

0102