Heyvanların İmmunizasiya Platforması

Alpha Lifetech-in heyvan mənbələri aydındır, yoxlama və karantin icazələri, aydın genetik fon, aydın immunizasiya tezliyi və immunizasiya intervallarının ətraflı qeydləri ilə antikor istehsalı üçün rahat xidmətlər təqdim edir. Əsasən Dəvəquşu heyvanlarını (Alpaka Liama və Dəvələr) immunizasiya edir və nanobüst istehsalının təməlini qoyur. Bundan əlavə, müştərilərin tələb olunan immunizasiya tezliyi və immunogenlik tələblərinə uyğun olaraq adi heyvanları (məsələn, Yeni Zelandiya ağ dovşanları, siçanları və digər heyvanları) immunizasiya edə, onları çıxarıb PBMC-lərə təcrid edə və sonrakı təcrübələr üçün (məsələn, monoklonal antikor, poliklonal antikor inkişafı və s.) istifadə edə bilər. Müştərilər öz immunogenlərini təmin edə bilərlər və biz onlar üzərində ciddi keyfiyyət nəzarəti aparacağıq. Müştərilər viral immunogenlər təmin edərsə, onlar inaktivləşdirilməlidir və biz təhlükəsizliyi təmin etmək üçün inaktivasiya testi aparacağıq. Eyni zamanda, biz də müştəri ehtiyaclarına uyğun olaraq müvafiq immunogenləri fərdiləşdirə bilərik.

Heyvanların İmmunlaşdırılmasına Giriş

Monoklonal antikorlar, poliklonal antikorlar və nanocisimlər kimi heyvan mənşəli antikorlar istehsal edərkən ilk addım heyvanları immunlaşdırmaq və sonrakı antikor istehsalına hazırlaşmaq, əsas elmi tədqiqatları təşviq etmək, klinik diaqnostik vasitələr hazırlamaq və yeni dərmanların kəşfini və inkişafını asanlaşdırmaq üçün müvafiq B hüceyrələri, antikorlar və ya PBMC-lər əldə etməkdir. Camelidae dəvələri, alpakaları, liamaları və digər dəvələri immun qanının toplanması və PBMC-lərin çıxarılması yolu ilə nanocisim (tək domenli antikor) kitabxanaları istehsal edə bilər. Dovşanlar və digər heyvanlar immunizasiya edilə və onların bədənindən antikorlar çıxarıla bilər. Təmizləndikdən sonra onlar poliklonal antikorlar istehsal etmək üçün istifadə edilə bilər. Siçanlar, siçovullar və s. immunizasiya ilə çıxarılan B hüceyrələrini mieloma hüceyrələri ilə birləşdirərək monoklonal antikorlar istehsal etmək üçün istifadə edilə bilər. İmmunizasiyadan əvvəl istifadə olunan heyvanların sayını lazımi minimuma qədər əhəmiyyətli dərəcədə azalda, eksperimental prosedurları təkmilləşdirə və heyvanların əziyyətini minimuma endirə bilən 3R prinsiplərinə (əvəzetmə, azaltma, təkmilləşdirmə) diqqət yetirilməlidir. Düzgün eksperimental dizayn, müvafiq antikorların seçilməsi və ciddi validasiya prosedurlarına da əməl edilməlidir.

İmmunogenlərin təsnifatı - nanocisim istehsalı

İmmunogenlərin növləri	Nümunə	İmmunogen Hazırlığı	Qeydlər
Zülal İmmunogenləri	Fermentlər, zülallar, bakterial toksinlər və digər maddələr	Müxtəlif zülal ifadə sistemlərini seçin: E. coli, maya, həşərat hüceyrələri, məməli hüceyrələri və hüceyrəsiz sistem	Zülal ifadəsinə təsir edən temperatur, vaxt, pH və daxilolma cisimləri kimi amillərə diqqət yetirin
Nuklein turşusu immunogenləri	DNT, RNT	DNT İmmunogeni: Plazmid DNT-si qurun, hədəf genlər üçün uyğun ifadə vektorlarını klonlaşdırın, plazmid DNT-sini gücləndirmək üçün becərmə hüceyrələri yaradın və yüksək təmizlikli plazmid DNT-sini çıxarın RNT İmmunogen: Deqradasiyanın qarşısını almaq üçün şapka strukturu və PolyA quyruğu əlavə etmək lazımdır	DNT immunogenləri hazırlanarkən, müvafiq sahib hüceyrələrə diqqət yetirilməli və RNT immunogenləri hazırlanarkən RNT-nin parçalanmasının qarşısının alınmasına diqqət yetirilməlidir.
Viral İmmunogenlər	Bütöv virus inaktivləşdirilmiş peyvənd, alt vahid peyvənd, virus vektor peyvəndi (adenovirus, lentivirus və s.), mRAN peyvəndi.	Bütün virus inaktivləşdirilmiş peyvəndi hazırlayarkən, təhlükəsizliyi artırmaq üçün əvvəlcə virus inaktivləşdirilir. İnaktivasiyanın tamamlanıb-tamamlanmadığını müəyyən etmək üçün toksiklik testi istifadə olunur. Alt vahid peyvəndlər yalnız virus səthi zülallarını antigen kimi tələb edir və immun effektivliyini nəzərə almalıdır.	İmmun təsir göstərmək üçün adyuvantlar əlavə edilməli, təsirsiz hala gətirilməsi lazım olan virusa diqqət yetirilməli, immun təsirlərini təmin etmək üçün müvafiq virus titrləri tələb olunmalı və hazırlıq prosesinin təhlükəsizliyi ciddi şəkildə nəzarətdə saxlanılmalıdır.

Heyvanların immunizasiya prosesi və ya zaman xətti

Heyvan Seçimi və Antigen Hazırlanması

Heyvan seçimi: Sağlam qruplar arasından uyğun yaşda və sağlam bədən quruluşuna malik alpakaları seçin və yoluxucu xəstəliklərin və ya digər sağlamlıq problemlərinin olmadığından əmin olmaq üçün qan müayinəsi və xəstəlik müayinəsi aparın.

İmmunogen hazırlığı: İmmunogenlər immun reaksiyalarını stimullaşdırmaq üçün əsasdır və hədəf antikorun tələblərinə əsasən müvafiq zülalların, peptidlərin və ya digər uyğun maddələrin seçilməsini tələb edir.

Bir alpaka eyni vaxtda 1-3 antigenlə immunizasiya edilə bilər, ümumi antigen miqdarı hər immunizasiya üçün 1-2 mq, həcmi isə 2 ml-dən azdır. İmmunizasiyadan əvvəl antigen və adyuvant 4 ℃-də saxlanılan vahid qarışıq yaratmaq üçün 1:1 nisbətində emulsiya olunur.

İmmunoloji alpaka

Boş alpaka qulağının nömrəsini qeyd edin və immunizasiya təcrübəsinə başlayın. Hər iki tərəfdən alpaka boynunun yaxınlığındakı limfa düyünlərinə hər tərəfə 2 nöqtə və hər nöqtəyə təxminən 0,4 ml emulsiya edilmiş antigen yeridilmiş şəkildə inyeksiya edin. İmmunizasiyadan sonra alpaka qulağında heç bir narahatlıq əlaməti olmadığını təsdiqləmək üçün yarım saat müşahidə edin. İmmunizasiya hər 2 həftədən bir, ən azı 4 immunizasiya ilə aparılmalıdır.

Qan toplama

5-7 gün ərzində 4 dəfə immunizasiyadan sonra alpaka boyun venasından 50 ml qan toplayın.

Serumun ayrılması

Hər antigen immunizasiyasından əvvəl immun qiymətləndirməsi üçün qan nümunələri toplanır və hər dəfə 5 ml qan götürülür; Elə həmin gün qan əvvəlcədən soyudulmuş 25 ℃ sentrifuqadan istifadə edərək 400 xq-da 30 dəqiqə ərzində santrifüj edildi. Serumun üst təbəqəsi ayrıldı və sonrakı antikor titri testi üçün saxlanıldı.

Ayrı limfositlər

Əvvəlcə 15 ml hüceyrə ayırma məhlulu əlavə edin, sonra yavaş-yavaş 50 ml-lik santrifüj borusuna 15 ml qan əlavə edin. Qan və ayırma məhlulunun qarışmasının qarşısını almaq üçün qan əlavə edərkən diqqətli və yavaş olun. Əvvəlcədən 25 ℃-də soyudulmuş santrifüj, 400 x g-də 30 dəqiqə santrifüj edin və yuxarı serumu -80 ℃-də yeni bir santrifüj borusunda saxlayın; Orta pambıq formalı yuxarı təbəqə immun hüceyrələrini yeni 50 ml-lik santrifüj borusuna sorma üçün bir pipet istifadə edin. Hər boruya otaq temperaturunda 10 ml PBS buferi əlavə edin, 25 ℃ və 400 x g-də 20 dəqiqə santrifüj edin. Supernatantı çıxarın, hər boruya otaq temperaturunda 5 ml PBS buferi əlavə edin, yaxşıca qarışdırın, hemositometr istifadə edərək hüceyrələrin sayını hesablayın və sonra 25 ℃ və 400 x g-də 20 dəqiqə santrifüj edin. -80°C-də saxlanılan 10 ^ 7/ml hüceyrə lizatı əldə etmək üçün hüceyrə sayına əsasən RNAiso Plus ilə əldə edilən supernatantı çıxarın və limfositləri həll edin.

Şəkil 1: Müxtəlif Antikor Kəşf Strategiyalarının və İştirak Edilən Təcrübə Mərhələlərinin Sxematik Təsviri. (Şəkil mənbəyi: Laustsen, Andreas H. və başqaları.)

Müştərilər immunogenlərə ciddi keyfiyyət nəzarəti təmin edirlər

İmmunogenlərin növləri	Tələb	Keyfiyyətə Nəzarət Metodu
Peptid / Kiçik Molekul Nümunələri	Həll olma şərtləri (əsasən faqları təsirsiz hala gətirib-gətirməyəcəyindən asılı olaraq), molekulyar quruluş/peptid ardıcıllığı, sintez hesabatı (HPLC/MS/HNMR)	HPLC/MS aşkarlanması
Zülal Nümunələri	SDS-PAGE/WB, həll şərtləri, bufer, etiket məlumatı, ümumi miqdar (20-50 mkq), konsentrasiyası, saflığı və s.	SDS-PAGE/WB
Hüceyrə Nümunələri	Hüceyrə növü (ilkin hüceyrələr/gen redaktə edilmiş hüceyrələr), hüceyrə forması (təzə/dondurulmuş əridilmiş), böyümə növü (yapışqan/asılı), becərmə mühitinin tələbləri, təmin edilən hüceyrələrin sayı, təmin edilən hüceyrələrin sayı, skrininq hədəflərinin sabit ifadəsini təmin etmək üçün gen redaktə edilmiş hüceyrələr (müştəriyə uyğun ilkin antikor), bərpa sürətini təyin etmək üçün dondurulmuş əridilmiş hüceyrələr	Əsasən gen redaktə edilmiş hüceyrələri hədəfə almaq, hədəf ifadəsinin ELISA identifikasiyası üçün müştəri tərəfindən təmin edilən ilkin antikorlardan istifadə etmək (şirkətimiz HRP ikinci dərəcəli antikorları təmin edir), axın sitometriyası aşkarlanması (şirkətimiz flüoresan ikinci dərəcəli antikorlar təmin edə bilər).

Heyvan immunitetinin tətbiqləri hansılardır?

+

Poliklonal antikorlar heyvanların immunizasiyası ilə, monoklonal antikorlar B hüceyrələri ilə miyeloma hüceyrələrinin birləşdirilməsi ilə istehsal edilə bilər və PBMC-lər dəvə mənbələrindən (alpaka, dəvə, alpaka və s.) nanocisimlər, Fab fraqmentləri, scFv antikor fraqmentləri və s. kimi müxtəlif antikor fraqment formaları istehsal etmək üçün çıxarıla bilər.
Heyvanların immunitet sistemini qorumaq üçün hansı tədbirlər görülməlidir?

+

Dəvədən alınan heyvanlar üçün nanoantikorlar istehsal etmək üçün 5-6 immunizasiya tələb olunur. İmmunizasiyadan əvvəl qan nümunələri nəzarət nümunəsi kimi toplanmalı və hər immunizasiya arasında 2 həftəlik fasilə olmalıdır. Dördüncü immunizasiyadan sonra titri təyin etmək üçün ELISA üçün müsbət qan və immunizasiya olunmamış mənfi qan toplanmalıdır. Əgər titr 10 ^ 6-dan aşağıdırsa, titr müvafiq səviyyəyə çatana qədər immunizasiya sayı artırılmalıdır. Dovşan immunizasiyası (dovşan immunizasiyası üçün optimal və ya ümumi zülal antigen səviyyəsi 50-1000 mkq), siçan immunizasiyası (siçan immunizasiyası üçün optimal və ya ümumi zülal antigen səviyyəsi 5-50 mkq-dır, əgər hüceyrədirsə, 10 ^ 6 hüceyrə və nuklein turşusu və ya karbohidratlar üçün 10-50 mkq tələb olunur), keçi immunizasiyası (keçi immunizasiyası üçün optimal və ya ümumi zülal antigen səviyyəsi 250-5000 mkq-dır) və s. kimi digər heyvan immunizasiyaları üçün immunogenlərin dozasına, təhlükəsizliyinə və effektivliyinə diqqət yetirilməlidir.
İmmunitet heyvanlarını necə seçmək olar?

+

Müştərinin tələb etdiyi antikor növündən asılı olaraq, nanocisimlər və ya digər antikor fraqmentləri istehsal etmək lazımdırsa, immunizasiya üçün dəvə mənşəli heyvanları (dəvələr, alpakalar, alpakalar) seçə bilərsiniz. Monoklonal və ya poliklonal antikorlar istehsal etmək lazımdırsa, serum, antigen və antigen mənbəyinin miqdarına əsasən müvafiq növləri seçməlisiniz. Dovşanlar üçün maksimum serum miqdarı 500 ml-dir ki, bu da az miqdarda antigen tələb edir və poliklonal antikorlar istehsal etmək üçün əsas seçimdir. Siçanlar üçün maksimum serum miqdarı 2 ml, siçovullar üçün isə maksimum serum miqdarı 20 ml-dir ki, bu da adətən monoklonal antikorlar üçün optimal seçimdir. Keçi tərəfindən istehsal olunan antikorlar yüksək yaxınlığa malikdir və Alpha Lifetech tələblərinizə uyğun olaraq sizin üçün eksklüziv immunizasiya planı hazırlaya bilər.
Antigenlərin adyuvantlarla birlikdə istifadəsinə ehtiyac varmı? Necə seçilməlidir?

+

İki növ köməkçi maddə var: yağ əsaslı və su əsaslı. Həll olan antigenlərə qarşı güclü antikor reaksiyalarının yaranması üçün köməkçi maddələrin ağlabatan istifadəsi çox vacibdir. Köməkçi maddələrin davamlı sərbəst buraxılması o deməkdir ki, daha az dozada antigen istifadə edilə bilər və antikor reaksiyaları daha uzunmüddətli olur. İlk inyeksiya köməkçi maddə ilə birlikdə istifadə edilməlidir. Ümumiyyətlə, immunogen miqdarı az olduqda Freund köməkçi maddəsindən istifadə etmək tövsiyə olunur.
Alpakanın immunizasiyası üçün tədbirlər?

+

(1) Alpaka və immunitet antigeninin seçilməsi uğurlu immunizasiyanın açarıdır. Yaxşı nisbətdə dəvə seçmək məsləhət görülmür. Alpaka ilə immunizasiyadan sonra sonrakı tətbiqlər üçün uyğun antikorların skrininqi üçün immun antigenlərinin təmizliyi və düzgün konformasiyası çox vacibdir. Zülal antigenlərinin təmizliyi ümumiyyətlə 90%-dən az deyil.

(2) Limfositlərin ayrılması: Vaxtında hüceyrə ayrılması ən yaxşı ayrılma effektinə nail olmaq üçün qan toplandıqdan sonra hemolizin qarşısını effektiv şəkildə ala bilər.

(3) İmmun dövrü immun reaksiyasına təsir göstərə bilər: 1-2 həftəlik immun intervalı alpakaların əksər antigenlərə qarşı yaxşı immun reaksiyasına imkan verir.

müstəqil şəkildə hazırlanmış köməkçi maddə

Unikal formulalı köməkçi preparatımız alpakanın immun sistemi üçün optimallaşdırılıb və ənənəvi köməkçi preparatlarla müqayisədə daha yüksək potensial və spesifiklik təmin edir.

İmmunizasiya çatdırılması
standart

Biz immunizasiyanı göstərilən müddət ərzində başa çatdıracağımıza, yüksək titrli serum təmin edəcəyimizə və hər addımı ətraflı hesabatlar vasitəsilə qeyd edəcəyimizə söz veririk.

layihənin keyfiyyətinə nəzarət

Hər bir layihə müştərilərə yüksək standartlara cavab verən antikorların çatdırılmasını təmin etmək üçün ciddi keyfiyyətə nəzarət proseslərindən keçir.

açıq şəkildəAlpakaArxa plan

Müxtəlif immunizasiya proqramlarına dəstək verən sağlam bir alpaka populyasiyamız var.

Hər hansı bir sualınız varsa, istənilən vaxt bizimlə əlaqə saxlamaqdan çəkinməyin.

Leave Your Message

Seçilmiş Xidmət

0102