Antikor Yaxınlığı Yetkinləşmə Xidməti

Alpha Lifetech Inc.mutasiya və seleksiya texnologiyalarından istifadə etməklə antikor affinlik yetişmə xidməti təklif edə bilərik. Biz adətən affinlik yetişmə xidməti proseslərində antikor formatı və antigen bağlama müayinəsi zamanı avidlik təsirlərini azaltmaq üçün istifadə edilən monovalent ekran fagemid sistemi kimi scFv-dən istifadə edirik. Peşəkar komandamız tək domenli antikorlar üçün də affinlik yetişmə xidmətləri göstərə bilər.

Alpha Lifetech Inc.qlobal müştərilərin müxtəlif ehtiyaclarını ödəmək üçün hərtərəfli xidmətlər təklif etməkdən qürur duyur. Məqsədimiz müxtəlif müştərilərin tələblərini anlamaq və qarşılamaq, eləcə də tədqiqat işlərində qarşıdan gələn və ortaya çıxan hər hansı bir problemə kömək etməkdir.

Yaxınlıq Yetkinləşməsi nədir?

Affinlik yetkinləşməsi antikorların spesifik antigenlərə qarşı affinliyini artırmaq üçün təkrarlanan mutasiyalara və seçimə məruz qaldığı prosesdir. Əsasən ikincili limfoid orqanların germinal mərkəzində baş verən B hüceyrələri, T hüceyrələrinin və follikulyar dendritik hüceyrələrin təsiri altında somatik hipermutasiya və seçimə məruz qalır.
Affinlik yetkinləşmə prosesi zamanı aşağı affinlikli səth immunoglobulin reseptorlarına malik B hüceyrələri antigenlə qarşılaşma yolu ilə aktivləşir və proliferasiya və differensiasiyaya məruz qalır. Somatik hipermutasiya affinlik yetkinləşməsi yolu ilə immunoglobulin genlərinin dəyişkən bölgəsində təsadüfi nukleotid əvəzlənmələri baş verir və bu da müxtəlif antikor variantlarının istehsalına gətirib çıxarır. Somatik hipermutasiyadan sonra mutasiyaya uğramış immunoglobulin reseptorlarına malik B hüceyrələrində antigen tərəfindən idarə olunan seçim aparılır. Antigen affinliyi artmış antikorlar istehsal edən B hüceyrələri üstünlük təşkil edir və çoxalmasına icazə verilir, azalmış və ya dəyişməmiş affinlikli B hüceyrələri isə apoptoza məruz qalır. Mutasiya və seçimin bu təkrarlanan prosesi B hüceyrə klonlarının istehsalına gətirib çıxarır və antigenə tədricən daha yüksək affinlikli antikorlar istehsal edir.

Antikor Yaxınlığı Yetkinləşmə Xidməti

PCR əsaslı metodların əsas üstünlükləri mutasiyaların gücləndirilmiş fraqmentə dəqiq şəkildə yönəldilməsidir; səhv nisbətini idarə etmək asandır, metodun qurulması tez və asandır və təhlükəli kimyəvi maddələrdən istifadə etmir. Məlumdur ki, Taq DNT polimerazası DNT-ni aşağı dəqiqliklə təkrarlayır, bunun əsas səbəbi 3-5 fut korrektura aktivliyinin olmamasıdır.Alpha Lifetech-inAntikor mühəndisliyi platforması, alt kitabxananın qurulması zamanı əsasən CDR bölgələrini mutasiya etmək üçün xətaya meylli PCR yanaşması tətbiq edir. Və tez-tez alt kitabxananın genetik müxtəlifliyini artırmaq üçün bütün VH və VL fraqmentləri boyunca tamamilə təsadüfi mövqelərdə mutasiyalar yaradırıq. Xətaya meylli PCR ilə mutasiyaya uğramış antikor gen kitabxanası qurulduqdan sonra, yüksək affinlikli variantların seçimi (scFv antikorlarının affinliyi 10^8 - 10^10 M-ə çata bilər) ya məhlulda pan ilə, ya da qeyri-standart seçim üçün optimallaşdırılmış yuma şərtləri ilə immobilizasiya edilmiş antigen üzərində həyata keçirilir.
  
AlimlərAlpha Lifetech Inc.Təsadüfi mutasiyalar daxil etmək və bununla da rekombinant antikor fraqmentlərinin affinliyini və ifadəsini dəyişdirmək üçün bir neçə mutasiya strategiyasından biri kimi Escherichia coli mutator ştammlarından mutAD5TM istifadə edin. İstehsal səviyyələri artan antikor fraqmentləri üçün seçim şərtləri dəyişdirilə bilər. Escherichia coli mutator hüceyrələrində böyümə şərtləri, DNT-nin kilobazasına görə tək bir təsadüfi nöqtə mutasiyası daxil etmək üçün tənzimlənə bilər ki, bu da scFv fraqmenti başına demək olar ki, bir kodon dəyişikliyinə bərabərdir. Bir neçə mutasiya, nümayiş və seçim dövründən sonra affinlik sabitini 10^5 - 10^6 M-dən 10^8 - 10^10 M-ə qədər artıra bilərik.

Yaxınlıq Yetkinləşmə Strategiyalarını Təkmilləşdirin

Antikorların müəyyən mövqeləri müəyyən bir müxtəliflikdə təsadüfi olaraq seçilə bilər (məsələn, bütün 20 amin turşusu ilə tam təsadüfi və ya seçilmiş amin turşuları ilə sabit faizlərdə qərəzli təsadüfi olaraq). Antikorların yaxınlığını artırmaq üçün iki strategiyamız var: birincisi, mutasiyalar sahəyə yönəlmiş mutagenez yolu ilə komplementarlığı təyin edən bölgələrdə (CDR) məhdud mövqelərdə daxil edilir; ikincisi, mutasiyalar təsadüfi mutagenez yolu ilə bütün V-kodlaşdırma bölgələrinə daxil edilir. Bu iki metoddan istifadə etməklə, qorunan amin turşusu ardıcıllığı və ya antikorun bütün çərçivə bölgəsi digər amin turşuları ilə əvəz olunacaq ki, bu da peptid kitabxanası skan texnologiyalarımızla birlikdə maraq doğuran antikorların yaxınlığını çox yüksək səviyyəyə qədər artıra bilər.

Faj Displeyi-Antikor Yaxınlığı

scFv mutant kitabxanası qurulduqdan sonra iki skrininq strategiyası mövcuddur: biopanninq və bərk antigen çeşidlənməsi. Birincisində, yüksək affinlikli antikoru təcrid etmək üçün substratın substrat konsentrasiyası istifadə olunur, çünki aşağı affinlikli mutantlar yuyulub çıxarılacaq və yüksək avidlikli faq hissəcikləri qalacaq. İkinci strategiya məhlulda etiketlənmiş antigendən, tarazlıq sabitinə (Kd) əsaslanan seçimdən və bağlanma kinetikasına əsaslanan seçimdən istifadə edir, bu seçim yanaşması təkmilləşdirilmiş Kd ilə antikor variantlarını ayırır.

Hər hansı bir sualınız varsa, istənilən vaxt bizimlə əlaqə saxlamaqdan çəkinməyin.