Faj ekran texnologiyası, xarici hədəf genini faj kapsid zülalının spesifik mövqeyinə daxil etmək və xarici geni fajın normal funksiyasına təsir etmədən fajın səthində ifadə etməkdir. Bir neçə mərhələli müayinədən sonra nəhayət güclü spesifikliyə və yüksək bioloji aktivliyə malik hədəf zülal əldə edildi.

Bu texnologiyadan istifadə edərək yüksək tutumlu antikor kitabxanaları yaradıla bilər. Skrininq dövrü qısa, əməliyyat prosesi sadə və tətbiq dairəsi genişdir ki, bu da hədəf peptidlər və ya zülallar üçün optimal ardıcıllıqların müəyyən edilməsinə imkan verir. Virusla əlaqəli tətbiqlərdə tədqiqatçılar böyük antikor kitabxanalarını skrininq etməklə kritik virus epitoplarına bağlanan antikorları aşkar edə bilərlər. Bu proses virusların girişini, replikasiyasını və ya immun yayınma mexanizmlərini maneə törədə bilər və bununla da xəstəliklərin müalicəsi üçün təməl yarada bilər.

Faq displey texnologiyası, spesifik immunogenlərə qarşı az miqdarda antikor istehsal etməklə məhdudlaşan hibridoma texnologiyasından daha geniş istifadə olunur. Bunun əksinə olaraq, faq displey texnologiyası müxtəlif immun növlərindən əldə edilən bütün bir antikor kitabxanasını təqdim edə bilər.

Faj displey texnologiyası patogen mikroorqanizmlərin reseptorlarının müayinəsi, zülal qarşılıqlı təsirlərinin öyrənilməsi, hüceyrələr arasında siqnal ötürülməsinin izlənməsi, heyvan xəstəliklərinin diaqnozu və vaksinlərin hazırlanması kimi geniş tətbiq sahələrinə malikdir.

Faq displey texnologiyası çoxsaylı üstünlüklər təklif edir və müxtəlif sahələrdə tətbiq oluna bilər. Lakin, faq displey metodundan istifadə edərək rekombinant antikorların hazırlanmasında əsas çətinlik prosesin mürəkkəbliyi və dəyəridir. Bu yanaşma, istənilən antikorları müəyyən etmək və xarakterizə etmək üçün mutasiya, klonlama və ifadə daxil olmaqla molekulyar biologiya üsullarının, eləcə də immunoloji, biokimyəvi və biofiziki analizlərin inteqrasiyasını zəruri edir.

Antigen təqdimatı çox vacib bir əlaqədir. Antigen təqdimatı üsullarına əsasən birbaşa örtüklü antigen təqdimatı, dolayı örtüklü antigen təqdimatı, bütün hüceyrə skrininqi vasitəsilə antigen təqdimatı, liposomlar, nano-fosfolipid disklər və VLP-lər vasitəsilə antigen təqdimatı daxildir.

Birbaşa örtükləmə üsulu nisbətən sadədir, lakin antigen konformasiyasını dəyişdirmək asandır və dolayı örtükləmə əməliyyatı mürəkkəbdir, lakin antigen konformasiyasını qoruyub saxlaya və təqdimat səmərəliliyini artıra bilər. Hüceyrə skrininqi real mənzərəni in vivo simulyasiya edə bilər, lakin qeyri-spesifik bağlanma problemi mövcuddur. Nano-fosfolipid disk kiçik ölçüyə, yüksək çatdırılma səmərəliliyinə və yaxşı stabilliyə malikdir; VLP-lər antigenlə əridilir və ya antigenlə bükülür ki, bu da yüksək immunogenliyə və yaxşı təhlükəsizliyə malikdir və güclü immun reaksiyasına səbəb ola bilər.

Əgər konsentrasiya çox aşağı olarsa, faqla bağlanma ehtimalı azalacaq və nəticədə skrininq səmərəliliyi azalacaq. Əksinə, həddindən artıq yüksək konsentrasiya qeyri-spesifik bağlanma ehtimalını artıra, fon siqnalını yüksəldə və müsbət klonların müəyyənləşdirilməsinə mane ola bilər.

Yüksək temperatur, güclü turşu və qələvi təsirlərindən qaçınmaq üçün mülayim fiksasiya metodu tətbiq oluna bilər. Antigen strukturuna dəyən ziyanı azaltmaq üçün dolayı örtük metodu və biotin-streptavidin sistemi istifadə edilmişdir. Antigen membran zülalıdırsa, o, bütöv hüceyrələrin səthində göstərilə bilər və ya təbii membran zülal konformasiyasını qorumaq üçün nano-disk kimi membran mühitini simulyasiya etmək üçün istifadə edilə bilər.

ELISA, Western Blotting (WB) və Immunofluoresensiya (IF) kimi adi təcrübələrə əlavə olaraq, antikorların və antigenlərin bağlanma və dissosiasiya proseslərini real vaxt rejimində izləmək üçün Səth Plazmon Rezonansı (SPR) və Bio-Layer Interferometriyası (BLI) aşkarlama üsullarından istifadə etmək olar ki, bu da affinlik və kinetik parametrlərin müəyyən edilməsinə imkan verir.

Faj displeyi, insanlar, siçanlar, siçovullar, dovşanlar, toyuqlar, dəvələr, alpakalar, inəklər, itlər, qoyunlar, meymunlar və köpəkbalıqları da daxil olmaqla, lakin bunlarla məhdudlaşmayaraq, geniş çeşiddə antikor istehsal edən növlər üçün yüksək affinlikli monoklonal antikorlar yaratmaq üçün istifadə edilə bilər.

Siçan antikor kitabxanalarının qurulması texnologiyası yaxşı qurulmuş, səmərəlidir və qısa eksperimental müddətə malikdir, bu da onu ilkin antikor müayinəsi və əsas tədqiqatlar üçün uyğun edir. Dovşan antikorları güclü yaxınlıq və spesifiklik nümayiş etdirir, siçan antikorları ilə müqayisədə daha geniş epitop tanıma diapazonuna malikdir. İnsan antikorları birbaşa insan antikor kitabxanalarından əldə edilə bilər və bununla da heteroloji antikorlar insan bədəninə tətbiq edildikdə baş verə biləcək potensial immun reaksiyalarının qarşısını alır. Bu yanaşma dərman tədqiqatı və inkişafında, xüsusən də terapevtik antikorların yaradılmasında əhəmiyyətli əhəmiyyətə malikdir.

Heyvan immunogenləri ümumiyyətlə zülal antigeni, polipeptid antigeni, nuklein turşusu antigeni və patogenlə əlaqəli antigenə bölünür, bunlara patogenlə əlaqəli antigen virus antigeni (tam virus hissəciyi, virus zülalı, virus qeyri-struktur zülalı və s.), bakteriya antigeni (tam bakteriya ekstraktı, hüceyrə divarı komponenti, ifraz olunan zülal, toksin və s.) və parazit antigeni daxildir.

İmmun antigenlərini rekombinant zülallarla və yanğınsöndürən virus hissəciklərini virusların struktur zülalları ilə əvəz etməklə immunogenləri tənzimləyin. Təcrübə dizaynını tənzimləyin və immun dozasını dəyişdirin.

İmmunogenlik antigenləri mal-qara serum albumin kimi daşıyıcı zülallarla birləşdirməklə artırıla bilər. Bundan əlavə, Freund adyuvantı və alüminium adyuvantı da daxil olmaqla immun adyuvantları in vivo qalma müddətini uzatmaq və immun hüceyrələrinin aktivləşməsini və proliferasiyasını stimullaşdırmaq, bununla da immunogenliyi yaxşılaşdırmaq üçün istifadə edilə bilər.

Faq antikor kitabxanası, antikorlardan faq vektorlarına çevrilən dəyişkən bölgə genlərinin tam dəstini toplamaq və onları faqların səthlərində ifadə etməklə yaradılan müxtəlif faq antikorları toplusudur. Bu proses faq antikor kitabxanasının formalaşması ilə nəticələnir.

Faq displaziyasının ümumi prosesi bir neçə əsas mərhələni əhatə edir: immunizasiya olunmuş heyvanlardan periferik qan mononuklear hüceyrələrinin (PBMC) çıxarılması, ümumi RNT-nin təcrid edilməsi və tamamlayıcı DNT-yə (cDNA) transkripsiyası, polimeraza zəncirvari reaksiya (PCR) texnologiyasından istifadə edərək hədəf genin gücləndirilməsi, hədəf genin faq vektoruna klonlaşdırılması və vektorun ifadə üçün ev sahibi hüceyrəyə çevrilməsi. Bu proses yüksək affinlikli antikorları tez bir zamanda müəyyən edə bilən faq displaziyası kitabxanasının qurulması ilə nəticələnir. Daha sonra bu kitabxana vaksinlərin, terapevtik dərmanların və diaqnostik reagentlərin hazırlanması üçün dəyərli bir mənbə kimi xidmət edə bilər.

Antikor kitabxanasının mənbəyinə görə, faq antikor kitabxanaları immun faq antikor kitabxanaları və yerli faq antikor kitabxanaları olmaqla təsnif edilə bilər. Bu iki növ arasındakı əsas fərq heyvanların peyvənd olunub-olunmamasındadır. Bundan əlavə, yerli antikor kitabxanaları yarı sintez və ya sintez yolu ilə yaradıla bilər.

Antikor kitabxanasının keyfiyyətini qiymətləndirmək üçün iki əsas göstərici mövcuddur: saxlama tutumu və müxtəliflik. Yüksək saxlama tutumu yüksək müxtəlifliklə birlikdə həm yüksək affinlik, həm də spesifikliyə malik antikorların effektiv şəkildə skrininqini təmin edir.

Bioloji elutriasiya prosesində ekran kitabxanası sabit hədəflərlə inkubasiya edilir və sonra reaktiv olmayan faqları çıxarmaq üçün geniş şəkildə yuyulur. Konjugatlar adətən turşulu və ya yüksək duzlu məhlul istifadə edərək elutasiya edilir və daha sonra zənginləşdirmək üçün uyğun ev sahibi hüceyrələrdə gücləndirilir. 3-5 raundluq müayinədən sonra yüksək affinliyə malik antikorlar əldə edilir.

Faq skrininq metodlarına əsasən bərk fazalı panning, maye fazalı skrininq və hüceyrə əsaslı skrininq daxildir. Uyğun skrininq metodunun seçilməsi hədəf molekulların xüsusiyyətlərini, skrininq prosesinin məqsədlərini və laboratoriya mühitini nəzərə almalıdır.

Pozitiv skrininq hədəf zülallara bağlanan faq antikorlarının skrininqi üçün ən fundamental metoddur. Mənfi skrininq qeyri-spesifik antikorların aradan qaldırılmasına xidmət edir. Faq antikor skrininqi prosesi zamanı hədəf antigen etiketinin, materiallarının və ya hədəf antigenlə struktur oxşarlığı olan digər antigenlərin müdaxiləsi səbəbindən qeyri-spesifik antikorlar müəyyən edilə bilər. Belə hallarda, mənfi skrininq skrininq prosesinin səmərəliliyini artıra bilər.

Antikorların yoxlanılması üsullarına adətən ELISA, Western Blotting (WB), axın sitometriyası, immunopresipitasiya (IP), immunofluoresensiya (IF), immunohistokimya və digər müxtəlif eksperimental üsullar daxildir. Alpha Lifetech antikorların aşkarlanmasında geniş təcrübəyə malikdir və sonrakı təcrübələrdə antikorların effektivliyini təmin edən peşəkar eksperimental komandaya malikdir.