Antikor Mühəndisliyi nədir?

Antikor mühəndisliyinin köməyi ilə antikorların molekulyar ölçüsünü, farmakokinetikasını, immunogenliyini, bağlanma yaxınlığını, spesifikliyini və effektor funksiyasını dəyişdirmək mümkün olmuşdur. Antikorları sintez etdikdən sonra antikorların spesifik bağlanması onları klinik diaqnostika və müalicədə yüksək qiymətli edir. Antikor mühəndisliyi vasitəsilə onlar dərman və diaqnostik erkən inkişaf ehtiyaclarını ödəyə bilərlər.

Antikor mühəndisliyinin məqsədi təbii antikorların əldə edə bilmədiyi yüksək spesifik, sabit funksiyaları layihələndirmək və istehsal etmək, terapevtik antikorların istehsalının əsasını qoymaqdır.

Antikor mühəndisliyi sahəsində geniş layihə təcrübəsi ilə Alpha Lifetech, bir çox növlər üçün fərdiləşdirilmiş monoklonal və poliklonal antikor xidmətləri, həmçinin faj ekran antikor kitabxanasının qurulması və skrininq xidmətləri göstərə bilər. Alpha Lifetech müştərilərə səmərəli, yüksək spesifik və stabil antikorlar istehsal etmək üçün keyfiyyətli biosimilar antikorlar və rekombinant protein məhsulları, həmçinin müvafiq xidmətlər təqdim edə bilər. Kompleks antikor, zülal platformaları və faq nümayişi sistemlərindən istifadə etməklə biz antikor istehsalının yuxarı və aşağı axınını əhatə edən xidmətlər, o cümlədən anticisimlərin humanistləşdirilməsi, antikorların təmizlənməsi, anticisimlərin ardıcıllaşdırılması və antikorların yoxlanılması kimi texniki xidmətlər təqdim edirik.

Antikor mühəndisliyinin qabaqcıl mərhələsi iki texnologiya ilə bağlıdır:

--Rekombinant DNT texnologiyası

--Hibridoma texnologiyası

Antikor mühəndisliyinin sürətli inkişafı üç mühüm texnologiya ilə bağlıdır:

--Gen klonlama texnologiyası və polimeraza zəncirvari reaksiya

--Protein ifadəsi: Rekombinant zülallar maya, çubuqşəkilli viruslar və bitkilər kimi ifadə sistemləri tərəfindən istehsal olunur.

--Kompüter dəstəkli struktur dizaynı

Birinci nəsil antikorlar, siçan monoklonal antikorlarının dəyişən bölgəsinin insan IgG molekullarının sabit bölgəsi ilə əlaqəli olduğu kimerik antikorların istehsalı üçün humanistləşdirilmişdir. İkinci nəsil siçan monoklonal antikorunun antigen bağlayan bölgəsi (CDR) insan IgG-yə köçürüldü. CDR bölgəsi istisna olmaqla, bütün digər antikorlar demək olar ki, insan anticisimləridir və insan müalicəsi üçün siçan klon antikorlarından istifadə edərkən insana qarşı anticisim (HAMA) reaksiyalarının qarşısını almaq üçün səylər göstərilmişdir.

 

Fag nümayişi kitabxanasını qurmaq üçün ilk addım immunlaşdırılmış heyvanların B hüceyrələrindən təcrid oluna bilən (immun kitabxana quruluşu), birbaşa immunlaşdırılmamış heyvanlardan (təbii kitabxana quruluşu) ekstraksiya edilə bilən və ya hətta antikor gen fraqmentləri ilə in vitroda yığıla bilən (sintetik kitabxana quruluşu) antikorları kodlayan genləri əldə etməkdir. Daha sonra genlər PCR ilə gücləndirilir, plazmidlərə daxil edilir və uyğun host sistemlərində (maya ifadəsi (adətən Pichia pastoris), prokaryotik ifadə (adətən E. coli), məməli hüceyrə ifadəsi, bitki hüceyrəsi ifadəsi və çubuqvari viruslarla yoluxmuş həşərat hüceyrəsi ifadəsi) ifadə edilir. Ən çox yayılmışı E. coli ifadə sistemidir, hansı ki, xüsusi kodlaşdırıcı antikor ardıcıllığını faja inteqrasiya edir və faj qabığı zülallarından birini (pIII və ya pVIII) kodlayır. Gen füzyonu, Və bakteriofaqların səthində göstərilir. Bu texnologiyanın əsas məqsədi təbii kitabxanalardan üstün olan faj ekran kitabxanasının qurulmasıdır ki, o, xüsusi bağlamaya malikdir. Sonradan antigen spesifikliyi olan antikorlar bioloji seçim prosesi vasitəsilə yoxlanılır, hədəf antigenlər fiksasiya olunur, bağlanmamış faqlar dəfələrlə yuyulur və daha zənginləşmə üçün bağlı faqlar yuyulur. Üç və ya daha çox təkrarlama turundan sonra yüksək spesifiklik və yüksək yaxınlıq antikorları təcrid olunur.

Şəkil 3: Antikor Kitabxanasının qurulması və skrininqi

Rekombinant DNT texnologiyası antikor fraqmentləri yaratmaq üçün istifadə edilə bilər. Fab antikorları əvvəlcə yalnız mədə proteazı ilə hidrolizə olunaraq (Fab ') 2 fraqment istehsal edə bilər, daha sonra fərdi Fab fraqmentləri yaratmaq üçün papain tərəfindən həzm olunur. Fv fraqmenti disulfid bağlarının olmaması səbəbindən zəif sabitliyə malik olan VH və VL-dən ibarətdir. Buna görə də, VH və VL, təxminən 25KDa molekulyar çəkisi olan tək zəncirli dəyişən fraqment (scFv) antikor yaratmaq üçün 15-20 amin turşusundan ibarət qısa peptid vasitəsilə bir-birinə bağlanır.

Camelidae (Camel, LIama və Alpaca) da antikor quruluşunun öyrənilməsi antikorların yalnız ağır zəncirlərə malik olduğunu və yüngül zəncirlərin olmadığını aydınlaşdırdı, buna görə də onlara ağır zəncirli antikorlar (hcAb) deyilir. Ağır zəncirli antikorların dəyişən sahəsi 12-15 kDa ölçüsündə tək domen antikorları və ya nanobodies və ya VHH adlanır. Monomerlər olaraq, onların disulfid bağları yoxdur və antigenlərə çox yüksək yaxınlıq ilə çox sabitdirlər.

Şəkil 5: Ağır Zəncirli Antikor və VHH/ Nanobody

Hüceyrə sərbəst ifadəsi adətən E. coli ifadə sistemindən istifadə edərək, in vitro protein sintezinə nail olmaq üçün təbii və ya sintetik DNT ifadəsindən istifadə edir. Zülalları sürətlə istehsal edir və in vivo böyük miqdarda rekombinant zülallar istehsal edərkən hüceyrələrə metabolik və sitotoksik yükdən qaçır. O, həmçinin sintezi çətin olan, məsələn, tərcümədən sonra dəyişdirilməsi və ya membran zülallarının sintezi çətin olan zülallar istehsal edə bilər.