Antikor Mühəndisliyi nədir?

Antikor mühəndisliyinin köməyi ilə antikorların molekulyar ölçüsünü, farmakokinetikasını, immunogenliyini, bağlanma affinliyini, spesifikliyini və effektor funksiyasını dəyişdirmək mümkün olmuşdur. Antikorları sintez etdikdən sonra antikorların spesifik bağlanması onları klinik diaqnoz və müalicədə çox dəyərli edir. Antikor mühəndisliyi vasitəsilə onlar dərman və diaqnostik erkən inkişaf ehtiyaclarını ödəyə bilərlər.

Antikor mühəndisliyinin məqsədi təbii antikorların əldə edə bilmədiyi yüksək spesifik, sabit funksiyaları dizayn etmək və istehsal etmək, terapevtik antikorların istehsalının təməlini qoymaqdır.

Antikor mühəndisliyi sahəsində geniş layihə təcrübəsi olan Alpha Lifetech, birdən çox növ üçün fərdiləşdirilmiş monoklonal və poliklonal antikor xidmətləri, eləcə də faj displey antikor kitabxanasının qurulması və skrininq xidmətləri təqdim edə bilər. Alpha Lifetech, səmərəli, yüksək spesifik və sabit antikorlar istehsal etmək üçün müştərilərə keyfiyyətli biooxiyar antikorlar və rekombinant protein məhsulları, eləcə də müvafiq xidmətlər təqdim edə bilər. Hərtərəfli antikor, protein platformaları və faj displey sistemlərindən istifadə etməklə, antikor istehsalının yuxarı və aşağı axınlarını əhatə edən xidmətlər, o cümlədən antikorların humanizasiyası, antikorların təmizlənməsi, antikorların ardıcıllığı və antikorların validasiyası kimi texniki xidmətlər təqdim edirik.

Antikor mühəndisliyinin qabaqcıl mərhələsi iki texnologiya ilə bağlıdır:

--Rekombinant DNT texnologiyası

--Hibridoma texnologiyası

Antikor mühəndisliyinin sürətli inkişafı üç vacib texnologiya ilə əlaqədardır:

--Gen klonlama texnologiyası və polimeraza zəncirvari reaksiyası

--Zülal ifadəsi: Rekombinant zülallar maya, çubuqşəkilli viruslar və bitkilər kimi ifadə sistemləri tərəfindən istehsal olunur.

--Kompüter dəstəkli struktur dizaynı

Birinci nəsil antikorlar, siçan monoklonal antikorlarının dəyişkən bölgəsinin insan IgG molekullarının sabit bölgəsi ilə əlaqələndirildiyi kimerik antikorların istehsalı üçün insanlaşdırıldı. İkinci nəsil siçan monoklonal antikorunun antigen bağlama bölgəsi (CDR) insan IgG-sinə köçürüldü. CDR bölgəsi istisna olmaqla, bütün digər antikorlar demək olar ki, insan antikorlarıdır və insan müalicəsi üçün siçan klon antikorlarından istifadə edərkən insan siçan antikoru (HAMA) reaksiyalarının qarşısını almaq üçün səylər göstərildi.

 

Faq ekran kitabxanası qurmaq üçün ilk addım antikorları kodlayan genləri əldə etməkdir. Bu genlər immunizasiya olunmuş heyvanların B hüceyrələrindən təcrid oluna bilər (immun kitabxana quruluşu), immunizasiya olunmamış heyvanlardan birbaşa çıxarıla bilər (təbii kitabxana quruluşu) və ya hətta antikor gen fraqmentləri ilə in vitro yığıla bilər (sintetik kitabxana quruluşu). Daha sonra genlər PCR ilə gücləndirilir, plazmidlərə daxil edilir və uyğun ev sahibi sistemlərində (maya ifadəsi (adətən Pichia pastoris), prokaryotik ifadə (adətən E. coli), məməli hüceyrə ifadəsi, bitki hüceyrə ifadəsi və çubuqşəkilli viruslarla yoluxmuş həşərat hüceyrə ifadəsi) ifadə edilir. Ən çox yayılmışı, müəyyən bir kodlayan antikor ardıcıllığını faqa inteqrasiya edən və faq qabığı zülallarından birini (pIII və ya pVIII) kodlayan E. coli ifadə sistemidir. Bakteriofaqların səthində , And genlərinin birləşməsi. Bu texnologiyanın əsasını təbii kitabxanalara nisbətən spesifik bağlanmaya malik ola biləcəyi üstünlüyə malik bir faq ekran kitabxanası qurmaq təşkil edir. Daha sonra, antigen spesifikliyinə malik antikorlar bioloji seleksiya prosesi vasitəsilə yoxlanılır, hədəf antigenlər fiksasiya olunur, bağlı olmayan faqlar dəfələrlə yuyulur və bağlı faqlar daha da zənginləşdirmək üçün yuyulur. Üç və ya daha çox təkrarlama turundan sonra yüksək spesifikliyə və yüksək affinliyə malik antikorlar təcrid olunur.

Şəkil 3: Antikor Kitabxanasının Quruluşu və Skrininqi

Rekombinant DNT texnologiyasından antikor fraqmentləri yaratmaq üçün istifadə etmək olar. Fab antikorları əvvəlcə yalnız mədə proteazı tərəfindən hidrolizə olunaraq (Fab') 2 fraqmentləri istehsal edilə bilər, sonra isə onlar fərdi Fab fraqmentləri yaratmaq üçün papain tərəfindən həzm olunur. Fv fraqmenti disulfid rabitələrinin olmaması səbəbindən zəif stabilliyə malik olan VH və VL-dən ibarətdir. Buna görə də, VH və VL təxminən 25KDa molekulyar çəkiyə malik tək zəncirli dəyişkən fraqment (scFv) antikoru yaratmaq üçün 15-20 amin turşusundan ibarət qısa peptid vasitəsilə bir-birinə bağlanır.

Dəvələrdə (Dəvə, Liama ​​və Alpaca) antikor quruluşunun öyrənilməsi antikorların yalnız ağır zəncirlərə malik olduğunu və yüngül zəncirlərə malik olmadığını aydınlaşdırdı, buna görə də onlar ağır zəncirli antikorlar (hcAb) adlanır. Ağır zəncirli antikorların dəyişkən domeni 12-15 kDa ölçüsündə tək domenli antikorlar və ya nanocisimlər və ya VHH adlanır. Monomerlər olaraq, onlar disulfid rabitəsinə malik deyillər və antigenlərə qarşı çox yüksək yaxınlığa malik olmaqla çox sabitdirlər.

Şəkil 5: Ağır Zəncir Antikoru və VHH/Nanobody

Hüceyrə sərbəst ifadəsi, adətən E. coli ifadə sistemindən istifadə edərək, in vitro zülal sintezinə nail olmaq üçün təbii və ya sintetik DNT ifadəsindən istifadə edir. Zülalları tez bir zamanda istehsal edir və in vivo şəraitdə çox miqdarda rekombinant zülal istehsal edərkən hüceyrələrə metabolik və sitotoksik yükün qarşısını alır. Həmçinin, translyasiyadan və ya membran zülallarını sintez etdikdən sonra dəyişdirilməsi çətin olan zülallar kimi sintezi çətin olan zülallar da istehsal edə bilər.