Antikor İnsanlaşdırma İnkişaf Platforması

İnsanlaşdırılmış antikorlar insan immun sistemindən minimal və ya heç bir reaksiya vermir. Koqnitiv Bazar Tədqiqatlarına görə, qlobal Antikor İnsanlaşdırma bazarının həcmi 2024-cü ildə 92,5 milyon ABŞ dollarıdır və 2024-cü ildən 2031-ci ilə qədər 13,00% mürəkkəb illik artım tempi (CAGR) ilə genişlənəcək. Alpha Lifetech, insanlaşdırılmış antikorlar üçün 98%-dən çox uğur nisbəti ilə yetkin antikor insanlaşdırma platformasına malikdir. Bizim CDR peyvəndləmə, SDR peyvəndləmə, zəncir qarışdırma, faq nümayişi və s. daxil olmaqla bir çox insanlaşdırma strategiyamız var ki, bunlar sizin təcrübi ehtiyaclarınıza uyğun olaraq seçilə bilər. Biz yalnız siçan, dovşan, alpaka, dəvə və s. kimi bir çox növdən antikorların insanlaşdırılmasını deyil, həm də scFv, Fab və nanocisimlər kimi müxtəlif formalarda antikorların insanlaşdırılmasını təmin edə bilərik. Siçan monoklonal antikor istehsalı, ximerik antikor istehsalı, insanlaşdırılmış antikor ifadəsi və təmizlənməsi, eləcə də insanlaşdırılmış antikor xarakteristikası və təhlili daxil olmaqla, antikor istehsalı, təmizlənməsi və validasiya xidmətləri göstərmək üçün peşəkar texniki heyətimiz var. Yüksək uğur nisbəti, yüksək təmizlik və aşağı immunogenlik ilə insanlaşdırılmış antikor istehsalına zəmanət veririk.

Antikorların İnsanlaşdırılmasına Giriş

Monoklonal antikor terapiyası otoimmün xəstəliklərin, xərçəngin və digər xəstəliklərin müalicəsində istifadə edilə bilər. Monoklonal antikorlar siçanları və ya digər heyvanları immunlaşdırmaqla istehsal olunur. Monoklonal antikor istehsalının sonrakı mərhələsindəki xəstəlikləri müalicə etmək üçün istifadə edildikdə, qeyri-insan antikorlarının immunogenliyini nəzərdən qaçırmaq olmaz. Humanizasiyanın əsas prinsipi, hiperdəyişkən komplementarlığı təyin edən bölgələr (CDR) kimi qeyri-insan çərçivə qalıqlarını insan çərçivəsinə inteqrasiya etmək və immunogenliyin qarşısını alarkən orijinal antikor xüsusiyyətlərini saxlayan ardıcıllıqlar yaratmaqdır. Siçan immunizasiyası və sonrakı siçan ardıcıllığının humanizasiyası, əsasən bir neçə mərhələdən keçən terapevtik antikorları kəşf etməyin iki əsas yolu olaraq qalır: siçan antikor istehsalı, monoklonal antikor ximerləşməsi, ximerik siçan insan monoklonal antikoru və tam humanizasiya olunmuş monoklonal antikorun inkişaf prosesi. Hazırda tədqiqatlar əsasən transgen siçanlar (insan B hüceyrə genlərinin siçanlara köçürülməsi), maya və ya faq displey texnologiyasından istifadə edərək yüksək məhsuldarlıqlı skrininq, CDR peyvənd edilməsi (valideyn CDR-lərinin insan ardıcıllığına daxil edilməsi), transplantasiyaya xas təyinetmə qalıqları (SDR), çərçivə qarışdırılması və digər metodları əhatə edir.

Antikorların humanizasiyası-Alpha Lifetech

Şəkil 1: Siçan antikorlarından (yaşıl domenlər) tam insan antikorlarına qədər antikorların humanizasiyasının sxematik icmalı.

Antikorların humanizasiyası strategiyası

CDR Grafting

CDR peyvəndləmə rekombinant DNT texnologiyasına əsaslanan məməli ifadə sistemi vasitəsilə həyata keçirilir və onun əsas addımları bunlardır:

(1) Siçanlarda (və ya insan olmayan mənbələrdə) müvafiq antikorlar inkişaf etdirin, antikorları kodlayan DNT-ni təcrid edin və ardıcıllıq üçün vektorlara klonlaşdırın (və ya birbaşa tək hüceyrəli ardıcıllıqla yerinə yetirin).

(2) Antikor CDR-ə uyğun DNT ardıcıllığını və hədəf bağlanma spesifikliyini təyin etmək;

(3) Qeyri-insan CDR-lərini köçürmək və yeni bir antikor genini qurmaq üçün insan çərçivə bölgəsini (FR) seçin.

(4) Döngəni sabitləşdirmək və son insanlaşdırılmış antikorun yaxınlığının və ya struktur bütövlüyünün itirilməsinin qarşısını almaq üçün bərpa mutasiyaları yaratmaq məqsədilə qeyri-insan CDR-ləri və insan FR-ləri arasındakı münaqişələrin üçölçülü təhlilini aparın.

Şəkil 2: Komplementarlığı müəyyən edən bölgənin (CDR) peyvəndinin sxematik icmalı.

Çərçivə qarışdırılması

Çərçivə qarışdırılması, yüksək affinlikli antikorlar əldə etmək üçün faq displey texnologiyasına və faq kitabxanası skrininq texnologiyasına əsaslanır. İnsan antikorunun ağır zəncir çərçivələrini kodlayan oliqonukleotidlər şablon kimi istifadə olunur, CDR bölgələri praymer kimi kodlanır və tək zəncirli DNT əldə etmək üçün PCR məhsulunu denaturasiya etmək üçün PCR amplifikasiyası aparılır. Streptavidin ilə təmizlənmiş VL və VH genlərinin tək zəncirli DNT-si T4 DNT liqazası və restriksiya fermentləri istifadə edərək vektorlara yenidən qurulur, bakteriofaqlarla inkubasiya edilir və bakteriofaqlar tərəfindən amplifikasiya edilir və faq displey kitabxanası qurulur. Müvafiq antigenlərlə üç skrininq mərhələsi aparılır və müsbət klonlar nəhayət ELISA və digər metodlardan istifadə edərək təsdiqlənir.

Şəkil 3: Komplementarlığı müəyyən edən bölgə (CDR) peyvəndinin və çərçivə (FR) qarışdırma humanizasiya strategiyalarının sxematik təsviri. (A) CDR peyvəndinin əsas proseduru. (B) FR qarışdırmasının əsas prosesi. (İstinad mənbəyi: Wang Yongmei və digərləri, PD-1 siçan antikorunun humanizasiyasında "çərçivə qarışdırma" və "CDR peyvəndinin" müqayisəsi.)

Faj Ekranı

İnsanlaşdırılmış antikorların istehsalı, əsasən insan antikor faq kitabxanaları vasitəsilə qurulan bakteriofaqların səthində spesifik antikorların göstərilməsi metoduna əsaslanır. Kitabxananın mənbəyi, müvafiq ardıcıllıqların yoxlanıldığı faq kitabxanaları qurmaq üçün insan periferik qanından təcrid olunmuş PBMC-lərdir. Bu ardıcıllıq tam insan ardıcıllığına malikdir, lakin istehsal olunan antikorlar scFv, Fab və nanobədən kimi antikor fraqmentləridir.

Antikor İnsanlaşdırma Xidməti İş Axını

Xidmət addımları	KK Standartı	Xronologiya
Antikor İzolyasiyası	Saflıq >95%	1-2 həftə
Ardıcıllıq Təhlili	İnsan olmayan ardıcıllıqların dəqiq müəyyənləşdirilməsi	1 həftə
CDR Gəftələmə və Çərçivə Gəftələmə	Uğurlu inteqrasiya və ifadə	2-3 həftə
İfadə və Təmizləmə	Yüksək məhsuldarlıq və təmizlik	2-3 həftə
Funksional Doğrulama	Yaxınlıq və spesifikliyin qiymətləndirilməsi	1 həftə