Aptamer Xarakterizasiya Təhlili Xidməti

Alpha Lifetech uzun illərdir ki, aptamerlə əlaqəli xidmətlər göstərir və hazırda aptamer sintezi, SELEX skrininqi, yüksək məhsuldarlıqlı ardıcıllıqla yoxlama və aptamer optimallaşdırması və xarakteristikası kimi hərtərəfli aptamer inkişaf sxemləri təqdim edə bilir. Aptamerlərin skrininqi üçün SELEX metodunun üstünlüklərinə əsaslanaraq, Alpha Lifetech aptamerlərin skrininqi üçün daha çox metodu genişləndirib.

Aptamer Xarakterizasiya Analizinə Giriş

Yaxınlıq təsdiqlənməsi

Optimallaşdırılmış aptamer yaxınlığı aptamer bağlanma analizinin müvafiq üsulları ilə təsdiqləndi. Nümunələrə İzotermik Titrləmə Kalorimetriyası (ITC), Axın Sitometriyası (FCM) və Səth Plazmon Rezonansı (SPR), Mikrofluidika və s. daxildir. Aptamer yaxınlığı adətən dissosiasiya sabiti (KD) ilə ifadə olunur, bu fiziki kəmiyyət geri dönən reaksiyada molekulyar dissosiasiya dərəcəsini ölçmək üçün istifadə olunur. KD dəyəri nə qədər kiçikdirsə, kompleks bir o qədər sabitdir, yəni yaxınlıq bir o qədər güclüdür; Əksinə, KD dəyəri nə qədər böyükdürsə, kompleks bir o qədər qeyri-sabit və yaxınlıq bir o qədər zəifdir. Bu addım aptamerin performansını müəyyən etmək, aptamer yaxınlığının yetkinləşməsini təmin etmək üçün açardır və praktik tətbiqlərdə yüksək yaxınlıq və selektivliklə hədəf molekuluna bağlana bilər.

Şəkil 1. Aptamer affinitetinin yetişmə prosesi. İstinad mənbəyi:Kinghorn AB, Fraser LA, 2017.

Funksiya yoxlaması

Affinlik yoxlamasından əlavə, aptamerin funksiyası da yoxlanılmalıdır. Buraya aptamerin sabitliyinin, spesifikliyinin və müəyyən bir mühitdə digər molekullarla qarşılıqlı təsirinin yoxlanılması daxildir. Funksional yoxlamanın nəticələri aptamerlərin elmi tədqiqatlarda və sənaye tətbiqlərində dəyərinə birbaşa təsir göstərəcəkdir.

Xüsusi Təsdiq

Rəqabətli təcrübə: Aptamerin müəyyən bir hədəfə bağlanma qabiliyyəti digər oxşar hədəflərin iştirakı ilə qiymətləndirilir. Əgər aptamer digər molekulların müdaxiləsi olmadan hədəf molekuluna xüsusi olaraq bağlana bilirsə, bu, onun yüksək spesifikliyə malik olduğunu göstərir.

Çarpaz reaksiya təcrübəsi: Aptamer, spesifikliyini yoxlamaq üçün yalnız müəyyən bir hədəfə bağlanıb-bağlanmadığını görmək üçün bir sıra əlaqəli və ya əlaqəsiz hədəflərə bağlanır.

Sabitlik yoxlanışı

Nukleaza deqradasiyası təcrübəsi: Aptamerlər müxtəlif konsentrasiyalı nukleazalara məruz qalmış və onların deqradasiyası müşahidə edilmişdir. Müxtəlif zaman nöqtələrində deqradasiya dərəcəsini müqayisə etməklə aptamerin antinukleaza deqradasiya qabiliyyəti qiymətləndirilə bilər.

Temperatur və zaman stabilliyi təcrübəsi: Aptamer struktur və funksional stabilliyini müşahidə etmək üçün müxtəlif temperatur və zaman şərtləri altında yerləşdirilib. Bu, aptamerlər üçün optimal saxlama və istifadə şərtlərini müəyyən etməyə kömək edir.

Bioloji aktivliyin müəyyən edilməsi

Müvafiq metod adətən nuklein turşusu aptamerinin spesifik tətbiq məqsədinə uyğun olaraq seçilir.

(1) Molekulyar səviyyəli sınaq: Aptamer hədəf molekulu ilə birləşdikdən sonra əmələ gələn kompleksləri aşkar etmək və ya aptamerin səbəb olduğu hədəf molekulunun ifadə səviyyəsindəki dəyişiklikləri aşkar etmək üçün gel elektroforez, Western blot və s. kimi molekulyar biologiya üsullarından istifadə.

(2) Hüceyrə səviyyəsində sınaq: Hüceyrə kulturası texnologiyasından istifadə etməklə, aptamerlər hədəf hüceyrələrlə inkubasiya olunur və hüceyrə morfologiyası, proliferasiyası və apoptozu kimi bioloji dəyişikliklər müşahidə edilir və aptamerlərin bioloji aktivliyi qiymətləndirilir.

(3) Heyvan modellərinin sınaqdan keçirilməsi: Müvafiq heyvan modellərində nuklein turşusu aptamerləri inyeksiya və ya dərman qəbulu yolu ilə verilir və aptamerlərin bioloji aktivliyini və təhlükəsizliyini in vivo qiymətləndirmək üçün heyvanların fizioloji göstəriciləri və patoloji dəyişiklikləri müşahidə olunur.