Bispesifik Antikor İnkişaf Platforması

Alpha Lifetech müştərilərə keyfiyyətli, zəmanətli antikor kəşfi və rekombinant protein məhsulları və xidmətləri təqdim edə bilər. Biz yüksək effektivliyə, güclü spesifikliyə və yaxşı stabilliyə malik antikorlar hazırlaya bilərik. Alpha Lifetech, dovşan, qoyun, toyuq və siçan monoklonal antikorları kimi müxtəlif mənbələrdən antikor təmizləmə xidmətləri, eləcə də Zülal A/G affinlik təmizlənməsi xidmətləri və antikor ayrılması və təmizlənməsi xidmətləri təqdim edə bilən müxtəlif antikor təmizləmə alətləri və avadanlıqlarına malikdir. Antikor kəşf platforması, protein platforması və s.-nin hərtərəfli platforma sisteminin qurulmasına əsaslanaraq, biz antikor istehsalının yuxarı və aşağı axın xidmətlərini əhatə edirik və bispesifik antikor terapiyası üçün istifadə edilə bilən antikor hazırlanması, bispesifik antikor təmizlənməsi və antikor ayrılması və təmizlənməsi, antikor ardıcıllığı, antikor validasiyası və s. kimi texniki xidmətlər göstərə bilərik.

Monoklonal antikorlar antigenlər və ya epitoplar üçün yüksək spesifikliyə malik tək B hüceyrəsi tərəfindən istehsal olunan immunoglobulinlərə aiddir. Monoklonal antikorların istehsalı əvvəlcə siçan antikorları istehsal etmək üçün hibridoma texnologiyasından istifadə edilərək hazırlanmışdır. Xüsusilə, immunizasiya olunmuş siçanlardan dalaq hüceyrələrini insanlardan və ya siçanlardan olan mieloma hüceyrələri ilə birləşdirməklə spesifik antikorlar ifraz edən hibridoma hüceyrələri əmələ gəlir. Yaranan siçan monoklonal antikorları əsasən heyvan tədqiqatlarında və təmizləmə xidmətlərindən sonra xəstəliklərin diaqnozunda istifadə olunur. Lakin insan bədəni yad siçan zülallarına qarşı immun reaksiyası yaradacaq, buna görə də siçan monoklonal antikorlarının istehsalının klinik tətbiqində əhəmiyyətli məhdudiyyətlər var. Daha sonra insanlar siçanlardan monoklonal antikorlar hazırlamaq üçün "humanizasiya"dan istifadə etdilər və immunogenliyini azaltmaq üçün siçan antikorlarını sabit bir insan immunoglobulin bölgəsinə sahib etmək üçün gen mühəndisliyi texnologiyasından istifadə etdilər. Bu tip antikor həmçinin humanizasiya olunmuş monoklonal antikor kimi də tanınır. Bundan əlavə, monoklonal antikorlar istehsal etmək üçün insan hüceyrələrindən istifadə etmək bütöv insan monoklonal antikor hazırlığı adlanır. Monoklonal antikorlar biotibbi və klinik tətbiqlərdə geniş istifadə olunur. Tibbi tədqiqatlarda monoklonal antikorlar immunomodulyator kimi, terapevtik monoklonal antikorlar xərçəng kimyaterapiyası və virus infeksiyasının müalicəsi üçün istifadə edilə bilər və monoklonal antikor konjugatlarının hazırlanması əsasən xərçəngin müalicəsi üçün istifadə olunur.

Bispesifik Antikorlara Giriş

1960-cı ildə bispesifik antikorlar konsepsiyası təklif edildi. Bispesifik antikorlar, həmçinin bispesifik monoklonal antikorlar kimi tanınır, gen mühəndisliyi texnologiyasından istifadə edərək süni şəkildə sintez edilmiş antikorlardır. Mühəndisləşdirilmiş süni antikorlar olaraq, bispesifik antikorlar adətən IgG alt sinfinə aiddir və CD3 alt vahidini hədəf alan antigen bağlama fraqmentini ehtiva edir. Bispesifik antikorların eyni vaxtda iki fərqli antigeni və ya bir antigenin iki fərqli epitopunu bağlaya və tanıya bilən iki spesifik antigen bağlama sahəsi var. Monoklonal antikorlarla müqayisədə bispesifik antikorlar əlavə spesifik antigen bağlama sahəsinə malikdir və beləliklə, şiş hüceyrələrini daha dəqiq hədəfə ala və hədəfdən kənar toksikliyi azalda bilən daha güclü spesifikliyə və hədəf alma qabiliyyətinə malikdir. Bispesifik antikorlar eyni vaxtda immun hüceyrələrini cəlb etmək, siqnal yollarını bloklamaq və şiş hüceyrələrini birbaşa öldürmək kimi bir çox bioloji funksiyanı yerinə yetirə bilər. Erkən bispesifik antikorlar əsasən kimyəvi konjugasiya və ya hüceyrə birləşməsi yolu ilə hazırlanırdı, lakin bu metod təsadüfi kombinasiya və hədəf kombinasiyasını təcrid etməkdə çətinlik çəkdiyinə görə yavaş irəliləmiş ola bilər. Genetik mühəndislik texnologiyasının davamlı inkişafı ilə bir çox yeni texnologiya platformaları, məsələn, dəliklərdə düyünlər (KIH), CrossMab, DVD Ig və s. hazırlanmışdır. Bu platformalar ağır və yüngül zəncir uyğunsuzluqları kimi problemləri effektiv şəkildə həll edir və bispesifik antikorların vahidliyini və məhsuldarlığını artırır.

Şəkil 1 Onkologiya üzrə klinik sınaqlarda bispesifik antikorların (bsAbs) təklif olunan təsir mexanizmlərinin sadələşdirilmiş sxematik icmalı.(Şəkil mənbəyi: Onkologiya və klinik problemlərdə bispesifik antikorların və antikor konstruksiyalarının icmalı - ScienceDirect)

Bispesifik Antikor İstehsal Texnologiyası

Bispesifik antikor istehsalının əsas üsullarına kimyəvi birləşmə, dörd mənbəli hibridoma və gen mühəndisliyi antikor hazırlığı daxildir. Bunların arasında kimyəvi birləşmə metodu iki bütöv IgG və ya iki F (ab') 2 antikor fraqmentini ftalimid və ditioasilbenzoy turşusu kimi kimyəvi birləşmə agentlərindən istifadə edərək bispesifik antikorlara birləşdirir. Bu metod sadə və istifadəsi asandır, lakin antigen bağlanma yerinə zərər verə, antikor aktivliyini azalda bilər və birləşmə agentinin özü də müəyyən dərəcədə kanserogenliyə malikdir. Dörd mənbəli hibridoma metodu iki fərqli hibridoma hüceyrə xəttindən somatik hüceyrələrin müvafiq siçan IgG-ni ifadə etmək üçün birləşməsinə əsaslanır. Gen mühəndisliyi texnologiyası vasitəsilə antikorlar bispesifik antikorlar yaratmaq üçün genetik cəhətdən modifikasiya edilə bilər. İki fərqli monoklonal antikor quruldu və iki antikorun Fab fraqmentləri və ya ağır zəncir və yüngül zəncir dəyişkən bölgələri ayrıca bölündü. Çarpaz birləşmə reaksiyası və ya zəncir rekombinasiyası texnologiyası vasitəsilə iki fraqment bispesifik antikor yaratmaq üçün birləşdirildi. Gen mühəndisliyi texnologiyasının mürəkkəbliyi nisbətən yüksək olsa da, hazırda antikorların strukturunu və funksiyasını tənzimləmək üçün bispesifik antikor istehsalında ən çox istifadə edilən metoddur. Bispesifik antikor dizaynı aparılarkən, antikor çarpaz reaktivliyi prinsipi istifadə edilə bilər, lakin antikor çarpaz reaktivliyi qeyri-spesifik reaksiyalara səbəb ola bilər, buna görə də bispesifik antikor terapiyası kimi bispesifik antikor dizaynının praktik tətbiqində diqqətlə nəzərdən keçiriləcəkdir.

Bispesifik Antikorların Təmizlənməsi

Bispesifik antikor təmizlənməsi, yüksək təmizlikli hədəf antikorların təcrid edilməsi və təmizlənməsi prosesidir. Bəzi həll olan çirkləri təmizləmək üçün iki üsuldan - santrifüqasiya və dərin filtrasiyadan istifadə olunur. Hədəf bispesifik antikor əvvəlcə affinlik xromatoqrafiyası ilə tutulur. IgG kimi bispesifik antikorlar üçün protein A affinlik xromatoqrafiyası istifadə olunur, IgG kimi olmayan bispesifik antikorlar üçün isə işıq zəncirinə əsaslanan affinlik xromatoqrafiyası istifadə edilə bilər. Daha sonra antikor müəyyən bir müddət ərzində aşağı pH şəraitində inkubasiya edilir və bu da virus örtüyünün səthindəki zülal strukturunun pozulmasına və bununla da hüceyrələri yoluxdurma qabiliyyətinin itirilməsinə səbəb olur. Sahib hüceyrə zülalları (HCP) kimi çirkləri daha da təmizləmək üçün ara dərin filtrasiya aparılır. Antikorların təmizliyi ion mübadiləsi xromatoqrafiyası kimi üsullarla yaxşılaşdırılır və qalıq viruslar nanofiltrasiya və ya ultrafiltrasiya üsulları ilə çıxarılır. Nəhayət, nümunə konsentratlaşdırılır və uyğun formulasiya buferi ilə əvəz olunur.

Bispesifik Antikor İstehsal Xidməti İş Axını

Addımlar	Xidmət Məzmunu	Xronologiya
Gen Sintezi	Rekombinant antikor DNT plazmidlərinin de novo generasiyası, ardıcıllıqların 3-ə qədər dizayn sxeminin yaradılması	2-3 həftə
Kiçik Miqyaslı Test	Bispesifik antikor zülallarının istehsalı → Məməli hüceyrə xətlərində kiçik miqyaslı ifadə → SDS-PAGE ilə təsdiq → ELISA ilə rekombinant zülal antigenləri ilə bağlanma analizi → Klonların valideyn antikorları ilə müqayisəsi	5-6 həftə
Müəyyən edin	İlk iki tam uzunluqlu bispesifik antikorun ifadəsi → ELISA ilə bağlanma analizi → Siçan əleyhinə antikorlar tərəfindən tanınan antikorların ELISA qiymətləndirilməsi	1 həftə
Antikor istehsalı	Genişmiqyaslı antikor istehsalı	3-4 həftə

Üstünlüklərimiz

Biz antikor istehsalının yuxarı və aşağı axın xidmətlərini əhatə edirik və bispesifik antikor terapiyası üçün istifadə edilə bilən antikor hazırlanması, bispesifik antikor təmizlənməsi və antikor ayrılması və təmizlənməsi, antikor ardıcıllığı, antikor validasiyası və s. kimi texniki xidmətlər göstərə bilərik.

Yüksək İfadə

CHO hüceyrələrində yüksək protein ifadəsi.
Sabit Saxlama

37°C-də serumda >2 həftə.
Həllolma Problemi Yoxdur

>30 mq/ml
Sabit Hüceyrə Lnes

Bir çox bispesifik antikorları təsdiqləmək üçün şiş antigenləri olan bir çox sabit hüceyrə xətti hazırlanmışdır.