Monoklonal Antikor İnkişaf Xidməti

Alpha Lifetech Inc.epitop proqnozunu, peptid sintezini, zülal ifadəsini, poliklonal və ya monoklonal antikor istehsalını, eləcə də hüceyrə kulturasından, assit mayesindən və ya bütün serumdan antikor təmizlənməsini təmin edə bilər.

Alpha Lifetech Inc.müştərilərə hibridoma hüceyrələri, genom redaktə hüceyrə xətləri, nokdaun hüceyrə xətləri və həddindən artıq ifadəli hüceyrə xətləri daxil olmaqla müxtəlif sabit hüceyrə xətti xidmətləri göstərməkdə təcrübəlidir. Hər bir müştəriyə qabaqcıl xüsusi hüceyrə xətti xidmətləri təklif etməyə çalışırıq və xidmətlərimiz sübut olunmuş və etibarlıdır.

Antikor İnkişaf Strategiyası

1. Antigen dizaynı və hazırlanması
Bu antigenlər zülallar, peptidlər və ya digər molekullar ola bilər. İmmunogenlərin dizaynı antigen quruluşu, immunologiya və çatdırılma sistemləri haqqında bilikləri birləşdirən hərtərəfli bir yanaşma tələb edir. Alpha Lifetech, ehtiyacı olan müştərilər üçün immunogenlər dizayn edə bilən antigen dizayn texnologiyasına malikdir.
Alpha Lifetech, müştərilərin seçim edə bilməsi üçün rekombinant protein məhsulları təqdim edir. Tədqiqat üçün lazım olan rekombinant zülalları istehsal etmək üçün E. coli ifadə sistemi, maya ifadə sistemi, bakulovirus-həşərat ifadə sistemi, məməli ifadə sistemi və s. kimi müxtəlif protein ifadə sistemlərimiz mövcuddur.

2. Heyvanların immunizasiyası
Alpha Lifetech müştərilərə immunogenlər təqdim edə bilər və siçanlar, dovşanlar, qoyunlar, alpakalar, dəniz donuzları, hamsterlər və s. kimi immun heyvanlar seçim edə bilərsiniz.

3. Monoklonal antikor istehsal üsulları

●Hybridoma texnologiyası ilə Mabs istehsalı
Hibridoma, iki növ hüceyrənin, yəni siçan mieloma hüceyrə xətti və plazma hüceyrələrinin (limfosit B) birləşməsi ilə əmələ gələn hibrid hüceyrədir. Bu hüceyrələrdə heteroziqot hüceyrə in vitro şəraitdə maraq doğuran antigenə qarşı davamlı antikorlar istehsal edə bilər. Hibridoma hüceyrə xəttinin istehsalı üç hissədən ibarətdir: antigen dizaynı (haptenslər, kiçik molekullar və peptidlər), heyvan immunizasiyası, hüceyrə birləşməsi və müsbət klon skrininqi. Unikal immunizasiya metodologiyalarından istifadə edərək, olduqca yüksək hüceyrə birləşməsi səmərəliliyi (min B hüceyrəsinə 1-10 hibridoma) və yüksək antikor titrləri əldə edirik və biokimyəvi skrininq, in vitro hüceyrə əsaslı analizlər və heyvan tədqiqatları daxil olmaqla sonrakı analitik testlərdə uğur nisbətimizi maksimum dərəcədə artırırıq.

●Phage display texnologiyası ilə Mabs istehsalı
Faq displeyi monoklonal antikorların yaradılması üçün başqa bir üsul təklif edir. B-limfositlər heyvan qanından təcrid olunur və onların mRNT-si çıxarılır. PCR vasitəsilə bu mRNT bütün VH və VL seqmentlərini gücləndirən kDNT-yə çevrilir. Daha sonra bu seqmentlər bakteriofaqın PIII zülalı ilə yanaşı, adətən tək zəncirli dəyişən fraqmentlər (scFv) kimi bir vektora klonlaşdırılır. Daha sonra bu konstruksiya E. coli-ni yoluxdurmaq üçün istifadə olunur və nəticədə köməkçi faqla peyvənd yolu ilə təxminən 10^10 hüceyrədən ibarət kitabxana yaranır. E. coli daha sonra örtüyünün bir hissəsi kimi VH və VL seqmentlərini saxlayan bakteriofaqı ifraz edə bilir. Bundan sonra, maraq doğuran antigeni hədəf alan spesifik VH və VL seqmentləri seçilə və E. coli-ni bakteriofaqla yenidən inokulyasiya etmək üçün istifadə edilə bilər. Daha sonra plazmid ehtiva edən hüceyrələr təcrid olunur və ardıcıllıqla düzülür.

4. Füzyon skrininqi

●Hüceyrə Birləşməsi və Seçimi
Yığılan B hüceyrələri daha sonra kulturada qeyri-müəyyən müddətə çoxala bilən xərçəng hüceyrələri olan miyeloma hüceyrələri ilə birləşdirilir. Birləşmə adətən polietilen glikol (PEG) birləşməsi kimi bir texnikadan istifadə etməklə əldə edilir.
Füzyondan sonra hibridoma hüceyrələri yalnız hibridomaların sağ qalmasına imkan verən selektiv bir mühitdə becərilir. Ortam adətən birləşməmiş miyeloma hüceyrələrinin böyüməsinin qarşısını alan aminopterin ehtiva edir.

●Skrininq və klonlama
Yaranan hibridoma hüceyrələri hədəf antigenə xas olan antikorların istehsalı üçün yoxlanılır. Bu, adətən fermentlə əlaqəli immunosorbent analizi (ELISA), Vestern blotlama, immunopresipitasiya və axın sitometriyası kimi üsullardan istifadə etməklə həyata keçirilir.

Antikor istehsal edən hibridoma hüceyrələri müəyyən edildikdən sonra, eyni hüceyrələrdən ibarət populyasiya yaratmaq üçün klonlaşdırılırlar. Bu, hər bir hibridoma hüceyrəsi tərəfindən istehsal edilən antikorun eyni olmasını təmin edir.

5. Antikor Funksional Verifikasiyası
Alpha Lifetech, monoklonal antikorları xarakterizə etmək və antikor spesifikliyini, yaxınlığını və funksionallığını təsdiqləmək üçün Western blotting, immunohistokimya və ya funksional analizlər kimi antikor funksional validasiyasını təmin edir.

6. Antikor optimallaşdırması
Protein A və ya protein G affinlik xromatoqrafiyası kimi üsullardan istifadə edərək kultura supernatantından antikorların təmizlənməsi və Alpha Lifetech də antikor affinliyini artırmaq üçün antikor modifikasiyası metodları təmin edə bilər.

7. Antikor istehsalı
Alpha Lifetech, yüksək məhsuldarlıqlı skrininq tətbiqləri və genişmiqyaslı istehsal üçün namizəd antikorları qiymətləndirə bilər.

tez-tez verilən suallartez-tez verilən suallar

Monoklonal antikorların hazırlanması ilə bağlı tez-tez verilən suallar

1

Düzgün füzyon hibridomasını necə seçmək olar?

Füzyon prosesi zamanı 10-15 ədəd 96 quyulu mikrotitr lövhələri füzyon hibrid qarışığı ilə səpilir. Hər lövhəyə HAT-IMDM seçim mühiti verilir və 37 dərəcə Selsi temperaturda karbon qazı inkubatorunda saxlanılır. Füzyondan 9-14 gün sonra hibrid supernatantlar maraq doğuran spesifik antikorun mövcudluğu üçün sınaqdan keçirilir.
2

Seçim səmərəliliyini necə artırmaq olar?

Plazma hüceyrələrinin mieloma analoqları ilə birləşməsi 100% effektiv deyil. Optimal şəraitdə və ən effektiv stimullaşdırmada belə, hüceyrə birləşməsi hələ də ayrılması lazım olan qeyri-fluenza və birləşmiş hüceyrələrin qarışığını əmələ gətirir. Seçim prosesinin səmərəliliyini artırmaq üçün birləşmə üçün istifadə edilən mieloma hüceyrələrində nukleotid xilasetmə yolunda əsas ferment olan HGPRT yoxdur. Daha sonra qarışıq yalnız HGPRT fermenti olan hüceyrələrin, yəni plazma hüceyrələrindən HGPRT miras almış hibridomaların canlı olduğu HAT mühitində becərildi.
3

Hibridoma hüceyrə xətlərini antikor aktivliyinə görə necə yoxlamaq olar?

Hibrid sortların qiymətləndirilməsi çox vacib bir addımdır. Adətən, hibridoma, klon və subklon supernatant skrininqi fermentlə əlaqəli immunosorbent sınağı (ELISA), Western blot sınağı və flüoresansla aktivləşdirilmiş hüceyrə çeşidlənməsi (FACS) vasitəsilə həyata keçirilir. Supernatantın bütün skrininqini öz laboratoriyamızda aparmağı seçəcəyik.
4

Antikor aktivliyi müayinəsinin necə aparılacağı barədə ətraflı təlimat verin?

Test ediləcək hibridoma supernatları 500-dən 1440-a qədər nümunə ola bilər və 9-14-cü günlərə qədər testə hazır olacaq. Bu, üç-beş günlük müddət ərzində baş verə bilər və ya hamısı eyni gündə hazır ola bilər, buna görə də müştəri laboratoriyasının seçilmiş spesifik ikinci dərəcəli skrininq testləri ilə həftələr əvvəldən hazırlanması vacibdir.
5

Müsbət hibridomaların niyə subklonlaşdırılması lazımdır?

İlkin ELISA müayinəsi zamanı müsbət Quyular aşkar edildikdən sonra, hibridomalar subklonlaşdırma proseduruna hazırlıq məqsədilə daha böyük həcmə, yəni 24 quyulu lövhələrə köçürüldü. Hibridomaların subklonlaşdırılması adətən sabit monoklonların təcrid olunmasını təmin etmək üçün məhdud durulaşdırma metodu ilə həyata keçirilir. Texnika hibridoma kulturalarının durulaşdırılmasını və monoklonallığa (hər quyuda bir hüceyrə) nail olmaq üçün onların 96 quyulu lövhələrə paylanmasını əhatə edir. Qarışıq hibridoma populyasiyalarının inkişaf riskini azaltmaq üçün ən azı iki məhdud durulaşdırma aparılmalıdır.
6

Antikor kəşfi üçün hibridoma texnologiyasından istifadənin faydaları nələrdir?

Hibrid hüceyrə xətləri yüksək yaxınlıq, sabitlik və spesifikliyə malik antikorları ən səmərəli şəkildə istehsal etmək qabiliyyətinə görə təriflənmişdir.