Faj Displey Kitabxanası Tikinti Xidməti

Alpha Lifetech, antikor kitabxanalarının qurulmasını və istehsalını təmin etmək üçün hərtərəfli M13/T7 faj ekran platformasına malikdir. Ehtiyaclarınızı ödəmək üçün antikor scFv istehsalı kimi xüsusi xidmətlər də təqdim edə bilərik.

BİZİMLƏ ƏLAQƏ SAXLAYIN

Faj Displey Kitabxanası Tikinti Xidməti

Alpha Lifetech uzun illərdir ki, Phage ekran texnologiyası ilə dərindən məşğuldur. Elmi tədqiqat və ya layihə tədqiqatları üçün vaxta qənaət edən və sonrakı istehsalı asanlaşdıran mükəmməl stabil Phage ekran texnologiyası platforması qurmuşdur. Alpha Lifetech həmçinin müştərilərə vhh antikor istehsalı, scFv antikor istehsalı, Fab Antikor istehsalı kimi xidmətlər də təqdim edə bilər.

Alpha Lifetech, antikor kitabxanalarının qurulmasını və istehsalını təmin etmək üçün hərtərəfli M13/T7 faj ekran platformasına malikdir. Ehtiyaclarınızı ödəmək üçün antikor scFv istehsalı və yüksək məhsuldarlıqlı antikor müayinəsi kimi xüsusi xidmətlər də təqdim edə bilərik.

Fage displeyinə giriş

Faq displey texnologiyası, spesifik zülalların və ya peptidlərin funksional bağlanma molekullarını axtarmaq üçün faqlardan (bakteriyaları yoluxduran bir virus) istifadə edən bir texnikadır. Faq antikor kitabxanası qurma texnikalarına Fab antikor kitabxanası qurma, antikor scFv kitabxanası qurma, nanocisim kitabxanası qurma və s. daxildir. Bakteriofaqların növlərinə görə, onlar M13, T7, T4, λ və digər sistemlərə bölünə bilər. Kitabxana növünə görə, təsadüfi peptid kitabxanası, kDNT kitabxanası, antikor kitabxanası və zülal kitabxanasına bölünə bilər. Faq displey texnologiyası idarə etmək üçün sadə və istifadəsi ucuzdur. Lakin, bu texnika çox uzun ardıcıllıqları ifadə edə bilməyən kitabxanadakı molekulyar genetikanın müxtəlifliyini məhdudlaşdırır,

Hazırda faq displey texnologiyasından geniş istifadə olunur. Bunların arasında yeni vaksinlərin (ucuz və səmərəli sintetik vaksinlərin) tədqiqi və inkişafı, antikor dərmanlarının hazırlanması (ferment inhibitorlarının skrininqi), hüceyrə siqnalının ötürülməsi (simulyasiya edilmiş epitopların skrininqi) və antigen epitoplarının tədqiqi (monoklonal antikorların hazırlanması) sahələrində əhəmiyyətli nailiyyətlər var.

T7 Bakteriofaqa Giriş

T7 bakteriofaqı ikiqat zəncirli DNT-dir, DNT-nin uzunluğu 40 kb-dır və diametri 60 nm olan bir kapsidlə bükülmüşdür. Baş və quyruq arasındakı birləşdirici, gp8-in çoxsaylı nüsxələrindən ibarət halqavari quruluşdur. t7 bakteriofaqının başı və nüvəsi, gp8-ə bağlanan və baş və quyruğu birləşdirə bilən silindrik bir quruluş əmələ gətirir.

Şəkil 1. T7 bakteriofagının sxematik təsviri.(İstinad: T7 faj ekran sistemindəki irəliləyişlər (İcmal))

M13 Bakteriofaqa Giriş

M13 bakteriofaqı, ümumilikdə Ff faqları adlanan filamentli faqlar qrupuna aiddir. Uzunluğu 900 nm və eni 6,5 nm-dir. O, 11 müxtəlif zülalı kodlayan doqquz gendən ibarət olan, uzunluğu 6407 bp olan tək zəncirli DNT (ssDNT) genomunu ehtiva edir. Bunlardan beşi örtük zülallarıdır və altısı faqın replikasiyası və yığılmasında iştirak edir. Örtük zülallarının ən yüksək konsentrasiyası təxminən 2700 zülal vahidindən ibarət olan və xromosomun ətrafında bir örtük əmələ gətirən kapsid zülalı G8P-dir.

Şəkil 2. M13 bakteriofagının sxematik təsviri.(İstinad: Antikor Faj Göstərmə Texnologiyasının Əsasları)

Faq Displey Antikor Kitabxanasına Giriş

Antikor kəşfi müasir tibbdə getdikcə daha vacib hala gəlir. Müxtəlif antikor kəşf yanaşmaları mövcuddur, lakin faq displey antikor kitabxanası tibb elmində daha çox istifadə olunur.

1990-cı ildən bəri, faq kitabxanalarının qurulması üçün VH, VHH, scFv, diabolik və Fab antikorları da daxil olmaqla müxtəlif antikor formatlarından istifadə edilmişdir. VH və VL struktur domenlərindən ibarət scFv, antikor scFv kitabxanalarının qurulması üçün istifadə edilən tək zəncirli antikorlardır. scFv qısa yarımparçalanma dövrü və aşağı immunogenlik ilə xarakterizə olunur. Fab Antikor Kitabxanası, yüksək affinliklə ideal antikorları tez bir zamanda skre edə bilən VH, VL, CL və CH1-dən ibarətdir. Hədəf antigen-VHH-yə bağlana bilən ən kiçik vahid hazırda nanobodi kitabxanasını təşkil edir, VHH sadə quruluş, kiçik həcm, yüksək həllolma, yaxşı stabillik və asan hazırlanma və ifadə üstünlüklərinə malikdir. Sintetik nanobodi (Nb) kitabxanaları stabil, yüksək affinlikli sintetik nanobodi üçün heyvan immunizasiyasına cəlbedici alternativ kimi ortaya çıxır. Ümumiyyətlə, bu antikor fraqmentləri M13 faqının G3P-sinə birləşdirilir və bir antikor fraqmentini kodlayan çox sayda genin klonlaşdırılması ilə bir çox müxtəlif antikorların seçilə biləcəyi böyük faq ekran antikor kitabxanaları yaradıla bilər.

Phage Kitabxanasının Tikinti Prosesi

Faq kitabxanasının qurulması prosesi belədir: məhsulları əldə edən PZR amplifikasiyası üçün xüsusi primerlər hazırlanmışdır ki, bunlar T7/M13 faq vektoru ilə fermentlə liqasiya olunur və rekombinant faq plazmidası uğurla qurulur. Rekombinant faq plazmidası TG1 reseptor hüceyrələrinə çevrilmiş, sonra müvafiq antibiotiklər olan bir mühitə örtülmüş və transformatorları yoxladıqdan sonra genişləndirilmiş kulturasiya aparılmışdır. Bir neçə dəfə kulturasiyadan sonra faq bakteriyalarda replikasiya müddətlərini təkrarlayır və hədəf zülalını və ya polipeptidi uğurla ifadə edir. Daha sonra bəzi çirkləri və bağlı olmayan faqları təmizləmək üçün faq kitabxanası təmizlənir.

Dəyişkən bölgələr (VH və VL) antikor müxtəlifliyi ilə korrelyasiya göstərdi və VH və VL, faq zülalı PIII-ü kodlayan ardıcıllıqla birlikdə faq vektoruna daxil edildi. Yığıldıqdan sonra, faq hissəciyi məruz qalır və kiçik örtük zülalı III-ün N-terminalına birləşdirilərək funksional antikor fraqmenti əmələ gətirir və antikor DNT ardıcıllığını ehtiva edən bir kitabxana əldə edilir.

İmmunizasiya bitdikdən sonra titr aşkar edildi və titr təyin edildikdən sonra heyvan qanı götürüldü. Qandan limfositlər təcrid olunur, RNT çıxarılır, RT-PCR hədəf fraqmenti gücləndirir və V bölgəsi gen fraqmenti əldə edilir. V geni spesifik bir praymer istifadə edərək gücləndirilir.

Yaradılan təbii kitabxanalara heyvanlarda istənilən hədəfi hədəfə ala bilən zəif immunogen antikorlar daxildir. Antigenə xüsusi olaraq bağlanan faq antikorları antigeni fiksasiya edən və ya etiketləyən skrininq üsulları ilə toplana bilər.

Hədəf antigen mikroplitə dəliyi kimi bərk daşıyıcıya bərkidilir və ya maqnit muncuğuna birləşdirilir. Daha sonra onu antigenə bağlamaq üçün faq antikor kitabxanası əlavə olunur. Çoxsaylı elüsiyalardan sonra aşağı affinlikli və ya qeyri-spesifik faqlar yuyulur və spesifik antikorlar göstərənlər saxlanılır.

Faj Ekranının Tətbiqi

*Müasir tibbdə antikor kəşfi getdikcə daha vacib hala gəlir. Müxtəlif antikor kəşf yanaşmaları mövcuddur, lakin faq ekran texnologiyası tibb elmində daha çox istifadə olunur. 1990-cı ildən bəri faq kitabxanalarının qurulması üçün VH-lər, VHH-lər, scFv-lər, diaboliklər və Fab antikorları da daxil olmaqla müxtəlif antikor formatlarından istifadə edilmişdir.
*Faq peptid kitabxanaları zülal epitoplarının ardıcıllığının sürətli müəyyən edilməsinə imkan verir və epitoplarla antigen reseptorları arasındakı qarşılıqlı təsiri araşdırmaq üçün güclü bir vasitəyə çevrilmişdir.
*Antikor fraqmentləri M13 faqının G3P-sinə birləşdirilir və antikor fraqmentini kodlayan çox sayda genin klonlaşdırılması ilə bir çox müxtəlif antikorların seçilə biləcəyi böyük faq ekran antikor kitabxanaları yaradıla bilər.
*T7 faj displey sisteminin sadəliyi, yüksək təhlükəsizlik, stabillik, asan saxlama və daşınma da daxil olmaqla bir çox üstünlükləri var, buna görə də sistem profilaktik və terapevtik peyvəndlərdə istifadə olunur.
*T7 faj displey sistemi patogen mikroorqanizmlərin səthi antigenləri və xərçəng antigenləri kimi müxtəlif antigenləri aşkar edə bilir.

Faq