Phage Display Kitabxanasının Ekran Xidməti
Alpha Lifetech uzun illərdir ki, Phage ekran texnologiyası ilə dərindən məşğuldur. Elmi tədqiqat və ya layihə tədqiqatları üçün vaxta qənaət edən və sonrakı istehsalı asanlaşdıran mükəmməl stabil Phage ekran texnologiyası platforması qurmuşdur. Alpha Lifetech həmçinin müştərilərə vhh antikor istehsalı, scFv antikor istehsalı, Fab Antikor istehsalı kimi xidmətlər də təqdim edə bilər.
Alpha Lifetech, antikor kitabxanalarının qurulmasını və istehsalını təmin etmək üçün hərtərəfli M13/T7 faj ekran platformasına malikdir. Ehtiyaclarınızı ödəmək üçün antikor scFv istehsalı və yüksək məhsuldarlıqlı antikor müayinəsi kimi xüsusi xidmətlər də təqdim edə bilərik.
Faq Ekran Kitabxanasının Quruluş Prosesi
Faq kitabxanasının qurulması prosesi belədir: məhsulları əldə edən PZR amplifikasiyası üçün xüsusi primerlər hazırlanmışdır ki, bunlar T7/M13 faq vektoru ilə fermentlə liqasiya olunur və rekombinant faq plazmidası uğurla qurulur. Rekombinant faq plazmidası TG1 reseptor hüceyrələrinə çevrilmiş, sonra müvafiq antibiotiklər olan bir mühitə örtülmüş və transformatorları yoxladıqdan sonra genişləndirilmiş kulturasiya aparılmışdır. Bir neçə dəfə kulturasiyadan sonra faq bakteriyalarda replikasiya müddətlərini təkrarlayır və hədəf zülalını və ya polipeptidi uğurla ifadə edir. Daha sonra bəzi çirkləri və bağlı olmayan faqları təmizləmək üçün faq kitabxanası təmizlənir.
Faj Ekran Kitabxanasının Ekran Metodları
Faq displey antikor istehsalının uğuru əsasən antikor faq displey kitabxanalarından asılıdır və faq panninginin ümumi metodları bərk fazalı və maye fazalı skrininqdir. Bərk fazalı antigen skrininqi, antikor faq displey kitabxanalarını əldə etmək üçün 3-4 dövrə elüsiya yolu ilə spesifik antikorları zənginləşdirir; Maye fazalı antigen skrininqi, biotinlə işarələnmiş hədəf və antikor faq displey kitabxanalarını inkubasiya etməklə və maqnit muncuqlarından istifadə edərək bağlı faqları tutmaqla həyata keçirilir. Bərk fazalı skrininq daha çox antigen istehlak edir və bəzi antigen epitopları məhv olur. Maye fazalı skrininq yüksək səmərəlilik və zənginləşdirmə ilə xarakterizə olunur, lakin əldə edilən antikorlar daha az spesifikdir. Faq panninginin metodu təcrübi ehtiyaclardan asılıdır və bunların hamısı faq displey antikor istehsalının təsirinə müəyyən təsir göstərəcəkdir.
Yüksək Keçidli Antikor Skrininqi
Müasir tibbdə antikor inkişafı sürətlə inkişaf etmişdir. Müxtəlif antikor inkişaf metodları mövcuddur, lakin yüksək məhsuldarlıqlı antikor skrininqi tibb elmində daha çox istifadə olunur. Bu proses çox miqdarda antikor repertuar müxtəlifliyi əldə etməyə imkan verir. Ənənəvi antikor kitabxanası skrininq metodları ilə birləşdirmək faq ekran kitabxanalarının skrininq keyfiyyətini artıra bilər. Bioloji skrininqdən sonra antikorlar aşağı məhsuldarlıqlı ELISA və ya yüksək məhsuldarlıqlı antikor skrininqi ilə xarakterizə edilə bilər.

Şəkil 1. Faq antikor kitabxanalarının qurulmasından antigenlərə yüksək yaxınlıq və aşağı immunogenliyə malik monoklonal antikorların generasiyasına qədər hadisələrin ardıcıllığını göstərən axın diaqramı.(İstinad mənbəyi: Antikor Dərman Kəşfi üçün Güclü Platforma Kimi Faj Ekran Texnologiyası - PMC (nih.gov))
Antikor Faj Displeyinin Skrininqi üçün TədbirlərEhtiyat tədbirləri
Bufer Mülahizələri
Tamponların seçilməsi hədəfin sabitliyini, bağlanma mikro mühitini və faktiki tətbiq ssenarisində minimal qeyri-spesifik bağlanmanı nəzərə almalıdır. Əlaqəli olmayan zülallar, qeyri-ion yuyucu vasitələr və fizioloji duz konsentrasiyaları fonu azaltmağa kömək edir. Bəzi hədəflər üçün buferə ikivalent kationların və ya digər kofaktorların əlavə edilməsi tələb oluna biləcəyi, zülal kofaktorlarının hədəflə birgə fiksasiya edilə biləcəyi, çeşidləmə buferinə əlavə edilə biləcəyi və hətta hədəfi tutmaq üçün bir vasitə kimi istifadə edilə biləcəyi kimi digər şərtlər də mövcuddur.
Təzyiq Mülahizələri
Ümumi seçim təzyiqi mülahizələrinə hədəf molekullarının konsentrasiyası, bağlanma müddəti, yuma intensivliyi və s. daxildir. Seçim təzyiqini artırmaq üçün digər üsullara denaturantların (məsələn, turşular, karbamid və quanidin), üzvi həlledicilərin istifadəsi, temperaturun artırılması və ya yuma buferində rəqib ligandların və ya hədəflərin konsentrasiyasının artırılması daxildir.
Bunların arasında birinci raund skrininq vacibdir. Birinci raund skrininq qeyri-spesifik klonları çıxararkən qurulmuş kitabxanadan mümkün qədər çox müsbət klon tutmaqdır. Kitabxananın müxtəlifliyini qorumaq üçün çox sayda bağlı faqın tutulmasını təmin etmək üçün məsaməli örtüklü hədəflər və ya çox sayda həll olan hədəf istifadə edilməlidir. Sonrakı skrininq raundlarında zənginləşmənin artması, dəfələrlə yuyulma və yuma müddətinin artması ilə seçim təzyiqi artırılmalı, yüksək affinliyə malik klonlar skrininq edilə bilər.
Bunların arasında birinci raund skrininq vacibdir. Birinci raund skrininq qeyri-spesifik klonları çıxararkən qurulmuş kitabxanadan mümkün qədər çox müsbət klon tutmaqdır. Kitabxananın müxtəlifliyini qorumaq üçün çox sayda bağlı faqın tutulmasını təmin etmək üçün məsaməli örtüklü hədəflər və ya çox sayda həll olan hədəf istifadə edilməlidir. Sonrakı skrininq raundlarında zənginləşmənin artması, dəfələrlə yuyulma və yuma müddətinin artması ilə seçim təzyiqi artırılmalı, yüksək affinliyə malik klonlar skrininq edilə bilər.
Mənfi Skrininq Strategiyası
Antigen etiketləri və daşıyıcı materiallar üçün yoxlama prosesi antigen konjugatlarındakı bütün maddələri, məsələn, etiketlər, birləşmə zülalları və dəstəkləyici substratları yoxlamaqdır. Hədəf olmayanların mənfi yoxlanılması hədəf antigendən başqa antikorların zənginləşməsini məhdudlaşdıra bilər.
Transfeksiya olunmuş hüceyrə xətlərini skrininq edərkən, bütün hüceyrələr, liposomlar, nano-fosfolipid disklər və VLP-lər simulyasiya edilmiş transfeksiya olunmuş hüceyrələr və ya transfeksiya olunmamış hüceyrələr istifadə edilərək mənfi skrininq edilə bilər.
Mürəkkəb antigen qarışıqlarının çıxarılması Bütün hüceyrələr və ya natəmiz zülallar kimi naməlum və ya mürəkkəb hədəf molekulları üçün ciddi mənfi skrininq aparıla bilər.
Antigenlərin spesifik yerlərinə qarşı antikor strategiyası, biri yüksək konsentrasiyalı ligand əlavə etməklə ligandla rəqabət apara bilən antikoru eluatasiya etmək, digəri isə antikoru bloklamaqdır.
Transfeksiya olunmuş hüceyrə xətlərini skrininq edərkən, bütün hüceyrələr, liposomlar, nano-fosfolipid disklər və VLP-lər simulyasiya edilmiş transfeksiya olunmuş hüceyrələr və ya transfeksiya olunmamış hüceyrələr istifadə edilərək mənfi skrininq edilə bilər.
Mürəkkəb antigen qarışıqlarının çıxarılması Bütün hüceyrələr və ya natəmiz zülallar kimi naməlum və ya mürəkkəb hədəf molekulları üçün ciddi mənfi skrininq aparıla bilər.
Antigenlərin spesifik yerlərinə qarşı antikor strategiyası, biri yüksək konsentrasiyalı ligand əlavə etməklə ligandla rəqabət apara bilən antikoru eluatasiya etmək, digəri isə antikoru bloklamaqdır.
Faj Ekranının Tətbiqi
*Müasir tibbdə antikor kəşfi getdikcə daha vacib hala gəlir. Müxtəlif antikor kəşf yanaşmaları mövcuddur, lakin faq ekran texnologiyası tibb elmində daha çox istifadə olunur. 1990-cı ildən bəri faq kitabxanalarının qurulması üçün VH-lər, VHH-lər, scFv-lər, diaboliklər və Fab antikorları da daxil olmaqla müxtəlif antikor formatlarından istifadə edilmişdir.
*Faq peptid kitabxanaları zülal epitoplarının ardıcıllığının sürətli müəyyən edilməsinə imkan verir və epitoplarla antigen reseptorları arasındakı qarşılıqlı təsiri araşdırmaq üçün güclü bir vasitəyə çevrilmişdir.
*Antikor fraqmentləri M13 faqının G3P-sinə birləşdirilir və antikor fraqmentini kodlayan çox sayda genin klonlaşdırılması ilə bir çox müxtəlif antikorların seçilə biləcəyi böyük faq ekran antikor kitabxanaları yaradıla bilər.
*T7 faj displey sisteminin sadəliyi, yüksək təhlükəsizlik, stabillik, asan saxlama və daşınma da daxil olmaqla bir çox üstünlükləri var, buna görə də sistem profilaktik və terapevtik peyvəndlərdə istifadə olunur.
*T7 faj displey sistemi patogen mikroorqanizmlərin səthi antigenləri və xərçəng antigenləri kimi müxtəlif antigenləri aşkar edə bilir.
*Faq peptid kitabxanaları zülal epitoplarının ardıcıllığının sürətli müəyyən edilməsinə imkan verir və epitoplarla antigen reseptorları arasındakı qarşılıqlı təsiri araşdırmaq üçün güclü bir vasitəyə çevrilmişdir.
*Antikor fraqmentləri M13 faqının G3P-sinə birləşdirilir və antikor fraqmentini kodlayan çox sayda genin klonlaşdırılması ilə bir çox müxtəlif antikorların seçilə biləcəyi böyük faq ekran antikor kitabxanaları yaradıla bilər.
*T7 faj displey sisteminin sadəliyi, yüksək təhlükəsizlik, stabillik, asan saxlama və daşınma da daxil olmaqla bir çox üstünlükləri var, buna görə də sistem profilaktik və terapevtik peyvəndlərdə istifadə olunur.
*T7 faj displey sistemi patogen mikroorqanizmlərin səthi antigenləri və xərçəng antigenləri kimi müxtəlif antigenləri aşkar edə bilir.
Faq
01020304
0102030405
010203
If you have any questions, please feel free to contact us at any time.
Leave Your Message
0102















2018-07-16 

