Zülal-Zülal Qarşılıqlı Təhlili Xidməti
Alpha Lifetech, müxtəlif müştərilərin eksperimental ehtiyaclarını ödəmək üçün müştərilərə protein analizləri, protein qarşılıqlı təsir analizi, protein-zülal qarşılıqlı təsir analizi (CO-IP, Western Blot, Xromatin immunpresipitasiya analizi) və protein funksiyası analizi də təqdim edə bilər.
BİZİMLƏ ƏLAQƏ SAXLAYIN01
Zülal-Zülal Qarşılıqlı Təhlili Xidməti
Alpha Lifetech uzun illərdir ki, zülal analizləri ilə dərindən məşğul olur və zülal funksiyası analizi üçün etibarlı bir platforma qurmuş və zülal qarşılıqlı təsirini yoxlamaq üçün müxtəlif texniki vasitələrə yiyələnmişdir ki, bu da elmi tədqiqat və ya layihə tədqiqatı vaxtına qənaət etməklə yanaşı, sabit nəticələr əldə etməyə imkan verir.
Alpha Lifetech, müxtəlif müştərilərin eksperimental ehtiyaclarını ödəmək üçün müştərilərə protein analizləri, protein qarşılıqlı təsir analizi, protein-zülal qarşılıqlı təsir analizi (CO-IP, Western Blot, Xromatin immunpresipitasiya analizi) və protein funksiyası analizi də təqdim edə bilər.
Zülal-Zülal Qarşılıqlı Təhlilinə Giriş
Zülallar, genetik materiallarda saxlanılan təlimatlara cavab verən istənilən həyat formasında ən vacib icraçı molekullardır. Daha tez-tez zülallar öz işlərini digər zülallarla qarşılıqlı təsir göstərən rol oyunçuları kimi yerinə yetirirlər ki, bu da bir zülalın funksiyası hüceyrənin real kontekstində araşdırıldıqda daha aydın olur. Zülallar arasındakı qarşılıqlı təsirləri müəyyən etmək fərdi bir zülalın biokimya tədqiqatı üçün çox vacibdir. Ümumi növlərin zülal qarşılıqlı təsirinin təhlili aşağıdakı kimidir:
Ko-immunopresipitasiya Testi
Ko-immunopresipitasiya metodunun prinsipi hədəf zülalını, spesifik antikoru və protein A/G maqnit muncuqlarını inkubasiya üçün qarışdırmaqdan, bağlanmamış zülalın supernatantını maqnit çarxındakı maqnit muncuqlarının adsorbsiyası yolu ilə atmaqdan və xüsusi olaraq bağlanmadığı təqdirdə zülal və digər çirkləri təmizləmək üçün maqnit muncuqları yuyulmaqdan ibarətdir.
Şəkil 1. Co-IP analizlərinin sxematik diaqramı.(İstinad mənbəyi: Koimmunopresipitasiya analizi - PubMed (nih.gov))
Çəkmə-aşağı analiz
Açılan analiz məlum zülalı maqnit muncuğuna fiksasiya etmək və aşkar ediləcək maddəni əlavə etməkdir. Eluent qarşılıqlı təsir göstərən zülalların adsorbsiyası üçün aşkar edilir.
1988-ci ildə Smit və digərləri hədəf zülala GST etiketi əlavə etmək, GSH vasitəsilə qarşılıqlı təsir göstərən zülalı tutmaq, bağlanmanı ayırmaq və WB analizləri ilə yoxlamaq üçün Gst açılan analiz adlanan GST birləşmə zülalını təmizlədilər.
Şəkil 2. GST açılan analizlərinin sxematik diaqramı.(İstinad mənbəyi: PIF4-ün vitro bağlanmasını öyrənmək üçün GST Pull-Down Analysis - PubMed (nih.gov) )
Onun əsas məqsədi nikel və ya kobalt kimi metal ionlarından mühit kimi istifadə etmək, zülalı affinlik xromatoqrafiyası vasitəsilə təmizləmək və təsdiq üçün WB təcrübəsi vasitəsilə bağlanmanı ayırd etməkdir.
Bundan əlavə, DNT Pull-down (Zülal DNT bağlanma analizi), RNT Pull-down (Zülal RNT qarşılıqlı təsir analizi) və kiçik molekullu pull-down analizləri mövcuddur.
DNT Pull-down (Zülal DNT bağlanma analizi) zülalın DNT bağlanmasını təyin etmək üçün in vitro metoddur. Xüsusi zülalların hədəf DNT-yə bağlanıb-bağlanmadığı WB analizləri ilə aşkar edilmişdir; Zülallara bağlı naməlum DNT fraqmentləri, hansı DNT fraqmentləri MS aşkarlanması ilə məlumdur.
RNT Pull-down (Zülal RNT qarşılıqlı təsiri analizi), RNT-nin zülallara bağlanmasını təyin etmək üçün in vitro metoddur. Xüsusi zülalların hədəf RNT-yə bağlanıb-bağlanmadığı WB analizləri ilə aşkar edilmişdir; Zülallara bağlanmış naməlum RNT fraqmentləri, hansı RNT fraqmentləri MS aşkarlanması ilə məlumdur.
SM pull-down (kiçik molekullu pull-down analizləri) kiçik molekullara xüsusi olaraq bağlanan hədəf zülalları tapa bilər və MS ilə birləşdirildikdə, kiçik molekullu hədəf zülalları dəqiq şəkildə yoxlanıla bilər ki, bu da in vitro etiketləmə metoduna və bioloji ortoqonal metoda bölünə bilər.
WB Təcrübəsi
WB təcrübəsi (həmçinin Western Blot təcrübəsi və ya Western blot kimi də tanınır), mahiyyəti antigen və antikorun spesifik reaksiyasıdır, əsas prinsip SDS poliakrilamid gel elektroforezi vasitəsilə denaturasiya olunmuş zülalları ayırmaq və membran ötürülməsi (yaş və ya yarı quru fırlanma) vasitəsilə bərk fazalı daşıyıcıya (məsələn, PVDF membranı, NC membranı) ötürməkdir. Bloklamadan sonra (BSA, ayran və s. istifadə edərək), ilkin antikor xüsusi olaraq zülala bağlanmaq üçün tətbiq olunur və film yuyulduqdan sonra flüoresenlə işarələnmiş ikincil antikor əlavə olunur. İkinci antikoru ilkin antikorla bağlamaqla hədəf zülal substrat rənginin inkişafı və kimyilüminesensiya ilə müşahidə edilə bilər. Ümumiyyətlə, nümunədə spesifik bir zülalın ifadə olunub-olunmadığını müəyyən etmək və onun ifadə səviyyəsini təxminən təhlil etmək üçün istifadə olunur.
Zülal-Zülal Qarşılıqlı Təsir Metodu müqayisəsi
Zülalın açılan analizləri, hər ikisi zülal qarşılıqlı təsir təcrübələrinin aşkarlanmasına aid olan Co-IP analizlərinə bənzəyir. İki metod arasındakı fərq, Co-IP analizlərinin məlum zülalların qarşılıqlı təsir göstərən zülallarını əldə etməsidir ki, bu da müəyyən bir etibarlılığa malikdir, lakin qarşılıqlı təsir göstərən zülalların birbaşa və ya dolayı yolla qarşılıqlı təsir göstərdiyini təsdiqləyə bilmir. Açılan analizlər, məlum zülalla qarşılıqlı təsir göstərən naməlum zülalın tapılmasıdır. Məlum zülalın aşkar edilmiş zülalla qarşılıqlı təsir göstərib-göstərmədiyini birbaşa təsdiqləyə bilər, lakin in vivo bağlanma vəziyyətini bilə bilməz.
Ko-immunopresipitasiya texnologiyası, immunopresipitasiya təcrübələrinə əsaslanaraq, iki və ya daha çox zülal arasında qarşılıqlı təsirin olub-olmadığını təhlil etmək üçün istifadə olunur. Digər eksperimental texnikaların (GST Pull-down, Western Blot, Chromatin immunopresipitasiya təhlili və s.) zülal qarşılıqlı təsirinin təhlili ilə müqayisədə, Co-IP texnologiyası daha yüksək spesifikliyə, həssaslığa və yüksək təkrarlanma qabiliyyətinə malikdir ki, bu da qeyri-spesifik bağlanmanın müdaxiləsinin qarşısını ala və zülalların təbii vəziyyətdə qarşılıqlı təsirini əks etdirə bilər.
| GST Aşağı çəkin | Co-IP | WB | |
|---|---|---|---|
| Üstünlük | *İstifadəsi asandır *Müxtəlif zülalların təmizlənməsi üçün uyğundur | *İn vivo qarşılıqlı təsir təhlili üçün *Aşağı axın zülalı ilə müəyyən edilə bilər | *Güclü spesifiklik *Keyfiyyət və kəmiyyət in vitro |
| Məhdudiyyət | *Ola bilsin ki, qeyri-spesifik bağlanma *Qarşılıqlı əlaqənin əlavə təsdiqlənməsi tələb olunur | *Antikorlardan güclü asılılıq *Qeyri-spesifik bağlanma baş verə bilər | *Vaxt aparan *Genişmiqyaslı protein analizi üçün istifadəsi çətindir |
| Tətbiq Nümunəsi | *Qarşılıqlı təsirləri müəyyən edin *Təmizlənmiş protein kompleksi | *Siqnal ötürülməsini öyrənin *Xəstəlik mexanizmi | Zülal-zülal, zülal-DNT və zülal-RNT qarşılıqlı təsirlərinin sonrakı təhlili |
Xüsusi
Xidmətləri ehtiyaclarınıza uyğunlaşdırın
Təcrübə
İllərdir protein istehsalı təcrübəsi
Texnologiya
Yüksək keyfiyyətli çatdırılma nəticələri
Təcrübə Prosesi
Ciddi keyfiyyət idarəetmə prosesi
Hər hansı bir sualınız varsa, istənilən vaxt bizimlə əlaqə saxlamaqdan çəkinməyin.
Leave Your Message
2018-07-16 
0102