VHH antikoru dəvə heyvanlarının serumunda tapılan təbii itkin işıq zəncirinin (VL) antikorudur. VHH antikorunun quruluşu sadədir və yalnız iki ağır zəncirdən (VH) ibarətdir. Nanobodilər təxminən 15 kDa molekulyar çəkiyə malik ağır zəncir dəyişkən bölgəsindən (VHH) ibarətdir. VHH antikoru antigenləri tanımaq üçün normal qabiliyyətə malikdir və əla yaxınlıq, əla spesifiklik, əla sabitlik və əla nüfuzetmə göstərir. Quruluşa qarşı antikorlar o vaxtdan bəri alpakalar və köpəkbalıqları kimi digər heyvanlarda da tapılmışdır. VL domeni olmasa da, yalnız bir ağır zəncir dəyişkən bölgəsi və iki ənənəvi CH2 və CH3 bölgəsi olan Nanobodilər yüksək sabit tək domenli antikor və antikor aktivliyinə malik ən kiçik bilinən bağlayıcı vahiddir. Alpha Lifetech, müştərilərinə nanobodinin hazırlanması, nanobodi kitabxanasının qurulması və skrininqi, VHH nanobodi ifadəsi və bir sıra xidmətlər təqdim edə bilər. Nanobodi sintezi və faj ekranının inkişaf platforması vasitəsilə müxtəlif növ faj antikor kitabxanalarını da daxil olmaqla səmərəli şəkildə qura və skrininq edə bilər, müştərilərimizə spesifik, yüksək spesifikliyə malik antikor məhlulları təqdim edir. Biz həmçinin müştərilərimiz üçün nanobücümlər üçün humanizasiya edilə bilən peşəkar antikor humanizasiya strategiyaları hazırlaya bilərik və şirkətimiz demək olar ki, insan antikorlarına bərabərdir.

Əvvəlcə heç bir xəstəliyi olmayan alpaka, immunogenlərin immun reaksiyası yaratmaq üçün immun sistemini stimullaşdırmasına imkan verir və bu heyvanlar tək domenli antikorlar istehsal edə bilir. Daha sonra, alpaka PBMC-dən tək B hüceyrələrini təcrid etdik və B hüceyrələrindən RNT çıxarılaraq kDNT-yə transkripsiya edildi. Nəhayət, şablon kimi istifadə edildi və hədəf VHH ardıcıllığımızı elektroforez ilə yoxladıq. Daha sonra, hazırlanmış VHH antikorunun sabitliyini və yaxınlığını artıra bilən yoxlanılmış VHH antikor ardıcıllığının ardıcıllıqla təhlilini apardıq. Eyni zamanda, VHH antikorlarının sahəyə yönəlmiş mutagenez və sabitlik yoxlamasını da apara bilərik. Skrininq üçün müəyyən spesifik mutasiyalar kimi xüsusi metodlar tətbiq etməklə VHH antikor mutantlarının daha yüksək sabitliyini əldə edə bilərik. Daha sonra mühəndis yaranan VHH ardıcıllığını VHH antikor ifadəsi üçün müvafiq ifadə vektoruna (məsələn, plazmidlər, viruslar və s.) daxil etdi. Nəhayət, faq displey texnologiyası və ya maya displey texnologiyası vasitəsilə VHH antikorları sahib səthində ifadə olunur və sonra örtüklü antigenlər və ELISA istifadə edilərək hədəf antigenə xüsusi olaraq bağlana bilən nanoantikorlar seçilir. Alpha Lifetech həmçinin müştərilərə çatdırılan nanocisim ardıcıllıqlarının düzgünlüyünü və funksional aktivliyini təmin etmək üçün seçilmiş nanocisimləri ardıcıllıqla yoxladı və təsdiqlədi.

VHH texnologiyası gen mühəndisliyindəki müxtəlif irəliləyişlərdən faydalanır, beləliklə, hədəf gen normal şəraitdə bir-birinə qarışdırılır və yenidən düzülür ki, bu da müxtəlif etiketlər ehtiva edə bilən digər texnologiyalar üçün yüksək dərəcədə bağlanma vasitəsi təmin edə bilər və VHH texnologiyası tərəfindən istehsal edilən antikorlar təmizləmək üçün əlverişlidir. Yüksək məhsuldarlıqlı skrininq üsullarından istifadə edərək, Alpha Lifetech qısa müddət ərzində çox sayda antikordan müştərilər tərəfindən tələb olunan spesifik funksiyalara malik VHH antikorlarını skrininq edə bilər. Bu arada, VHH antikorları VHH antikorları yüksək temperaturlara və digər həlledicilərə məruz qaldıqda qeyri-müəyyən müddətdə və iqtisadi cəhətdən istehsal edilə bilər. VHH antikorları, iskele halına gəlmək, etiketləmə və spesifik amin turşularını dəyişdirmək kimi digər istifadələr yaratmaq üçün genetik olaraq manipulyasiya edilə bilər. VHH antikorları mikrotitr lövhələri, elektrokimyəvi biosensorlar və yan axın cihazları kimi ənənəvi antikorlardan istifadə edən istənilən ümumi platforma üçün uyğundur. VHH antikorlarının daha kiçik ölçüsünə görə, bağlanma sahəsində daha yüksək sıxlığa malik ola bilər ki, VHH antikorları artan siqnal və buna görə də daha yüksək həssaslıq baxımından üstün bir üstünlüyə malikdir. Eyni zamanda, VHH antikorları şiş diaqnozu və müalicəsində, iltihab diaqnozunda, mərkəzi sinir sistemi xəstəliklərinin müalicəsində və digər sahələrdə çox geniş tətbiq sahəsinə malikdir. VHH antikorları, genetik cəhətdən asanlıqla dəyişdirildiyi və əla stabilliyə malik olduğu üçün qida və yemdəki mikotoksinləri izləmək üçün xüsusilə faydalıdır.

İmmunizasiya prosesində müxtəlif immunogenlərdən istifadə edirik. İmmunogenlərin xüsusiyyətlərinə görə, onları təbii antigenlərə, rekombinant antigenlərə, sintetik antigenlərə və kiçik molekullu antigenlərə ayıra bilərik. Təbii antigenlərə virus immunogenləri daxildir. Təbii immunogenlərin təmizlənməsi prosesi mürəkkəbdir ki, bu da digər immunogenlərə nisbətən daha çətindir və təmizlənmə dəyəri də daha yüksəkdir. Viral immunogen bütöv virus inaktivləşdirilmiş peyvəndi, alt vahid peyvəndi, virus vektor peyvəndi və mRNT peyvəndinə bölünür. Bütün virus inaktivləşdirilmiş peyvənd orqanizmi immun reaksiyası yaratmaq üçün stimullaşdıra bilər, lakin virus tamamilə inaktivləşdirilməlidir və hazırlıq prosesi daha mürəkkəbdir. Alt vahid peyvəndi üçün antigen kimi yalnız virus səthi zülalından istifadə etdik, buna görə də bu immunogenin təhlükəsizliyi yüksəkdir, lakin immun effektini artırmaq üçün köməkçi maddə əlavə edilməlidir. Genetik modifikasiyadan sonra adenovirus və lentivirus virus replikasiyası və ifadəsi vasitəsilə immun reaksiyasının yaranmasına səbəb olmaq üçün vektor kimi istifadə olunur. İmmunitet təsiri səmərəli və davamlıdır, lakin hazırlıq prosesi mürəkkəbdir, buna görə də biotəhlükəsizliyə ciddi nəzarət etməliyik. mRNT hüceyrələrə birbaşa idxal edilə bilsə də, hüceyrələr antigeni ifadə edə və immun reaksiyasının baş verməsini stimullaşdıra bilsə də, bu proses daha çətindir və bu da mRNT-nin sabitliyini və çatdırılma səmərəliliyini təmin etməyimizi tələb edir. Rekombinant antigenlər təbii antigenlərdən konformasiya baxımından fərqlənsələr də, geniş sənaye istehsalına məruz qala bilərlər. Kiçik molekullu zülallar və ya polipeptid antigenləri in vitro sintez üsulları ilə hazırlana bilər. Onların quruluşu idarə oluna bilər, lakin dizaynı mürəkkəb ola bilər. Kiçik molekullu antigenlər əsasən peptidlər və nukleotidlər kimi kiçik molekullu birləşmələrdir, çünki onlar özləri immunogen deyillər, buna görə də yalnız makromolekulyar daşıyıcılarla əlaqə qurduqdan sonra immunogen kimi istifadə edilə bilərlər.

Nanoantikorların molekulyar çəkisi çox kiçikdir, adətən 12-15 kDa civarındadır ki, bu da ənənəvi IgG antikorunun yalnız onda biri qədərdir. Kristal quruluşu diametri təxminən 2,5 nm və uzunluğu təxminən 4,2 nm olan reqbi topudur. Unikal molekulyar quruluş qan-beyin baryerindən toxumalara yaxşı nüfuz etməyə, yarımparçalanma müddətini qısaltmağa və böyrəklərin daha yüksək klirensini təmin etməyə imkan verir. Nanoantikorlar tamamlayıcı təyinedici və onurğa bölgələrindən ibarətdir. Tamamlayıcı tamamlayıcı qərar bölgələrinə CDR 1, CDR 2 və CDR 3 daxildir. CDR 3 bölgəsində 3 ilə 28 amin turşusunun uzunluq diapazonu nanoantikor kitabxanasının saxlama tutumunu təmin edir. Yalnız 8 ilə 15 amin turşusu olan ənənəvi antikor CDR 3 bölgəsi ilə müqayisədə daha uzun CDR 3 olan bəzi CDR 3 bölgələri antigenin səthində gizli epitopları müəyyən etməyə kömək etdi. Nanocisimlərin onurğa bölgəsinə FR 1, FR 2, FR 3 və FR 4 daxildir və FR 2 üzərində dörd hidrofilik amin turşusu mutasiyası mövcuddur və bu mutasiya antikorun suda həllolma qabiliyyətini artırır. CDR 1 və CDR 3 arasındakı xüsusi disulfid rabitəsi antikorların yüksək təzyiq, yüksək temperatur, denaturasiya və digər şəraitdə stabilliyini artırır ki, bu da nanocisimlərin istehsalına və qorunmasına kömək edir və həmçinin yeni tətbiq üsullarının mümkünlüyünü yaradır.