Maya Səthi Ekran Kitabxanası Ekran Xidməti

Alpha Lifetech, maya ekran kitabxanasının qurulması və antikor kitabxanalarının skrininqi üzrə ixtisaslaşıb, müxtəlif formalı maya kitabxanaları yaratmaq və onları dünya üzrə müştərilər üçün yüksək affinlik və spesifik antikorlar üçün skrininq etmək imkanı təklif edir. Ekspert tədqiqatçılar komandası, qabaqcıl texnologiya və avadanlıqlarla geniş çeşiddə xəstəliklə əlaqəli zülalları hədəf alan maya kitabxanaları qura bilərik. Zülal maya ekranı, kiçik molekullu maya ekranı, antikor maya ekranı və s. daxil olmaqla faq ekranı və maya ekranı texnologiyaları təmin edə bilərik.

Maya displey kitabxanalarımız böyük tutuma və yüksək müxtəlifliyə malikdir ki, bu da spesifik antikor ardıcıllıqlarının effektiv şəkildə yoxlanılması üçün yüksək təməl təmin edir. Ehtiyaclarınıza uyğun olaraq müxtəlif formalı antikor maya displey kitabxanaları (IgG, scFv, VHH, Fab antikor kitabxanaları), zülal kitabxanaları, peptid kitabxanaları, kDNT kitabxanaları və s. qura bilərik. Bundan əlavə, immun kitabxanaları, təbii kitabxanalar, sintetik kitabxanalar, yarı sintetik kitabxanalar və xəstəlik antikor kitabxanaları da daxil olmaqla müxtəlif xüsusiyyətlərə malik antikor kitabxanaları da inkişaf etdirə bilərik.

Maya Göstərmə Sisteminə Giriş

Maya səthi ekran texnologiyası, rekombinant zülalların mayanın səthində gen birləşməsi yolu ilə göstərilməsi üsuludur. Ən çox yayılmış maya ekran sistemi, əsasən hədəf zülalın hər iki tərəfindəki epitop etiketlərindən ibarət olan alfa lektin cütləşmə zülalının Aga2p alt vahidinin C-terminalına birləşdirilmiş hədəf zülalından istifadə edir: N-terminal 9-amin turşusu hemaqlütinin (HA) etiketi və C-terminal 10 amin turşusu c-myc etiketi. 69 amin turşusu Aga2p alt vahidi iki disulfid rabitəsi vasitəsilə 725 amin turşusu alfa lektin Aga1p alt vahidinə bağlanır və Aga1p β 1,6-qlükan kovalent rabitəsi vasitəsilə hüceyrə divarına bərkidilir. Buna görə də, hədəf zülal maya hüceyrələrinin səthində göstərilir və sonradan müvafiq ligand tərəfindən tanınır. Axın sitometriyası müayinəsi vasitəsilə funksional zülalları kitabxanalardan ayırın.

Şəkil 1: Maya səthinin göstərilməsi prinsipi. (Şəkil mənbəyi: Zülal Mühəndisliyi üçün Maya Səthi Ekranının Tətbiqləri.)

Maya Səthi Ekran Kitabxanasına Giriş

Maya displey çeşidlənməsi, əsasən hüceyrə səthi zülallarını hədəf alan antikor kitabxanalarını yoxlamaq üçün istifadə olunan maya səthi displeyinə əsaslanır. Maya hüceyrələri və digər hüceyrə səthləri arasında aşağı qeyri-spesifik bağlanma səbəbindən maya bioloji seçimi nadir klonları tapmaq üçün böyük bağlanma kitabxanalarını yoxlaya bilər.

Maya Səthi Ekran Kitabxanası Ekran Xidməti

Plazmidlər və becərilən maya hüceyrələri hazırlayın, hədəf zülalını kodlayan DNT sintez edin və onu induksiya edilə bilən promotorlar, siqnal peptidləri və səthi displey zülallarına (məsələn, Aga2p) birləşdirilmiş hədəf genləri ehtiva edən maya ifadə vektoruna klonlayın. Hədəf zülalını kodlayan gen maya hüceyrə divarı zülalını (adətən Aga2p) kodlayan genlə birləşdirilə bilər və birləşmiş gen elektroporasiya yolu ilə maya hüceyrələrinə çevrilə bilər. Transformasiyadan sonra, səthində antikor genlərini ifadə edən maya hüceyrələri antigenə xas skrininq testlərindən keçə bilər: maya kitabxanası hədəf antigenlə inkubasiya edilir və ona xüsusi olaraq bağlanan maya hüceyrələri seçilir. İstənilən xüsusiyyətlərə malik zülalları göstərən maya hüceyrələrini təcrid etmək üçün flüoresan aktivləşdirilmiş hüceyrə çeşidləməsindən (FACS) istifadə edərək, maya displey kitabxanası skrininqi maksimum kitabxana ölçüsü ~10 ^ 8-10 ^ 9 maya hüceyrəsi ilə aparıla bilər. Daha sonra müsbət klonlar əlavə analiz və ya sonrakı tətbiqlər üçün təcrid edilə bilər. Antikor kitabxanasından spesifik antikor klonları müəyyən edildikdən sonra, onlar daha da xarakterizə oluna, kütləvi şəkildə istehsal oluna və maya displeyinin skrininqi və antikor istehsalının bütün prosesini tamamlamaq üçün protein A/G affinlik xromatoqrafiyası kimi üsullardan istifadə etməklə təmizlənə bilər.

Maya Displey Kitabxanasının Skrininq Prosesi

Şəkil 2 Maya ekran kitabxanasının seçim prosesi

Maya Displey Kitabxanasının Ekran Xidməti İş Axını

Addımlar	Xidmət Məzmunu	Xronologiya
Antigen Hazırlığı	Antigen növü: Əgər müştəri antigenlər təmin edə bilirsə, növə uyğun olaraq müvafiq nümunələr çatdırılmalıdır: rekombinant zülallar üçün 85%-dən çox təmizlik tələbi ilə 3-3,5 mq, kiçik molekullar üçün 90%-dən çox təmizlik tələbi ilə konjuge edilməlidir, peptid sintezi üçün 90%-dən çox təmizlik tələbi ilə konjuge edilməlidir, viruslar kimi nümunə növləri inaktivləşdirilməli, parçalanmanın qarşısını almaq üçün RNT yoxlanılmalıdır və yuxarıdakı antigen növləri də sintez üçün fərdiləşdirilə bilər.	2-3 həftə
Heyvanların İmmuniteti	Heyvan immunizasiyalarının sayı 5-dir və serum titri testinə əsasən immunizasiyaların sayının artırılıb-artırılmayacağını müəyyən etmək lazımdır. Antigen immuniteti: zülal/virus antigeninin potensialı >105; Peptid/kiçik molekullu antigenin potensialı >10^4	5-6 həftə
Şablon kDNK Hazırlığı	Plazma PBMC-lərini ayırın, ümumi RNT-ni (RNT ekstraksiya dəsti) çıxarın və kDNT-yə çevirin.	1 gün
Kitabxana Tikintisi	Şablon kimi kitabxana kDNK-sından istifadə edərək, VHH geni iki dövrə PCR ilə gücləndirildi və VHH geninin birləşdirilməsi maya ekran vektoru quruldu. Antikor kitabxanası qurmaq üçün vektor elektroporasiya yolu ilə maya hüceyrələrinə çevrildi. Təsadüfi olaraq 48 klon seçin və PCR metodundan istifadə edərək müsbət nisbəti (>90%) müəyyən edin; Düzgün kitabxana daxiletmə nisbətini (>90%) və kitabxana müxtəlifliyini müəyyən etmək üçün kitabxana tutumunu (10^7-10^8), NGS ardıcıllığını hesablayın.	2 həftə
Kitabxana Sınaqları	Varsayılan olaraq üç skrininq mərhələsi: Flüoresan etiketli protein FACS skrininqi, ardınca üçüncü raundda NGS ardıcıllığı. Tək qram induksiya ifadəsi və ELISA aşkarlanması üçün müsbət klonlar seçildi. Bütün müsbət klonlar gen ardıcıllığı üçün seçildi və fərqli CDR bölgə ardıcıllığı seçildi.	2-3 həftə
Antikor Təsdiqi	Antikor ardıcıllıqları üçün müvafiq ifadə vektorlarının qurulması antikor ifadəsini, antikor təmizlənməsini, antikor affinliyini yoxlamaq üçün antikor antigeninin bağlanmasının ELISA və BLI validasiyasını və hüceyrə funksiyasını yoxlamaq üçün axın sitometriyasının blokadasını asanlaşdıra bilər.	1 həftə

Maya Səthi Ekran Kitabxanası Ekranı

Konformasiya baxımından selektiv nanocisimlərin sürətli kəşfi üçün maya səthi ekran platforması ədəbiyyatında müəlliflər maya səthi ekranına əsaslanan tam in vitro nanocisim kəşf platforması yaratmışlar. Əvvəlcə dəvə genlərindən başlayaraq sintetik nanocisim kitabxanası hazırlanmışdır. Şəkil D göstərir ki, nanocismin karboksil ucunda HA etiketi var və sonra nanocisim maya hüceyrə divarına kovalent şəkildə bərkidilir. Şəkil E nanocismin skrininq prosesini göstərir. Antigenə yaxın maya nanocisimləri təcrid olunmuş, gücləndirilmiş və FACS vasitəsilə antikorlar üçün dəfələrlə seçilmişdir. Müəlliflər bu platforma vasitəsilə iki fərqli insan GPCR-lərini hədəf alan konformasiya baxımından selektiv nanocisimlər aşkar etmişlər.