Тэхналогія фагавага дысплейвання заключаецца ва ўстаўцы чужароднага мэтавага гена ў спецыфічную пазіцыю фагавага капсіднага бялку і экспрэсіі чужароднага гена на паверхні фага без уплыву на нармальную функцыю фага. Пасля некалькіх этапаў скрынінга быў атрыманы мэтавы бялок з высокай спецыфічнасцю і высокай біялагічнай актыўнасцю.

З дапамогай гэтай тэхналогіі можна ствараць бібліятэкі антыцелаў высокай ёмістасці. Цыкл скрынінга кароткі, аперацыйны працэс просты, а спектр прымянення шырокі, што дазваляе ідэнтыфікаваць аптымальныя паслядоўнасці для мэтавых пептыдаў або бялкоў. У прымяненнях, звязаных з вірусамі, даследчыкі могуць выяўляць антыцелы, якія звязваюцца з крытычнымі віруснымі эпітопамі, шляхам скрынінга вялікіх бібліятэк антыцелаў. Гэты працэс можа перашкаджаць пранікненню, рэплікацыі або механізмам імуннага ўхілення вірусаў, тым самым ствараючы аснову для лячэння захворванняў.

Тэхналогія фагавага дысплейвання выкарыстоўваецца шырэй, чым гібрыдомная тэхналогія, якая абмяжоўваецца вытворчасцю невялікай колькасці антыцелаў супраць пэўных імунагенаў. У адрозненне ад гэтага, тэхналогія фагавага дысплейвання можа прадставіць цэлую бібліятэку антыцелаў, атрыманых з розных імунных відаў.

Тэхналогія фагавага дысплея мае шырокі спектр прымянення, у тым ліку скрынінг рэцэптараў патагенных мікраарганізмаў, вывучэнне ўзаемадзеяння бялкоў, адсочванне перадачы сігналаў паміж клеткамі, дыягностыку хвароб жывёл і распрацоўку вакцын, сярод іншых абласцей.

Тэхналогія фагавага дысплейвання прапануе шматлікія перавагі і можа быць ужыта ў розных галінах. Аднак асноўнай праблемай распрацоўкі рэкамбінантных антыцелаў з выкарыстаннем метаду фагавага дысплейвання з'яўляецца складанасць і кошт, звязаныя з гэтым працэсам. Гэты падыход патрабуе інтэграцыі метадаў малекулярнай біялогіі, уключаючы мутацыі, кланаванне і экспрэсію, разам з імуналагічнымі, біяхімічнымі і біяфізічнымі аналізамі для ідэнтыфікацыі і характарыстыкі патрэбных антыцелаў.

Прэзентацыя антыгена з'яўляецца вельмі важным звяном. Метады прэзентацыі антыгена ў асноўным ўключаюць прамую прэзентацыю пакрытага антыгена, ускосную прэзентацыю пакрытага антыгена, прэзентацыю антыгена праз скрынінг цэлых клетак, прэзентацыю антыгена праз ліпасомы, нанафасфаліпідныя дыскі і VLPs.

Метад прамога пакрыцця адносна просты, але канфармацыю антыгена лёгка змяніць, а аперацыя ўскоснага пакрыцця складаная, але яна можа падтрымліваць канфармацыю антыгена і паляпшаць эфектыўнасць прэзентацыі. Скрынінг клетак можа імітаваць рэальную сітуацыю in vivo, але існуе праблема неспецыфічнага звязвання. Нанафасфаліпідны дыск мае невялікі памер, высокую эфектыўнасць дастаўкі і добрую стабільнасць; VLP зліваюцца з антыгенам або абгортваюцца антыгенам, што мае высокую імунагеннасць і добрую бяспеку, і можа выклікаць моцны імунны адказ.

Калі канцэнтрацыя занадта нізкая, верагоднасць звязвання з фагам знізіцца, што прывядзе да зніжэння эфектыўнасці скрынінга. І наадварот, празмерна высокая канцэнтрацыя можа павялічыць верагоднасць неспецыфічнага звязвання, павысіць фонавы сігнал і перашкодзіць ідэнтыфікацыі станоўчых клонаў.

Каб пазбегнуць высокай тэмпературы, моцных кіслот і шчолачаў, можна выкарыстоўваць мяккі метад фіксацыі. Для памяншэння пашкоджання структуры антыгена выкарыстоўваліся метад непрамога пакрыцця і сістэма біятын-стрэптавідын. Калі антыген з'яўляецца мембранным бялком, яго можна размясціць на паверхні непашкоджаных клетак або выкарыстоўваць для імітацыі мембраннага асяроддзя, напрыклад, з дапамогай нанадыска, каб захаваць яго натуральную канфармацыю мембраннага бялку.

Акрамя такіх руцінных эксперыментаў, як ІФА, Вестэрн-блотынг (ВБ) і імунафлуарэсцэнцыя (ІФ), для маніторынгу працэсаў звязвання і дысацыяцыі антыцелаў і антыгенаў у рэжыме рэальнага часу могуць выкарыстоўвацца метады выяўлення з дапамогай павярхоўнага плазмоннага рэзанансу (СПР) і біяслаёвай інтэрфераметрыі (БЛІ), што дазваляе вызначаць параметры афіннасці і кінетыкі.

Фагавы дысплей можа быць выкарыстаны для стварэння высокаафінных моноклональных антыцелаў для шырокага спектру відаў, якія выпрацоўваюць антыцелы, у тым ліку, але не абмяжоўваючыся імі, людзей, мышэй, пацукоў, трусоў, курэй, вярблюдаў, альпак, кароў, сабак, авечак, малпаў і акул.

Тэхналогія стварэння бібліятэк мышэйных антыцелаў добра адпрацавана, эканамічна эфектыўная і мае кароткі эксперыментальны перыяд, што робіць яе прыдатнай для папярэдняга скрынінгу антыцелаў і фундаментальных даследаванняў. Трусіныя антыцелы праяўляюць моцную афіннасць і спецыфічнасць, з больш шырокім дыяпазонам распазнавання эпітопаў у параўнанні з мышэйнымі антыцеламі. Чалавечыя антыцелы можна атрымаць непасрэдна з бібліятэк чалавечых антыцелаў, тым самым пазбягаючы патэнцыйных імунных рэакцый, якія могуць узнікнуць пры ўвядзенні гетэралагічных антыцелаў у арганізм чалавека. Гэты падыход мае значную каштоўнасць у даследаваннях і распрацоўках лекаў, асабліва пры стварэнні тэрапеўтычных антыцелаў.

Імунагены жывёл звычайна падзяляюцца на бялковы антыген, поліпептыдны антыген, нуклеінава-кіслотны антыген і патаген-роднасны антыген, сярод якіх патаген-роднасны антыген уключае вірусны антыген (поўную вірусную часціцу, вірусны бялок, неструктурны вірусны бялок і г.д.), бактэрыяльны антыген (поўны бактэрыяльны экстракт, кампанент клеткавай сценкі, сакрэтаваны бялок, таксін і г.д.) і паразітарны антыген.

Карэкціруйце імунагены, замяняючы імунныя антыгены рэкамбінантнымі бялкамі і замяняючы пажаранебяспечныя вірусныя часціцы структурнымі бялкамі вірусаў. Карэкціруйце эксперыментальны дызайн і змяняйце імунную дазоўку.

Імунагеннасць можна павысіць шляхам злучэння антыгенаў з бялкамі-носьбітамі, такімі як бычыны сыроватачны альбумін. Акрамя таго, для падаўжэння часу знаходжання антыгенаў in vivo і стымуляцыі актывацыі і праліферацыі імунных клетак можна выкарыстоўваць імунныя ад'юванты, у тым ліку ад'ювант Фрэйнда і алюмініевы ад'ювант, тым самым паляпшаючы імунагеннасць.

Бібліятэка фагавых антыцелаў — гэта калекцыя разнастайных фагавых антыцелаў, створаных шляхам зборкі поўнага набору генаў варыябельнай вобласці антыцелаў у фагавыя вектары і экспрэсіі іх на паверхні фагаў. У выніку гэтага працэсу ўтвараецца бібліятэка фагавых антыцелаў.

Агульны працэс фагавага дысплейвання ўключае ў сябе некалькі ключавых этапаў: экстракцыю монануклеарных клетак перыферычнай крыві (PBMC) з імунізаваных жывёл, вылучэнне агульнай РНК і транскрыпцыю яе ў камплементарную ДНК (кДНК), ампліфікацыю мэтавага гена з дапамогай тэхналогіі палімеразнай ланцуговай рэакцыі (ПЛР), кланаванне мэтавага гена ў фагавы вектар і трансфармацыю вектара ў клетку-гаспадара для экспрэсіі. Гэты працэс прыводзіць да стварэння бібліятэкі фагавага дысплейвання, якая можа хутка ідэнтыфікаваць высокаафінныя антыцелы. Пасля гэтага гэтая бібліятэка можа служыць каштоўным рэсурсам для распрацоўкі вакцын, тэрапеўтычных прэпаратаў і дыягнастычных рэагентаў.

У залежнасці ад крыніцы бібліятэкі антыцелаў, бібліятэкі фагавых антыцелаў можна класіфікаваць на імунныя бібліятэкі фагавых антыцелаў і натыўныя бібліятэкі фагавых антыцелаў. Асноўнае адрозненне паміж гэтымі двума тыпамі заключаецца ў тым, ці былі жывёлы вакцынаваны. Акрамя таго, натыўныя бібліятэкі антыцелаў могуць быць атрыманы шляхам паўсінтэзу або сінтэзу.

Існуюць два асноўныя паказчыкі для ацэнкі якасці бібліятэкі антыцелаў: ёмістасць захоўвання і разнастайнасць. Вялікая ёмістасць захоўвання ў спалучэнні з высокай разнастайнасцю забяспечвае эфектыўны скрынінг антыцелаў з высокай афіннасцю і спецыфічнасцю.

У працэсе біялагічнай элюцыі дысплейная бібліятэка інкубуецца з фіксаванымі мішэнямі, а затым старанна прамываецца для выдалення нерэактыўных фагаў. Кан'югаты звычайна элюююцца з выкарыстаннем кіслотнага або высокасолевага раствора, а затым ампліфікуюцца ў адпаведных клетках-гаспадарах для ўзбагачэння. Пасля 3-5 раўндаў скрынінга атрымліваюць антыцелы з высокай афіннасцю.

Метады скрынінгу фагаў у першую чаргу ўключаюць цвёрдафазны панінг, скрынінг у вадкай фазе і скрынінг на аснове клетак. Выбар адпаведнага метаду скрынінгу павінен улічваць характарыстыкі мэтавых малекул, мэты працэсу скрынінгу і лабараторнае асяроддзе.

Пазітыўны скрынінг — гэта найбольш фундаментальны метад скрынінга фагавых антыцелаў, якія звязваюцца з мэтавымі бялкамі. Адмоўны скрынінг служыць для выключэння неспецыфічных антыцелаў. Падчас працэсу скрынінга фагавых антыцелаў неспецыфічныя антыцелы могуць быць выяўлены з-за перашкод ад меткі мэтавага антыгена, матэрыялаў або іншых антыгенаў са структурнымі падабенствамі з мэтавым антыгенам. У такіх выпадках адмоўны скрынінг можа павысіць эфектыўнасць працэсу скрынінга.

Метады праверкі антыцелаў звычайна ўключаюць ІФА, Вестэрн-блотынг (ВБ), праточную цытаметрыю, імунапрэцыпітацыю (ІП), імунафлуарэсцэнцыю (ІФ), імунагістахімію і розныя іншыя эксперыментальныя метады. Alpha Lifetech мае шырокі вопыт у выяўленні антыцелаў і мае прафесійную эксперыментальную каманду, што забяспечвае эфектыўнасць антыцелаў у наступных эксперыментах.