Служба распрацоўкі монакланальных антыцелаў

Кампанія «Альфа Лайфтэк»можа забяспечыць прагназаванне эпітопаў, сінтэз пептыдаў, экспрэсію бялкоў, выпрацоўку полікланальных або манаклональных антыцелаў, а таксама ачыстку антыцелаў з клетачнай культуры, асцытычнай вадкасці або цэльнай сыроваткі.

Кампанія «Альфа Лайфтэк»мае вопыт у прадастаўленні кліентам розных паслуг па стварэнні стабільных клетачных ліній, у тым ліку гібрыдомных клетак, клетачных ліній з рэдагаваннем геному, клетачных ліній з накдаўнам і клетачных ліній з падвышанай экспрэсіяй. Мы стараемся прапанаваць кожнаму кліенту перадавыя паслугі па стварэнні індывідуальных клетачных ліній, і нашы паслугі правераныя і надзейныя.

Стратэгія распрацоўкі антыцелаў

1. Распрацоўка і падрыхтоўка антыгенаў
Гэтыя антыгены могуць быць бялкамі, пептыдамі або іншымі малекуламі. Распрацоўка імунагенаў патрабуе комплекснага падыходу, які аб'ядноўвае веды аб структуры антыгена, імуналогіі і сістэмах дастаўкі. Alpha Lifetech валодае тэхналогіяй распрацоўкі антыгенаў, якая дазваляе распрацоўваць імунагены для кліентаў, якія маюць патрэбу.
«Альфа Лайфтэк» прапануе кліентам прадукты рэкамбінантных бялкоў на выбар. У нас ёсць розныя сістэмы экспрэсіі бялкоў, такія як сістэма экспрэсіі E. coli, сістэма экспрэсіі дрожджаў, сістэма экспрэсіі бакулавірусаў і насякомых, сістэма экспрэсіі млекакормячых і г.д., для атрымання рэкамбінантных бялкоў, неабходных для даследаванняў.

2. Імунізацыя жывёл
Alpha Lifetech можа прадастаўляць кліентам імунагены, і вам даступныя на выбар імунныя жывёлы, такія як мышы, трусы, авечкі, альпакі, марскія свінкі, хамякі і г.д.

3. Метады атрымання манакланальных антыцелаў

●Вытворчасць мабластэмбінаў па тэхналогіі гібрыдом
Гібрыдома — гэта гібрыдная клетка, якая атрымліваецца шляхам зліцця двух тыпаў клетак, а менавіта лініі клетак міеломы мышэй і плазматычных клетак (лімфацытаў B), прычым гетэразіготная клетка можа выпрацоўваць антыцелы супраць антыгена, які цікавіць, in vitro. Атрыманне лініі клетак гібрыдомы складаецца з трох частак: распрацоўка антыгена (гаптэны, малыя малекулы і пептыды), імунізацыя жывёл, зліццё клетак і скрынінг станоўчых клонаў. Выкарыстоўваючы унікальныя метадалогіі імунізацыі, мы дасягаем выключна высокай эфектыўнасці зліцця клетак (1-10 гібрыдом на тысячу B-клетак) і высокіх тытраў антыцелаў, што максімізуе наш узровень поспеху ў наступных аналітычных тэстах, якія ўключаюць біяхімічны скрынінг, клетачныя аналізы in vitro і даследаванні на жывёлах.

●Вытворчасць мабластных антыцелаў з дапамогай тэхналогіі фагавага дысплея
Фагавы дысплей прапануе яшчэ адзін метад атрымання моноклональных антыцелаў. В-лімфацыты вылучаюць з крыві жывёл, і іх мРНК здабываюць. З дапамогай ПЛР гэтая мРНК пераўтвараецца ў кДНК, якая ампліфікуе ўсе сегменты VH і VL. Затым гэтыя сегменты клануюцца ў вектар, звычайна ў выглядзе адналанцуговых варыябельных фрагментаў (scFv), разам з бялком PIII бактэрыяфага. Пасля гэтага гэтая канструкцыя выкарыстоўваецца для заражэння E. coli, што прыводзіць да стварэння бібліятэкі, якая змяшчае прыблізна 10^10 клетак, шляхам інакуляцыі фагам-хелперам. Затым E. coli здольная вылучаць бактэрыяфаг, які змяшчае сегменты VH і VL як частку сваёй абалонкі. Пасля гэтага можна выбраць спецыфічныя сегменты VH і VL, накіраваныя на антыген, які цікавіць, і выкарыстоўваць іх для рэінакуляцыі E. coli бактэрыяфагам. Затым клеткі, якія змяшчаюць плазміду, вылучаюць і секвенуюць.

4. Скрынінг зліцця

●Зліццё і адбор клетак
Атрыманыя В-клеткі затым зліваюцца з міеломнымі клеткамі — ракавымі клеткамі, якія могуць бясконца размнажацца ў культуры. Зліццё звычайна дасягаецца з дапамогай такога метаду, як зліццё з поліэтыленгліколем (ПЭГ).
Пасля зліцця гібрыдомныя клеткі культывуюцца ў селектыўным асяроддзі, якое дазваляе выжыць толькі гібрыдомам. Асяроддзе звычайна змяшчае амінаптэрын, які прадухіляе рост незліўшыхся клетак міеломы.

●Скрынінг і кланіраванне
Атрыманыя гібрыдомныя клеткі правяраюцца на выпрацоўку антыцелаў, спецыфічных да мэтавага антыгена. Звычайна гэта робіцца з дапамогай такіх метадаў, як імунаферментны аналіз (ІФА), вестэрн-блот, імунапрэцыпітацыя і праточная цытаметрыя.

Пасля таго, як гібрыдомныя клеткі, якія выпрацоўваюць антыцела, ідэнтыфікуюцца, іх клануюць для стварэння папуляцыі ідэнтычных клетак. Гэта гарантуе, што антыцела, якое выпрацоўваецца кожнай гібрыдомнай клеткай, ідэнтычнае.

5. Праверка функцыянальнасці антыцелаў
Alpha Lifetech праводзіць функцыянальную праверку антыцелаў, такую ​​як вестэрн-блотынг, імунагістахімія або функцыянальныя аналізы, для характарыстыкі моноклональных антыцелаў і пацверджання спецыфічнасці, афіннасці і функцыянальнасці антыцелаў.

6. Аптымізацыя антыцелаў
Ачыстка антыцелаў з культуральнага супернатанту з выкарыстаннем такіх метадаў, як афінная храматаграфія бялку А або бялку G, а таксама метадаў мадыфікацыі антыцелаў, якія могуць палепшыць афіннасць антыцелаў, кампанія Alpha Lifetech.

7. Выпрацоўка антыцелаў
Alpha Lifetech можа ацаніць кандыдатныя антыцелы для высокапрадукцыйнага скрынінгу і маштабнай вытворчасці.