Услуга за анализ на характеристиката на аптамерите

Alpha Lifetech предоставя услуги, свързани с адаптери, от много години, предлагайки цялостни услуги за разработване и анализ на адаптери.

СВЪРЖЕТЕ СЕ С НАС

Услуга за анализ на характеристиката на аптамерите

Alpha Lifetech предоставя услуги, свързани с аптамери, от много години и понастоящем може да осигури цялостни схеми за разработване на аптамери, като например синтез на аптамери, SELEX скрининг, високопроизводително секвениране и оптимизация и характеризиране на аптамери. Въз основа на предимствата на SELEX метода за скрининг на аптамери, Alpha Lifetech разшири още методи за скрининг на аптамери.

Въведение в анализа на характеризирането на аптамерите

Проверка на афинитета

Оптимизираният афинитет на аптамера беше проверен чрез съответните техники на анализа за свързване на аптамера. Примерите включват изотермична титрационна калориметрия (ITC), флоуцитометрия (FCM) и повърхностен плазмонен резонанс (SPR), микрофлуидика и др. Афинитетът на аптамера обикновено се изразява чрез дисоциационна константа (KD), физична величина, използвана за количествено определяне на степента на молекулярна дисоциация в обратима реакция. Колкото по-малка е стойността на KD, толкова по-стабилен е комплексът, т.е. толкова по-силен е афинитетът; обратно, колкото по-голяма е стойността на KD, толкова по-нестабилен е комплексът и толкова по-слаб е афинитетът. Тази стъпка е ключова за идентифициране на характеристиките на аптамера, осигурявайки афинитетното узряване на аптамера и възможността му да се свързва с целевата молекула с висок афинитет и селективност в практически приложения.

Фиг.1 Процес на афинитетно съзряване на аптамерите. Източник на информация:Кингхорн, Албърта, Фрейзър, Луизиана, 2017.

Проверка на функцията

В допълнение към проверката на афинитета, е необходимо да се провери и функцията на аптамера. Това включва проверка на стабилността, специфичността и взаимодействията на аптамера с други молекули в определена среда. Резултатите от функционалната проверка ще повлияят пряко на стойността на аптамерите в научните изследвания и промишлените приложения.

Специфична проверка

Състезателен експеримент: Способността на аптамера да се свързва със специфична цел се оценява в присъствието на други подобни цели. Ако аптамерът може специфично да се свърже с целевата молекула без интерференция от други молекули, това показва, че той има висока специфичност.

Експеримент с кръстосана реакция: Аптамерът се свързва с поредица от свързани или несвързани цели, за да се види дали се свързва само с определена цел, така че да се провери неговата специфичност.

Проверка на стабилността

Експеримент с разграждане на нуклеази: Аптамерите бяха изложени на различни концентрации на нуклеази и беше наблюдавано тяхното разграждане. Чрез сравняване на степента на разграждане в различни времеви точки може да се оцени способността на аптамера за разграждане на антинуклеазни вещества.

Експеримент за температурна и времева стабилност: Аптамерът е поставен при различни температурни и времеви условия, за да се наблюдава неговата структурна и функционална стабилност. Това помага да се определят оптимални условия за съхранение и употреба на аптамерите.

Идентифициране на биологична активност

Подходящият метод обикновено се избира според специфичната цел на приложение на аптамера на нуклеиновата киселина.

(1) Молекулярно тестване: Използване на техники на молекулярна биология, като гел електрофореза, Western blot и др., за откриване на комплексите, образувани след свързването на аптамера с целевата молекула, или за откриване на промените в нивото на експресия на целевата молекула, причинени от аптамера.

(2) Тестване на клетъчно ниво: Чрез използване на технология за клетъчно култивиране, аптамерите се инкубират с целеви клетки, за да се наблюдават биологични промени като клетъчна морфология, пролиферация и апоптоза, и да се оцени биологичната активност на аптамерите.

(3) Тестване върху животински модели: В подходящи животински модели, аптамери на нуклеинови киселини се прилагат чрез инжектиране или лекарствено приложение, като се наблюдават физиологични показатели и патологични промени при животните, за да се оцени биологичната активност и безопасността на аптамерите in vivo.