Моноклоналните антитела (mAb) са пионер в областта на лекарствата с антитела, като над 100 са одобрени за лечение на рак, инфекциозни заболявания, собствен пазар за разработване на лекарства и показват своята уникална терапевтична стойност. Технологията за антитела срещу единични В-клетки, като ново поколение технология за разработване на антитела, може ефективно и бързо да изолира антитела от единични В-клетки, което е пробив в технологията за производство на антитела след хибридомния и фаговия дисплей. Технологията за сортиране на единични В-клетки може да се използва за генериране на антитела срещу множество видове, като зайци, мишки, камили, овце и пилета. Технологията за сортиране на единични В-клетки има изключителни предимства като висока специфичност, висока активност и висок афинитет. Базирана на платформата за сортиране на единични В-клетки, Alpha Lifetech има предимства по отношение на времето за скрининг и получаването на висококачествени антитела. Тя може да осигури проектиране, синтез и модификация на антигени, имунитет при животни, скрининг за обогатяване на единични В-клетки, секвениране на единични клетки, високопроизводителен скрининг, експресия и пречистване, както и технически услуги на едно гише, като функционална проверка, за да отговори на разнообразните нужди на клиентите.

Изберете подходящ антиген за експерименталните животни (като мишки, зайци и др.) за имунна стимулация, така че те да могат да произведат специфични антитела срещу антигена.

Имунизацията на животните е началният етап от генерирането на антитела. Имунизацията на животните е използването на механизма на хуморалния имунен отговор на самия организъм. Чрез непрекъснато стимулиране на антигени, животните произвеждат силен имунен отговор и след това отделят специфични антитела срещу определени антигени.

В-клетките са изолирани от периферна кръв, далак или лимфни възли на имунизирани животни. Тези В-клетки са имунологично стимулирани да произвеждат антитела срещу специфични антигени.

Чрез физични или химични методи (като центрофугиране с градиент на плътност, магнитно разделяне с перли и др.) се постига обогатяване на В-клетки, отстраняване на примеси от клетките, подобряване на чистотата на В-клетките и ефективността на последващото им разделяне.

Флуоресцентно-активирано клетъчно сортиране (FACS), магнитно клетъчно разделяне (MACS), микрофлуиден клетъчен сортировчик (MCS) или други високопроизводителни скринингови техники, комбинирани с антиген-специфично маркиране, могат да се използват за скрининг на отделни В-клетки от обогатени В-клетки, за да се получат насочени антитела.

Когато единична В-клетка се изолира от смесена В-клетъчна популация, нейните гени за антитела трябва да бъдат секвенирани чрез технология за секвениране на единични клетки и анализирани, за да се получи информация за ДНК последователността на вариабилния регион на тежката верига (VH) и вариабилния регион на леката верига (VL). Технологията за секвениране на единични клетки включва основно три стъпки: изолиране на единични клетки, амплификация на вътреклетъчна нуклеинова киселина и секвениращ анализ. Принципът на секвенирането на единични клетки е да се амплифицира следа от целия геном на изолирани единични клетки, за да се получи пълен геном или транскриптом с високо покритие за високопроизводително секвениране.

Чрез високопроизводителен скрининг, едновременно могат да се получат генни последователности на антитела от хиляди В-клетки, което значително ускорява откриването на антитела. Тази информация за последователностите може да се използва допълнително за изграждане и скрининг на библиотеки с антитела.

Фиг. 2 Схематична диаграма на улавяне на единични В-клетки, изграждане на библиотека, високопроизводителен скрининг и секвениране.(Източник: Масово паралелно секвениране на В-клетъчни рецептори на единични клетки позволява бързо откриване на различни антиген-реактивни антитела.)

(1) Рекомбинантен протеин: ≥2,5 mg, чистота на протеина >85%, молекулно тегло на протеина по-голямо от 10 kDa, концентрация на разтворим протеин между 0,5 и 5 mg/mL. Ако се изисква афинитетно пречистване на антигена, са необходими допълнителни 10 mg рекомбинантен протеин.

(2) Полипептиди и малки молекули: Гол пептид ≥10 mg, чистота на пептида >90%, не по-малко от 10 AA, свързване с KLH/BSA/OVA или други протеини-носители; Малките молекули изискват предварителна структурна оценка.