Въведение в библиотеките със синтезирани антитела

Библиотека със синтезирани антитела, известна още като библиотека De novo, е синтетичен метод, който използва техники като синтез на ДНК или фагов дисплей за проектиране и синтезиране на пълни променливи региони на антитела, включително рамкови региони и CDR, без да се разчита на библиотеки с наивни антитела.

Библиотеката с полусинтетични антитела се създава чрез комбиниране на библиотеки с естествени антитела със синтетично разнообразие. Обикновено включва синтезиране на ДНК олигонуклеотиди за получаване на набор от различни комплементарни определящи региони (CDRs), които след това се комбинират с постоянна рамка на антитяло, получена от естествени източници като човешки или животински В клетки. Синтезираният CDR въвежда разнообразие в библиотеката, което води до антитела, насочени към широк диапазон от епитопи. Библиотеката с полусинтетични антитела осигурява компромис между естественото разнообразие на имунната система и контролираното разнообразие, постигнато чрез синтетични методи.

Разликата между наивни и синтетични библиотеки с антитела зависи от източника на имуноглобулиновите гени. Междувременно разликата между полусинтезирана и синтезирана библиотека с антитела се състои в това, че първата се състои от част от сегменти на наивно антитяло, като лека верига или тежка верига, и само един от тях се синтезира in vitro; докато синтезираният е изцяло получен от изкуствен синтез чрез PCR in vitro.

Alpha Lifetech може да осигури

Alpha Lifetech Inc.може да предложи библиотека с полусинтезирани/синтезирани антитела от животни и хора, базирана на нашата професионална платформа за откриване на антитела. С дългогодишен опит в генетичната модификация и изграждането на библиотеки могат да бъдат конструирани синтезирани библиотеки, които са в състояние да произвеждат синтетични антитела с афинитет и специфичност над капацитета на естествените антитела.Alpha Lifetech'sекспертите са горди да обявят, че можем да гарантираме висок процент на успеваемост при изграждането на библиотека с антитела, съдържаща 10^8 – 10^10 независими клонинга.

Alpha Lifetech Inc.с гордост предлага цялостни услуги за изграждане на библиотека с антитела, за да отговори на разнообразните нужди на глобалните изследователи, включително scFv, Fab, VHH антитела и персонализирани библиотеки. Нашата цел е да разберем и отговорим на изискванията на различни клиенти и да помогнем при всякакви предстоящи и възникващи проблеми в изследователската работа.

Процес на услуга за изграждане на библиотеки със синтезирани антитела

Дизайн
Фазата на проектиране включва избор на рамки на антитела и региони, определящи комплементарността (CDRs) въз основа на съществуващи последователности на антитела или структурни данни. Синтетичните CDR антитела могат също да бъдат проектирани да въведат специфични функционалности или да подобрят свойствата на свързване.

Синтез
Синтетичната ДНК, кодираща проектираните последователности на антитела, включително рамкови региони и CDRs, се синтезира с помощта на химични или ензимни методи.

Сглобяване
Синтезираните ДНК фрагменти се сглобяват в експресионни вектори на антитела, като се използват техники като PCR, лигиране или сглобяване на Gibson. След това тези вектори могат да бъдат въведени в експресионни системи като бактериални, дрождени или клетки на бозайник за производство на антитяло.

Отсяване и селекция
Конструираните библиотеки с антитела се скринират и се избират за антитела с желани свойства, като се използват високопроизводителни методи за скрининг. Това може да включва техники като фагово показване, показване на дрожди или показване на рибозоми, в зависимост от формата и приложението на библиотеката.

Услуга за изграждане на библиотеки със синтезирани антитела

Alpha Lifetech Inc.предоставя на клиентите дизайн на едно гише и синтезирана услуга на библиотеки с антитела чрез лигиране на репертоарите на V-ген на тежка и лека верига във фагов вектор, използвайки системата за специфична за сайта Cre-lox рекомбинация за създаване на репертоар от Fabs, показани на фаг, включващ 6,5 × 10^10 клонинги. Библиотеката дава Abs срещу множество антигени, някои с наномоларен афинитет. Генерирането на библиотека с човешки антитела се основава на технологията за показване на фаг M13 (показана на фигурата по-долу).