Въведение в библиотеките от синтезирани антитела

Синтезираната библиотека от антитела, известна още като De novo библиотека, е синтетичен метод, който използва техники като ДНК синтез или фагов дисплей за проектиране и синтезиране на пълни вариабилни региони на антитела, включително рамкови региони и CDR, без да се разчита на наивни библиотеки от антитела.

Библиотеката от полусинтетични антитела се създава чрез комбиниране на естествено срещащи се библиотеки от антитела със синтетично разнообразие. Това обикновено включва синтезиране на ДНК олигонуклеотиди, за да се получи набор от различни комплементарно определящи региони (CDR), които след това се комбинират с постоянна рамка на антитела, получена от естествени източници, като човешки или животински B-клетки. Синтезираният CDR въвежда разнообразие в библиотеката, което води до антитела, насочени към широк спектър от епитопи. Библиотеката от полусинтетични антитела осигурява компромис между естественото разнообразие на имунната система и контролираното разнообразие, постигнато чрез синтетични методи.

Разграничението между наивни и синтетични библиотеки с антитела зависи от източника на имуноглобулинови гени. Разликата между полусинтезирана и синтезирана библиотека с антитела се състои в това, че първата се състои от част от сегменти на наивни антитела, като лека или тежка верига, и само един от тях се синтезира in vitro; докато синтезираната е изцяло получена от изкуствен синтез чрез PCR in vitro.

Алфа Лайфтех може да осигури

Алфа Лайфтех Инк.Можем да предложим библиотека от полусинтезирани/синтезирани антитела от животни и хора, базирана на нашата професионална платформа за откриване на антитела. С дългогодишен опит в генетичната модификация и изграждането на библиотеки, можем да изградим синтезирани библиотеки, способни да произвеждат синтетични антитела с афинитет и специфичност, надхвърлящи капацитета на естествените антитела.Алфа ЛайфтехЕкспертите с гордост обявяват, че можем да гарантираме висок процент на успех при изграждането на библиотека от антитела, съдържаща 10^8 – 10^10 независими клона.

Алфа Лайфтех Инк.с гордост предлага цялостни услуги за изграждане на библиотеки с антитела, за да отговори на разнообразните нужди на изследователите по целия свят, включително scFv, Fab, VHH антитела и персонализирани библиотеки. Нашата цел е да разберем и отговорим на изискванията на различните клиенти и да съдействаме при всякакви предстоящи и нововъзникващи проблеми в изследователската работа.

Процес на изграждане на библиотеки със синтезирани антитела

Дизайн
Фазата на проектиране включва избор на рамки на антитела и области, определящи комплементарността (CDR), въз основа на съществуващи последователности на антитела или структурни данни. Синтетични CDR антитела могат също да бъдат проектирани да въведат специфични функционалности или да подобрят свързващите свойства.

Синтез
Синтетичната ДНК, кодираща проектираните антителни последователности, включително както рамковите региони, така и CDR, се синтезира с помощта на химични или ензимни методи.

събрание
Синтезираните ДНК фрагменти се сглобяват в експресионни вектори за антитела, използвайки техники като PCR, лигиране или сглобяване по Гибсън. След това тези вектори могат да бъдат въведени в експресионни системи като бактериални, дрождеви или бозайникови клетки за производство на антитела.

Скрининг и подбор
Конструираните библиотеки с антитела се скринират и селектират за антитела с желани свойства, използвайки високопроизводителни скринингови методи. Това може да включва техники като фагов дисплей, дрождев дисплей или рибозомен дисплей, в зависимост от формата на библиотеката и приложението ѝ.

Услуга за изграждане на библиотеки със синтезирани антитела

Алфа Лайфтех Инк.предоставя на клиентите цялостно проектиране и синтезирано обслужване на библиотеки с антитела чрез лигиране на репертоари от V-гени на тежката и леката верига във фагов вектор, използвайки Cre-lox система за специфична за сайта рекомбинация, за да създаде репертоар от Fab, показани върху фаг, състоящ се от 6,5 × 10^10 клона. Библиотеката е довела до антитела срещу множество антигени, някои с наномоларен афинитет. Генерирането на библиотеката с човешки антитела се основава на технологията за фагов дисплей M13 (показана на фигурата по-долу).