Razvojna platforma Aptamer

Aptameri su jednolančani oligonukleotidi (DNK, RNA ili XNA) sa svojstvom visokog afiniteta i visoke specifičnosti koji se specifično vezuju za ciljne molekule poput antitijela, a široko se koriste za razvoj biosenzora, dijagnostike i terapije.

Platforma aptamera koju pruža Alpha Lifetech uključuje dvije kategorije: platformu za sintezu aptamera, koja uglavnom uključuje SELEX uslugu sinteze aptamera biblioteke i razvojnu uslugu aptamera (DNK, RNA ili XNA), i platformu za skrining aptamera uključujući usluge skrininga zasnovane na SELEX tehnologiji za proteine, peptide, ćelije, male molekule, ione metala i druge usluge optimizacije ciljnih aptamera kao i identifikaciju aptamera.

Aptamer Synthesis Platform

SELEX aptamer usluga sinteze biblioteke

Usluga sinteze biblioteke SELEX aptamera uglavnom uključuje konstruisanje biblioteke koja sadrži veliki broj nasumičnih jednolančanih oligonukleotidnih sekvenci in vitro hemijskom sintezom prema ciljnim molekulima. Konstrukcija biblioteke je početna tačka SELEX tehnologije, koja obezbeđuje obilje sekvenci kandidata za kasniji proces skrininga konstruisanjem ogromnih nasumičnih biblioteka i povećava mogućnost skrininga aptamera visokog afiniteta.

Sinteza biblioteke uglavnom je podijeljena u sljedeće korake:

Koraci	Detalji o tehnologiji
Identifikujte ciljne molekule	Identifikujte ciljne molekule koje treba pregledati na aptamere, a to mogu biti proteini, nukleinske kiseline, male molekule, ioni metala, itd.
Dizajn slučajnih sekvenci	Nasumična dužina sekvence, sastav baze i drugi parametri dizajnirani su prema karakteristikama ciljnih molekula i zahtjevima skrininga. Tipično, slučajni nizovi su dužine između desetina i stotina baza.
Sinteza fiksnih sekvenci	Dizajnirani su i sintetizirani oligonukleotidni fragmenti sa fiksnim sekvencama (kao što su sekvence PCR prajmera) na oba kraja, koji će se koristiti u naknadnom procesu amplifikacije i skrininga.

Sintetizovanu biblioteku još treba dalje obraditi radi kontrole kvaliteta. Koncentracija biblioteke je određena kako bi se osigurala njena primenljivost u naknadnom procesu skrininga. Raznovrsnost i tačnost nasumičnih sekvenci u biblioteci verifikovane su sekvenciranjem i drugim metodama kako bi se osiguralo da kvalitet biblioteke ispunjava zahteve skrininga.

Kroz gore navedene korake, može se sintetizirati visokokvalitetna i vrlo raznolika biblioteka SELEX aptamera, koja može pružiti obilje sekvenci kandidata za kasniji proces skrininga.

Usluge razvoja aptamera (DNK, RNA ili XNA)

Aptameri se obično odnose na aptamere nukleinske kiseline. Aptameri nukleinske kiseline uključuju DNK aptamere, RNK aptamere i XNA aptamere koji su hemijski modifikovani aptameri nukleinskih kiselina. SELEX tehnika se široko koristi za razvoj aptamera. Osnovni tok rada usluga razvoja aptamera uključuje izgradnju biblioteke, vezivanje cilja, izolaciju i pročišćavanje, amplifikaciju, višestruke runde skrininga i identifikaciju sekvence. Dugi niz godina fokusirani smo na izgradnju biblioteka i bogato iskustvo u razvoju aptamera. Posvećeni smo pružanju boljih usluga klijentima.

SELEX tehnološki proces

SELEX proces se sastoji od više rundi, od kojih se svaka sastoji od sljedećih ključnih koraka:

Library and Target Binding

Konstruisana biblioteka nukleinskih kiselina se meša sa specifičnim ciljnim molekulima (kao što su proteini, jedinjenja malih molekula, itd.), tako da sekvence nukleinskih kiselina u biblioteci imaju priliku da se vežu za ciljne molekule.

Izolacija nevezanih molekula

Sekvence nukleinskih kiselina koje nisu vezane za ciljni molekul se odvajaju od smjese specifičnim metodama kao što su afinitetna hromatografija, magnetno odvajanje zrna, itd.

Amplifikacija vezujućih molekula

Sekvenca nukleinske kiseline vezana za ciljni molekul se pojačava, obično koristeći tehnologiju lančane reakcije polimeraze (PCR). Za narednu fazu skrininga, pojačane sekvence će se koristiti kao početna biblioteka.

Slika 1: SELEX proces skrininga

Aptamer Screening Platform

Aptamer usluga skrininga

Alpha Lifetech nudi širok spektar specijaliziranih usluga skrininga aptamera primjenom različitih SELEX metodologija za različite tipove vaših molekula:

Target Types	Technical Details
Protein Aptamer Screening by SELEX	Glavna svrha skrininga proteinskih aptamera je skrining aptamera koji se mogu specifično vezati za ciljane proteinske molekule. Ovi aptameri su jednostavniji za sintetizaciju, stabilniji su i manje podložni faktorima okoline.
Peptide Aptamer Screening by SELEX	Peptidni aptameri su klasa kratkih peptidnih sekvenci sa visokom specifičnošću i afinitetom, koji se mogu specifično vezati za ciljne supstance i pokazati širok spektar potencijala primene u biomedicinskom polju. Kroz specifičan proces skrininga, peptidni aptameri koji se mogu specifično vezati za ciljne molekule su skrinirani iz velikog broja nasumičnih biblioteka peptidnih sekvenci.
Aptamer skrining specifičan za ćelije (Cell-SELEX)	Ciljane ćelije ili specifični molekuli na površini ćelije pripremaju se kao mete. Mete mogu biti cijele ćelije, receptori na ćelijskoj membrani, proteini ili drugi mali molekuli.
Skrining malih molekula aptamera od strane Capture SELEX	Capture SELEX je in vitro tehnika skrininga za skrining malih molekularnih aptamera, što je varijanta SELEX-a. Capture SELEX je posebno pogodan za skrining aptamera malih molekulskih meta, koje obično imaju manje funkcionalnih grupa i koje je teško imobilizirati direktno na nosače čvrste faze.
SELEX usluge koje se temelje na životinjama uživo	Usluga skrininga zasnovana na živim životinjama je eksperimentalna tehnika koja se široko koristi u oblastima bionauke, medicine i biotehnologije, koja koristi žive životinje kao eksperimentalne modele za skrining i procjenu specifičnih molekula, lijeka, terapeutika ili bioloških procesa. Usluge su dizajnirane da simuliraju fiziološko okruženje u ljudskom tijelu kako bi se preciznije predvidjeli i ocijenili efikasnost i sigurnost eksperimentalnih rezultata u ljudskom tijelu.

Aptamer usluga optimizacije

Hidrofilnost, veliki gubitak afiniteta tokom proizvodnje i brzo izlučivanje aptamera ograničavaju njihovu primenu. Trenutno su istražene različite metode optimizacije za poboljšanje performansi aptamera.

Takođe imamo razne načine za optimizaciju aptamera koji se sastoje od skraćenja, modifikacija, konjugacije na odgovarajuću grupu (tiol, karboksi, amin, fluorofor, itd.).

Usluga analize karakterizacije aptamera

Usluga analize karakterizacije aptamera odnosi se na profesionalnu uslugu razlučivanja strukture evaluacije performansi i funkcionalne verifikacije dobijenog aptamera kako bi se osiguralo da aptamer ispunjava specifične zahtjeve sposobnosti vezivanja, stabilnosti i specifičnosti. To uglavnom uključuje analizu afiniteta i specifičnosti, procjenu stabilnosti i verifikaciju biološke funkcije.