Platforma za razvoj Aptamera

Aptameri su jednolančani oligonukleotidi (DNK, RNK ili XNA) sa svojstvom visokog afiniteta i visoke specifičnosti koji se specifično vežu za ciljne molekule poput antitijela, te se široko koriste za razvoj biosenzora, dijagnostiku i terapiju.

Platforma za aptamere koju pruža Alpha Lifetech uključuje dvije kategorije: platformu za sintezu aptamera, koja uglavnom uključuje uslugu sinteze SELEX biblioteke aptamera i uslugu razvoja aptamera (DNK, RNA ili XNA), te platformu za skrining aptamera koja uključuje usluge skrininga zasnovane na SELEX tehnologiji za proteine, peptide, ćelije, male molekule, metalne ione i druge ciljne molekule, kao i usluge optimizacije i identifikacije aptamera nizvodno.

Platforma za sintezu aptamera

Servis sinteze biblioteke SELEX aptamera

Usluga sinteze SELEX biblioteke aptamera uglavnom uključuje konstruiranje biblioteke koja sadrži veliki broj nasumičnih jednolančanih oligonukleotidnih sekvenci putem in vitro hemijske sinteze u skladu s ciljnim molekulama. Konstrukcija biblioteke je početna tačka SELEX tehnologije, koja pruža obilje kandidatskih sekvenci za naknadni proces skrininga konstruiranjem ogromnih nasumičnih biblioteka i povećava mogućnost skrininga aptamera visokog afiniteta.

Sinteza biblioteke je uglavnom podijeljena na sljedeće korake:

Koraci	Detalji o tehnologiji
Identifikujte ciljne molekule	Identifikujte ciljne molekule koje je potrebno pregledati na aptamere, a to mogu biti proteini, nukleinske kiseline, male molekule, metalni ioni itd.
Dizajn slučajnog niza	Dužina slučajne sekvence, sastav baza i drugi parametri su dizajnirani prema karakteristikama ciljnih molekula i zahtjevima skrininga. Tipično, slučajne sekvence su dugačke između desetina i stotina baza.
Sinteza fiksnih sekvenci	Oligonukleotidni fragmenti s fiksnim sekvencama (kao što su PCR primer sekvence) na oba kraja su dizajnirani i sintetizirani, a bit će korišteni u kasnijem procesu amplifikacije i skrininga.

Sintetizirana biblioteka i dalje treba biti dalje obrađena radi kontrole kvalitete. Koncentracija biblioteke određena je kako bi se osigurala njena primjenjivost u kasnijem procesu probira. Raznolikost i tačnost nasumičnih sekvenci u biblioteci provjerene su sekvenciranjem i drugim metodama kako bi se osiguralo da kvalitet biblioteke ispunjava zahtjeve probira.

Kroz gore navedene korake, može se sintetizirati visokokvalitetna i vrlo raznolika SELEX aptamerna biblioteka, koja može pružiti obilje kandidatskih sekvenci za naknadni proces skrininga.

Usluge razvoja aptamera (DNK, RNK ili XNA)

Aptameri se obično odnose na nukleinsko-kiselinske aptamere. Nukleinsko-kiselinski aptameri uključuju DNA aptamere, RNA aptamere i XNA aptamere, koji su hemijski modificirani nukleinsko-kiselinski aptameri. SELEX tehnika se široko koristi za razvoj aptamera. Osnovni tijek rada usluga razvoja aptamera uključuje konstrukciju biblioteke, vezivanje za cilj, izolaciju i pročišćavanje, amplifikaciju, višestruke runde skrininga i identifikaciju sekvenci. Dugi niz godina fokusirali smo se na konstrukciju biblioteke i imamo bogato iskustvo u razvoju aptamera. Posvećeni smo pružanju boljih usluga kupcima.

SELEX tehnološki proces

SELEX proces se sastoji od više rundi, od kojih se svaka sastoji od sljedećih ključnih koraka:

Vezivanje biblioteke i cilja

Konstruisana biblioteka nukleinskih kiselina se miješa sa specifičnim ciljnim molekulama (kao što su proteini, jedinjenja malih molekula itd.), tako da sekvence nukleinskih kiselina u biblioteci imaju priliku da se vežu za ciljne molekule.

Izolacija nevezanih molekula

Nukleinske kiselinske sekvence koje nisu vezane za ciljni molekul odvajaju se iz smjese specifičnim metodama kao što su afinitetna hromatografija, magnetska separacija kuglicama itd.

Amplifikacija vezujućih molekula

Sekvenca nukleinske kiseline vezana za ciljni molekul se amplificira, obično korištenjem tehnologije lančane reakcije polimeraze (PCR). Za narednu fazu skrininga, amplificirane sekvence će se koristiti kao početna biblioteka.

Slika 1: SELEX proces skrininga

Platforma za skrining aptamera

Usluga skrininga aptamera

Alpha Lifetech nudi širok spektar specijaliziranih usluga skrininga aptamera primjenjujući različite SELEX metodologije za različite tipove vaših molekula:

Vrste ciljeva	Tehnički detalji
Probir proteinskih aptamera pomoću SELEX-a	Glavna svrha skrininga proteinskih aptamera je skrining aptamera koji se mogu specifično vezati za ciljne proteinske molekule. Ovi aptameri se jednostavnije sintetiziraju, stabilniji su i manje podložni faktorima okoline.
Probir peptidnih aptamera pomoću SELEX-a	Peptidni aptameri su klasa kratkih peptidnih sekvenci sa visokom specifičnošću i afinitetom, koje se mogu specifično vezati za ciljne supstance i pokazuju širok spektar potencijala primjene u biomedicinskom polju. Kroz specifičan proces probira, peptidni aptameri koji se mogu specifično vezati za ciljne molekule se probiru iz velikog broja biblioteka nasumičnih peptidnih sekvenci.
Skrining specifičnih aptamera za ćelije (Cell-SELEX)	Ciljne ćelije ili specifični molekuli na površini ćelije se pripremaju kao mete. Mete mogu biti cijele ćelije, receptori na ćelijskoj membrani, proteini ili druge male molekule.
Probir malih molekularnih aptamera pomoću Capture SELEX-a	Capture SELEX je in vitro tehnika skrininga za skrining aptamera malih molekula, što je varijanta SELEX-a. Capture SELEX je posebno pogodan za skrining aptamera ciljnih malih molekula, koje obično imaju manje funkcionalnih grupa i teško ih je imobilizirati direktno na nosačima čvrste faze.
SELEX usluge na bazi živih životinja	Servis za skrining na živim životinjama je eksperimentalna tehnika koja se široko koristi u oblastima bioznanosti, medicine i biotehnologije, a koja koristi žive životinje kao eksperimentalne modele za skrining i evaluaciju specifičnih molekula, lijekova, terapija ili bioloških procesa. Usluge su osmišljene da simuliraju fiziološko okruženje u ljudskom tijelu kako bi se preciznije predvidjela i procijenila efikasnost i sigurnost eksperimentalnih rezultata u ljudskom tijelu.

Usluga optimizacije aptamera

Hidrofilnost, visok gubitak afiniteta tokom proizvodnje i brzo izlučivanje aptamera ograničavaju njihovu primjenu. Trenutno je istražen niz metoda optimizacije kako bi se poboljšale performanse aptamera.

Također imamo razne načine za optimizaciju aptamera koji se sastoje od skraćivanja, modifikacija, konjugacije s odgovarajućom grupom (tiol, karboksi, amin, fluorofor, itd.).

Usluga analize karakterizacije aptamera

Usluga karakterizacije aptamera odnosi se na profesionalnu uslugu procjene performansi, razlučivanja strukture i funkcionalne verifikacije dobijenog aptamera kako bi se osiguralo da aptamer ispunjava zahtjeve specifične sposobnosti vezivanja, stabilnosti i specifičnosti. Uglavnom uključuje analizu afiniteta i specifičnosti, procjenu stabilnosti i verifikaciju biološke funkcije.