Plataforma d'Immunització Animal

Les fonts animals d'Alpha Lifetech són clares, amb permisos d'inspecció i quarantena, antecedents genètics clars, freqüència d'immunització clara i registres detallats dels intervals d'immunització, proporcionant serveis convenients per a la producció d'anticossos. Principalment immunitza animals de la família Camelidae (Alpaca Liama i camells), establint les bases per a la producció de nanocossos. A més, també pot immunitzar animals ordinaris (com ara conills blancs de Nova Zelanda, ratolins i altres animals) segons els requisits de freqüència d'immunització i immunogenicitat requerits pels clients, extreure'ls i aïllar-los en PBMC i utilitzar-los per a experiments posteriors (com ara anticossos monoclonals, desenvolupament d'anticossos policlonals, etc.). Els clients poden proporcionar els seus propis immunògens i nosaltres els realitzarem un control de qualitat estricte. Si els clients proporcionen immunògens virals, cal inactivar-los i nosaltres realitzarem proves d'inactivació per garantir la seguretat. Al mateix temps, també podem personalitzar els immunògens corresponents segons les necessitats del client.

Introducció a la immunització animal

Quan es produeixen anticossos derivats d'animals com ara anticossos monoclonals, anticossos policlonals i nanobodies, el primer pas és immunitzar els animals i obtenir els limfòcits B, anticossos o PBMC corresponents per preparar-los per a una producció posterior d'anticossos, promoure la investigació científica bàsica, desenvolupar eines de diagnòstic clínic i facilitar el descobriment i desenvolupament de nous fàrmacs. Els camells, les alpaques, els liames i altres camells de la família Camelidae poden produir biblioteques de nanobodies (anticossos de domini únic) mitjançant la recollida de sang immunitària i l'extracció de PBMC. Els conills i altres animals poden ser immunitzats i es poden extreure anticossos dels seus cossos. Després de la purificació, es poden utilitzar per produir anticossos policlonals. Ratolins, rates, etc. es poden utilitzar per produir anticossos monoclonals fusionant limfòcits B extrets immunitàriament amb cèl·lules de mieloma. Abans de la immunització, s'ha de prestar atenció als principis de les 3R (reemplaçament, reducció, refinament), que poden reduir significativament el nombre d'animals utilitzats al mínim necessari, millorar els procediments experimentals i minimitzar el patiment dels animals. També s'ha de seguir un disseny experimental adequat, la selecció d'anticossos adequats i uns procediments de validació estrictes.

Classificació dels immunògens: producció de nanocossos

Tipus d'immunògens	Exemple	Preparació d'immunògens	Notes
Immunògens proteics	Enzims, proteïnes, toxines bacterianes i altres substàncies	Trieu diferents sistemes d'expressió de proteïnes: E. coli, llevat, cèl·lules d'insectes, cèl·lules de mamífers i sistema lliure de cèl·lules.	Presteu atenció a factors com la temperatura, el temps, el pH i els cossos d'inclusió que afecten l'expressió de proteïnes.
Immunògens d'àcids nucleics	ADN, ARN	Immunogen d'ADN: Construir ADN plasmídic, clonar vectors d'expressió adequats per als gens diana, cultivar cèl·lules per amplificar l'ADN plasmídic i extreure ADN plasmídic d'alta puresa. Immunogen d'ARN: Cal afegir una estructura de barret i una cua de poliA per evitar la degradació	Quan es preparen immunògens d'ADN, s'ha de parar atenció a les cèl·lules hostes adequades, i quan es preparen immunògens d'ARN, s'ha de parar atenció a la prevenció de la degradació de l'ARN.
Immunògens virals	Vacuna inactivada de virus sencer, vacuna de subunitats, vacuna de vector viral (adenovirus, lentivirus, etc.), vacuna mRAN.	Quan es prepara una vacuna inactivada amb virus sencer, primer s'inactiva el virus per augmentar la seguretat. Es fan proves de toxicitat per determinar si la inactivació és completa. Les vacunes de subunitats només requereixen proteïnes de la superfície del virus com a antígens i han de tenir en compte l'eficàcia immunitària.	Cal afegir adjuvants per proporcionar efectes immunitaris, s'ha de prestar atenció al virus que cal inactivar, es requereixen títols de virus adequats per garantir efectes immunitaris i s'ha de controlar estrictament la seguretat del procés de preparació.

Procés o cronologia de la immunització animal

Selecció animal i preparació d'antígens

Selecció d'animals: seleccioneu alpaques d'edat adequada i físic saludable de grups sans i realitzeu anàlisis de sang i proves de detecció de malalties per assegurar-vos que no hi hagi malalties infeccioses o altres problemes de salut.

Preparació d'immunògens: els immunògens són clau per induir respostes immunitàries i requereixen la selecció de proteïnes, pèptids o altres substàncies adequades en funció dels requisits de l'anticòs diana.

Una alpaca es pot immunitzar amb 1-3 antígens simultàniament, amb una quantitat total d'antigen d'1-2 mg per immunització i un volum inferior a 2 ml. Abans de la immunització, l'antigen i l'adjuvant s'emulsionen en una proporció 1:1 per formar una barreja uniforme, que s'emmagatzema a 4 ℃.

Alpaca immunològica

Anoteu el número d'orella d'alpaca en blanc i inicieu l'experiment d'immunització. Injecteu als ganglis limfàtics propers al coll de l'alpaca a banda i banda, amb 2 punts a cada costat i aproximadament 0,4 ml d'antigen emulsionat injectat a cada punt. Després de la immunització, observeu durant mitja hora per confirmar que l'alpaca no presenta símptomes de malestar. La immunització s'ha d'administrar cada 2 setmanes, amb almenys 4 immunitzacions.

Recollida de sang

Després de 4 immunitzacions durant 5-7 dies, recolliu 50 ml de sang de la vena del coll de l'alpaca.

Separació de sèrum

Es recullen mostres de sang per a l'avaluació immunitària abans de cada immunització amb antigen, prenent-se 5 ml de sang cada vegada; el mateix dia, la sang es va centrifugar a 400 xg durant 30 minuts utilitzant una centrífuga a 25 ℃ prèviament refredada. La capa superior de sèrum es va separar i es va emmagatzemar per a proves posteriors de títol d'anticossos.

Limfòcits separats

Primer afegiu 15 ml de solució de separació cel·lular i, a continuació, afegiu lentament 15 ml de sang a un tub de centrífuga de 50 ml. Aneu amb compte i aneu lentament en afegir sang per evitar la barreja de la sang i la solució de separació. Centrifugueu prèviament a 25 ℃, centrifugueu a 400 xg durant 30 minuts i guardeu el sèrum superior en un tub de centrífuga nou a -80 ℃; utilitzeu una pipeta per aspirar les cèl·lules immunitàries de la capa superior en forma de cotó del mig en un tub de centrífuga nou de 50 ml. Afegiu 10 ml de tampó PBS a temperatura ambient a cada tub, centrifugueu a 25 ℃ i 400 xg durant 20 minuts. Traieu el sobrenedant, afegiu 5 ml de tampó PBS a temperatura ambient a cada tub, barregeu suaument bé, calculeu el nombre de cèl·lules amb un hemocitòmetre i, a continuació, centrifugueu a 25 ℃ i 400 xg durant 20 minuts. Eliminar el sobrenedant i dissoldre els limfòcits obtinguts amb RNAiso Plus en funció del nombre de cèl·lules per obtenir 10^7/mL de lisat cel·lular, que s'emmagatzema a -80 ℃.

Fig. 1: Representació esquemàtica de diferents estratègies de descobriment d'anticossos i les etapes experimentals que hi estan implicades. (Font de la figura: Laustsen, Andreas H. et al.)

Els clients proporcionen un control de qualitat estricte amb immunògens

Tipus d'immunògens	Requisit	Mètode de control de qualitat
Mostres de pèptids/molècules petites	Condicions de dissolució (principalment depenent de si inactivaran els fags), estructura molecular/seqüència peptídica, informe de síntesi (HPLC/MS/HNMR)	Detecció per HPLC/MS
Mostres de proteïnes	SDS-PAGE/WB, condicions de reconstitució, tampó, informació de l'etiqueta, quantitat total (20-50 µg), concentració, puresa, etc.	SDS-PAGE/WB
Mostres cel·lulars	Tipus de cèl·lula (cèl·lules primàries/cèl·lules editades genèticament), forma cel·lular (fresca/congelada descongelada), tipus de creixement (adherent/suspès), requisits del medi de cultiu, nombre de cèl·lules proporcionades, nombre de cèl·lules proporcionades, cèl·lules editades genèticament per garantir l'expressió estable de les dianes de cribratge (anticòs primari corresponent al client), cèl·lules congelades descongelades per determinar la taxa de recuperació	Principalment dirigits a cèl·lules editades genèticament, utilitzant anticossos primaris subministrats pel client per a la identificació ELISA de l'expressió diana (la nostra empresa proporciona anticossos secundaris HRP), detecció per citometria de flux (la nostra empresa pot proporcionar anticossos secundaris fluorescents).

Quines són les aplicacions de la immunitat animal?

+

Els anticossos policlonals es poden produir mitjançant la immunització d'animals, els anticossos monoclonals es poden produir fusionant cèl·lules B amb cèl·lules de mieloma i les PBMC es poden extreure de fonts de camell (alpaca, camell, alpaca, etc.) per produir diverses formes de fragments d'anticossos com ara nanobodies, fragments Fab, fragments d'anticossos scFv, etc.
Quines són les precaucions per a la immunitat dels animals?

+

Per produir nanoanticossos per a animals derivats de camells, calen 5-6 immunitzacions. S'han de recollir mostres de sang com a control abans de la immunització, amb un interval de 2 setmanes entre cada immunització. Després de la quarta immunització, s'ha de recollir sang positiva i sang negativa no immunitzada per a ELISA per determinar el títol. Si el títol és inferior a 10^6, s'ha d'augmentar el nombre d'immunitzacions fins que el títol arribi a un nivell adequat. Per a altres immunitzacions d'animals com la immunització de conills (el nivell òptim o comú d'antigen proteic per a la immunització de conills és de 50-1000 µg), la immunització de ratolins (el nivell òptim o comú d'antigen proteic per a la immunització de ratolins és de 5-50 µg, que requereix 10^6 cèl·lules si es tracta d'una cèl·lula i de 10-50 µg per a àcids nucleics o carbohidrats), la immunització de cabres (el nivell òptim o comú d'antigen proteic per a la immunització de cabres és de 250-5000 µg), etc., s'ha de prestar atenció a la dosi, la seguretat i l'eficàcia dels immunògens.
Com triar animals immunes?

+

Segons el tipus d'anticòs que necessiti el client, si necessiteu produir nanobodies o altres fragments d'anticossos, podeu triar animals derivats de camells (camells, alpaques, alpaques) per a la immunització. Si necessiteu produir anticossos monoclonals o policlonals, heu de seleccionar l'espècie corresponent en funció de la quantitat de sèrum, antigen i font d'antigen. La quantitat màxima de sèrum per a conills és de 500 ml, que requereix una baixa quantitat d'antigen i és l'opció principal per produir anticossos policlonals. La quantitat màxima de sèrum per a ratolins és de 2 ml i la quantitat màxima de sèrum per a rates és de 20 ml, que sol ser l'opció òptima per als anticossos monoclonals. Els anticossos produïts per cabra tenen una alta afinitat i Alpha Lifetech pot personalitzar un pla d'immunització exclusiu per a vosaltres segons les vostres necessitats.
Cal utilitzar antígens juntament amb adjuvants? Com triar-los?

+

Hi ha dos tipus d'adjuvants: els basats en oli i els basats en aigua. L'ús raonable d'adjuvants és crucial per induir respostes d'anticossos fortes als antígens solubles. L'alliberament sostingut d'adjuvants significa que es poden utilitzar menys dosis d'antígens i les respostes d'anticossos són més duradores. La primera injecció s'ha d'utilitzar en combinació amb un adjuvant. Generalment es recomana utilitzar l'adjuvant de Freund quan la quantitat d'immunogen és petita.
Precaucions per a la immunització de l'alpaca?

+

(1) La selecció de l'alpaca i l'antigen de la immunitat són la clau per a una immunització reeixida. No és recomanable triar un camell ben proporcionat. La puresa i la conformació correcta dels antígens immunitaris són crucials per a la detecció d'anticossos adequats per a aplicacions posteriors després de la immunització amb alpaques. La puresa dels antígens proteics generalment no és inferior al 90%.

(2) Separació de limfòcits: la separació cel·lular oportuna pot prevenir eficaçment l'hemòlisi després de la recollida de sang per aconseguir el millor efecte de separació.

(3) El cicle immunitari pot afectar la resposta immunitària: un interval immunitari d'1 a 2 setmanes permet que les alpaques tinguin una bona resposta immunitària a la majoria d'antígens.

adjuvant desenvolupat independentment

El nostre adjuvant de fórmula única ha estat optimitzat per al sistema immunitari de l'alpaca, proporcionant una major potència i especificitat que els adjuvants tradicionals.

Administració de la vacunació
estàndard

Prometem completar la immunització dins del termini especificat, proporcionar sèrum d'alt títol i registrar cada pas mitjançant informes detallats.

Control de qualitat del projecte

Cada projecte se sotmet a estrictes processos de control de qualitat per garantir el lliurament d'anticossos que compleixin amb alts estàndards als clients.

claramentAlpacaFons

Tenim una població sana d'alpaques que dóna suport a diversos programes d'immunització.

Si teniu cap pregunta, no dubteu a contactar amb nosaltres en qualsevol moment.

Leave Your Message

Servei destacat

0102