Introducció al servei de visualització de fags

La visualització en fags, com a tècnica molecular basada en la modificació genètica de l'ADN del fag, s'ha convertit en una eina molecularment potent per generar sondes moleculars contra objectius específics presentant aquests fragments a la superfície del fag i així seleccionant fragments de pèptids/anticossos amb propietats d'unió específiques d'un gran nombre de variants (biblioteques).

Alpha Lifetech té deu anys d'experiència en el desenvolupament d'anticossos de visualització de fags i pot proporcionar un servei professional de construcció i cribratge de biblioteques d'anticossos per als nostres clients. Segons les necessitats dels clients, podem proporcionar diferents formes de biblioteques d'anticossos, com ara biblioteques immunitàries, biblioteques natives, biblioteques sintètiques i biblioteques semisintètiques. La tecnologia de biblioteques de visualització de fags, que fusiona gens d'anticossos amb els gens de proteïnes de la recobriment del fag com ara M13, és la tecnologia de preparació d'anticossos recombinants més comuna i s'utilitza àmpliament en el desenvolupament d'anticossos altament específics.

Alpha Lifetech immunitzarà alpaques, llames, taurons, etc., de manera que la seva eficiència arribi a 10^5. Enviarem l'informe de la prova d'eficiència al client per garantir la validesa i l'autenticitat de les dades. Les biblioteques natives tenen els avantatges de baixa toxicitat i baixa immunogenicitat. Alpha Lifetech disposa d'un gran nombre de biblioteques d'anticossos natius prefabricades, que es poden utilitzar directament per al cribratge d'anticossos sense immunitzar els animals, escurçant així el temps del projecte, avançant el progrés de l'assaig del client i garantint la integritat funcional de l'anticòs.

descobriment d'anticossos Alpha Lifetech

Fig 1: Principi de visualització de fagos

El nostre sistema de visualització de fags

La informació principal del sistema de visualització de fags M13/T4/T7 es mostra a la Taula 1.

Taula 1 Diferents vehicles de visualització de fags i les seves característiques
	M13	T4	T7
Mida del genoma	6407 pb	168895 pb	39937 pb
Proteïna de visualització	pVI, pIII i pVIII	SOC i HOC	gp10B
Mida de la pantalla	>110 kDa és pIII
Mida de la pantalla
Densitat de la pantalla
Densitat de la pantalla
Cicle de vida	Lisogènia	Lític	Lític

Alpha Lfetech pot proporcionar

La visualització de fags unifica el genotip i el fenotip en un de sol, combinant la selectivitat i l'amplificació amb potents capacitats de cribratge. Alpha Lifetech pot oferir una àmplia gamma de serveis per al desenvolupament d'anticossos de visualització de fags.
Els principals serveis inclouen: plataforma de biblioteques d'anticossos VHH, plataforma de biblioteques d'anticossos scFv, plataforma de biblioteques d'anticossos Fab, plataforma de construcció de biblioteques de fagos, plataforma de cribratge de biblioteques de fagos i servei d'humanització d'anticossos i altres serveis.

desenvolupament d'anticossos: Alpha Lifetech

Fig. 2: Procés del servei de desenvolupament de visualització de fagos

Procés de desenvolupament d'anticossos de visualització de fags

Podem immunitzar animals amb proteïnes expressades al nostre laboratori o subministrades pels nostres clients, incloent-hi diverses proteïnes macromoleculars, pèptids i proteïnes de membrana. Mitjançant proves d'eficiència ELISA, els nostres investigadors van realitzar l'aïllament de PBMC i l'extracció d'ARN de la sang d'alpaques amb els millors resultats d'immunització. Mitjançant transcripció inversa i amplificació gènica, vam construir el gen en vectors de fag pMESC, pComb3XSS o pCANTAB 5E. Mitjançant l'electrotransformació de cèl·lules competents de TG1 d'E. coli, es poden obtenir biblioteques d'anticossos de fag amb una capacitat de biblioteca superior a 10^9. Les biblioteques d'anticossos amb una gran capacitat de biblioteca tenen una bona diversitat i ajuden a trobar anticossos amb afinitat. Per garantir la qualitat de la biblioteca d'anticossos, caracteritzarem la capacitat de la biblioteca i la taxa d'inserció de la biblioteca. Finalment, seqüenciem les biblioteques per proporcionar als nostres clients les 30-50 seqüències necessàries. A continuació, realitzem un cribratge de la biblioteca de visualització en fags. Primer, l'antigen s'immobilitza en microplaques de polipropilè i, mitjançant 3-5 rondes de cribratge, s'eliminen els anticossos contra els fags amb una capacitat d'unió feble i es retenen els clons específics que s'uneixen a l'antigen. Per a la visualització en fags, s'utilitza el mètode ELISA per obtenir un clon positiu, mentre que per a la visualització en llevats, s'utilitza el mètode FACS per fer que les cèl·lules mostrin fragments d'anticossos recombinants utilitzant antígens marcats. Mitjançant el cribratge, preparem anticossos amb alta sensibilitat, especificitat i alta afinitat.

Fig. 3 Procés de síntesi d'anticossos de visualització en fags

AVANTATGES del servei
Avantatges del SERVEI

Alpha Lifetech està profundament compromesa amb la tecnologia de visualització de fagos i pot oferir als clients serveis de fagos més amplis i millors.

Període de temps i alta eficiència

La nostra empresa pot buscar anticossos satisfactoris en poc temps; podem dur a terme diversos experiments de detecció d'anticossos segons les necessitats dels clients.

Alta qualitat del producte

La nostra empresa ajuda els clients a preparar anticossos amb alta especificitat i estabilitat, augmentant la producció de resultats de recerca científica.

Oferir una varietat d'opcions

La nostra empresa pot construir biblioteques d'anticossos multiespècie (humà, ratolí, conill, alpaca, etc.) i pot construir una varietat de tipus (scfv, Fab, VHH, etc.) de biblioteques d'anticossos.

Gran capacitat

La nostra biblioteca d'anticossos té una gran capacitat de més de 10^9 anticossos

Preguntes freqüents: problemes generals de la visualització de fags

Preguntes sobre la visualització de fags ◢

P.
Què és la tecnologia de visualització de fagos?

A.
La tecnologia de visualització en fags consisteix a inserir el gen diana estrany a la posició específica de la proteïna de la càpsida del fag i expressar el gen estrany a la superfície del fag sense afectar la funció normal del fag. Després de diverses rondes de cribratge, finalment es va obtenir la proteïna diana amb una forta especificitat i una alta activitat biològica.
P.
Quins són els avantatges de la tecnologia de visualització de fags?

A.
Amb aquesta tecnologia es poden generar biblioteques d'anticossos d'alta capacitat. El cicle de cribratge és breu, el procés operatiu és senzill i la gamma d'aplicacions és extensa, cosa que permet la identificació de seqüències òptimes per a pèptids o proteïnes dirigides. En aplicacions relacionades amb virus, els investigadors poden descobrir anticossos que s'uneixen a epítops virals crítics mitjançant el cribratge de grans biblioteques d'anticossos. Aquest procés pot impedir els mecanismes d'entrada, replicació o evasió immunitària dels virus, establint així una base per al tractament de malalties.
P.
Quina diferència hi ha entre la tecnologia d'hibridoma i la tecnologia de fagos?

A.
La tecnologia de visualització en fagos s'utilitza més àmpliament que la tecnologia d'hibridoma, que es limita a produir una petita quantitat d'anticossos contra immunògens específics. En canvi, la tecnologia de visualització en fagos pot presentar una biblioteca completa d'anticossos derivada de diverses espècies immunitàries.
P.
Quines són les aplicacions de la tecnologia de visualització de fags?

A.
La tecnologia de visualització de fagos té una àmplia gamma d'aplicacions, com ara la detecció de receptors de microorganismes patògens, l'estudi de les interaccions de proteïnes, el seguiment de la transmissió de senyals entre cèl·lules, el diagnòstic de malalties animals i el desenvolupament de vacunes, entre altres camps.
P.
Perspectiva de la tecnologia de visualització de fagos?

A.
La tecnologia de visualització en fagos ofereix nombrosos avantatges i es pot aplicar en diversos camps. Tanmateix, el principal repte en el desenvolupament d'anticossos recombinants mitjançant el mètode de visualització en fagos és la complexitat i el cost associats al procés. Aquest enfocament requereix la integració de tècniques de biologia molecular, incloent-hi la mutació, la clonació i l'expressió, juntament amb anàlisis immunològiques, bioquímiques i biofísiques per identificar i caracteritzar els anticossos desitjats.

Preguntes relacionades amb l'antigen ◢

P.
Quins són els mètodes de presentació d'antígens?

A.
La presentació d'antígens és un vincle molt important. Els mètodes de presentació d'antígens inclouen principalment la presentació directa d'antígens recoberts, la presentació indirecta d'antígens recoberts, la presentació d'antígens mitjançant el cribratge de cèl·lules senceres, la presentació d'antígens a través de liposomes, discs de nanofosfolípids i VLP.
P.
Quines són les diferències entre els diversos tipus de presentació d'antígens?

A.
El mètode de recobriment directe és relativament senzill, però la conformació de l'antigen és fàcil de canviar, i l'operació de recobriment indirecte és complicada, però pot mantenir la conformació de l'antigen i millorar l'eficiència de la presentació. El cribratge cel·lular pot simular l'escena real in vivo, però hi ha un problema d'unió inespecífica. El disc de nanofosfolípids té una mida petita, una alta eficiència d'administració i una bona estabilitat; les VLP es fusionen amb l'antigen o es recobreixen amb l'antigen, cosa que té una alta immunogenicitat i bona seguretat, i pot desencadenar una forta resposta immunitària.
P.
Quin és l'efecte de la concentració d'antigen en els resultats de cribratge de la tecnologia de visualització de fags?

A.
Si la concentració és massa baixa, la probabilitat d'unió amb el fag disminuirà, cosa que reduirà l'eficiència del cribratge. Per contra, una concentració excessivament alta pot augmentar la probabilitat d'unió inespecífica, elevar el senyal de fons i dificultar la identificació de clons positius.
P.
Com podem assegurar-nos que l'antigen conservi la seva conformació natural durant el procés de cribratge?

A.
Es pot adoptar un mètode de fixació suau per evitar altes temperatures, àcids forts i àlcalis. Es va utilitzar el mètode de recobriment indirecte i el sistema biotina-estreptavidina per reduir el dany a l'estructura de l'antigen. Si l'antigen és una proteïna de membrana, es pot visualitzar a la superfície de cèl·lules intactes o utilitzar-se per simular l'entorn de la membrana, com ara un nanodisc, per mantenir la seva conformació natural de la proteïna de membrana.
P.
Com es pot verificar l'especificitat d'unió dels anticossos examinats mitjançant la tecnologia de visualització de fags a antígens?

A.
A més d'experiments rutinaris com ara ELISA, Western Blotting (WB) i immunofluorescència (IF), es poden utilitzar tècniques de detecció per ressonància plasmònica superficial (SPR) i interferometria de biocapa (BLI) per controlar els processos d'unió i dissociació d'anticossos i antígens en temps real, permetent la determinació de l'afinitat i els paràmetres cinètics.

Preguntes relacionades amb la immunitat ◢

P.
Quines són les respostes immunitàries generals dels animals en la tecnologia de visualització de fags?

A.
La visualització en fagos es pot utilitzar per generar anticossos monoclonals d'alta afinitat per a una àmplia gamma d'espècies productores d'anticossos, incloent-hi, entre d'altres, humans, ratolins, rates, conills, pollastres, camells, alpaques, vaques, gossos, ovelles, micos i taurons.
P.
Quines són les característiques i els escenaris aplicables de les biblioteques d'anticossos derivades de diverses espècies animals en la tecnologia de visualització de fagos?

A.
La tecnologia de construcció de biblioteques d'anticossos de ratolí està ben establerta, és rendible i té una curta durada experimental, cosa que la fa adequada per al cribratge preliminar d'anticossos i la recerca bàsica. Els anticossos de conill presenten una forta afinitat i especificitat, amb un rang de reconeixement d'epítops més ampli en comparació amb els anticossos de ratolí. Els anticossos humans es poden obtenir directament de les biblioteques d'anticossos humans, evitant així possibles reaccions immunitàries que es poden produir quan s'administren anticossos heteròlegs al cos humà. Aquest enfocament té un valor significatiu en la recerca i el desenvolupament de fàrmacs, particularment en la creació d'anticossos terapèutics.
P.
Quin és l'immunogen animal general que s'utilitza en la tecnologia de visualització de fags?

A.
Els immunògens animals es divideixen generalment en antígens proteics, antígens polipeptídics, antígens d'àcid nucleic i antígens relacionats amb patògens, entre els quals l'antígens relacionats amb patògens inclou l'antígen viral (partícula viral completa, proteïna viral, proteïna no estructural del virus, etc.), l'antígen bacterià (extracte bacterià complet, component de la paret cel·lular, proteïna secretada, toxina, etc.) i l'antígen paràsit.
P.
Com podem abordar el problema de la tolerància immunitària en animals durant la resposta immunitària?

A.
Ajustar els immunògens substituint els antígens immunitaris per proteïnes recombinants i substituint les partícules víriques de la lluita contra incendis per les proteïnes estructurals dels virus. Ajustar el disseny experimental i modificar la dosi immunitària.
P.
Com es pot millorar la immunogenicitat dels immunògens en la tecnologia de visualització de fagos?

A.
La immunogenicitat es pot millorar acoblant antígens amb proteïnes transportadores, com l'albúmina sèrica bovina. A més, es poden utilitzar adjuvants immunitaris, com ara l'adjuvant de Freund i l'adjuvant d'alumini, per prolongar el temps de residència in vivo i estimular l'activació i la proliferació de cèl·lules immunitàries, millorant així la immunogenicitat.

Preguntes sobre la construcció de biblioteques ◢

P.
Què és una biblioteca d'anticossos de fags?

A.
Una biblioteca d'anticossos de fags és una col·lecció d'anticossos de fags diversos creada mitjançant l'assemblatge d'un conjunt complet de gens de regió variable a partir d'anticossos en vectors de fags i l'expressió d'aquests a les superfícies dels fags. Aquest procés dóna lloc a la formació d'una biblioteca d'anticossos de fags.
P.
Procés de construcció d'una biblioteca d'anticossos fagics

A.
El procés general de visualització de fags implica diversos passos clau: extreure cèl·lules mononuclears de sang perifèrica (PBMC) d'animals immunitzats, aïllar l'ARN total i transcribir-lo en ADN complementari (ADNc), amplificar el gen diana mitjançant la tecnologia de reacció en cadena de la polimerasa (PCR), clonar el gen diana en un vector de fags i transformar el vector en una cèl·lula hoste per a la seva expressió. Aquest procés resulta en la construcció d'una biblioteca de visualització de fags, que pot identificar ràpidament anticossos d'alta afinitat. Posteriorment, aquesta biblioteca pot servir com un recurs valuós per al desenvolupament de vacunes, fàrmacs terapèutics i reactius de diagnòstic.
P.
Quins són els punts clau per construir una biblioteca d'alta qualitat?

A.

Assegureu-vos que el nombre total de PBMC sigui suficient. Assegureu-vos que la qualitat de l'ARN no es degradi.

Per assegurar el nombre total de transformants, la capacitat de la biblioteca generalment ha de ser de 10 a 100 vegades superior a la diversitat teòrica.
P.
Quines són les classificacions de la biblioteca d'anticossos de fags?

A.
Segons l'origen de la biblioteca d'anticossos, les biblioteques d'anticossos de fags es poden classificar en biblioteques d'anticossos de fags immunes i biblioteques d'anticossos de fags nadius. La distinció principal entre aquests dos tipus rau en si els animals han estat vacunats. A més, les biblioteques d'anticossos nadius es poden generar mitjançant semisíntesi o síntesi.
P.
Com es pot avaluar la qualitat d'una biblioteca d'anticossos fagics?

A.
Hi ha dos índexs principals per avaluar la qualitat d'una biblioteca d'anticossos: la capacitat d'emmagatzematge i la diversitat. Una gran capacitat d'emmagatzematge, combinada amb una alta diversitat, garanteix el cribratge eficaç d'anticossos amb alta afinitat i especificitat.

Preguntes de selecció de la biblioteca ◢

P.
Quin és el procés de cribratge d'una biblioteca d'anticossos fagics?

A.
En el procés d'elutriació biològica, la biblioteca de visualització s'incuba amb dianes fixes i després es renta exhaustivament per eliminar els fags no reactius. Els conjugats normalment s'elueixen amb una solució àcida o alta en sal i posteriorment s'amplifiquen en cèl·lules hostes adequades per a l'enriquiment. Després de 3 a 5 rondes de cribratge, s'obtenen anticossos amb alta afinitat.
P.
Quins mètodes s'utilitzen per a la detecció de biblioteques d'anticossos fagics?

A.
Els mètodes de cribratge de fagos inclouen principalment el panning en fase sòlida, el cribratge en fase líquida i el cribratge basat en cèl·lules. La selecció d'un mètode de cribratge adequat ha de tenir en compte les característiques de les molècules diana, els objectius del procés de cribratge i l'entorn del laboratori.
P.
Quins són els cribratges positius i negatius dels fagos?

A.
El cribratge positiu és el mètode més fonamental per a la detecció d'anticossos de fags que s'uneixen a proteïnes diana. El cribratge negatiu serveix per eliminar anticossos inespecífics. Durant el procés de cribratge d'anticossos de fags, es poden identificar anticossos inespecífics a causa de la interferència de l'etiqueta de l'antigen diana, materials o altres antígens amb similituds estructurals amb l'antigen diana. En aquests casos, el cribratge negatiu pot millorar l'eficiència del procés de cribratge.
P.
Com evitar la detecció d'anticossos inespecífics?

A.

Els antígens marcats amb diferents tipus de marcadors es poden prioritzar per al cribratge inicial, o es pot emprar un cribratge negatiu per disminuir la proporció d'anticossos inespecífics.

Podeu optar per substituir el fluid de segellat adequat o, alternativament, utilitzar fluids de segellat diferents per evitar aquesta situació. Si es selecciona l'anticòs que reconeix la línia cel·lular de fons (CHO o HEK293), podeu substituir-lo per altres línies cel·lulars de fons amb finalitats de detecció o de detecció negativa.
P.
Com es poden verificar i analitzar els anticossos obtinguts?

A.
Els mètodes per a la verificació d'anticossos solen incloure ELISA, Western Blotting (WB), citometria de flux, immunoprecipitació (IP), immunofluorescència (IF), immunohistoquímica i diverses altres tècniques experimentals. Alpha Lifetech té una àmplia experiència en la detecció d'anticossos i disposa d'un equip experimental professional, que garanteix l'eficàcia dels anticossos en experiments posteriors.

Si teniu cap pregunta, no dubteu a contactar amb nosaltres en qualsevol moment.

Leave Your Message

Servei destacat

Plataforma de descobriment d'anticossos