Plataforma de desenvolupament Aptamer

Els aptàmers són oligonucleòtids monocatenaris (ADN, ARN o XNA) amb la propietat d'alta afinitat i alta especificitat que s'uneixen específicament a molècules diana com els anticossos, i s'utilitzen àmpliament per al desenvolupament de biosensors, diagnòstic i terapèutica.

La plataforma d'aptàmers proporcionada per Alpha Lifetech inclou dues categories: la plataforma de síntesi d'aptàmers, que inclou principalment el servei de síntesi de biblioteques d'aptàmers SELEX i el servei de desenvolupament d'aptàmers (ADN, ARN o XNA), i la plataforma de cribratge d'aptàmers que inclou serveis de cribratge basats en la tecnologia SELEX per a proteïnes, pèptids, cèl·lules, petites molècules, ions metàl·lics i altres serveis d'optimització d'identificació d'aptàmers i altres serveis d'optimització de molècules aigües avall.

Plataforma de síntesi Aptamer

Servei de síntesi de biblioteca d'aptàmers SELEX

El servei de síntesi de biblioteques d'aptàmers de SELEX consisteix principalment en la construcció d'una biblioteca que conté un gran nombre de seqüències aleatòries d'oligonucleòtids monocatenaris mitjançant síntesi química in vitro segons les moleculars diana. La construcció de biblioteques és el punt de partida de la tecnologia SELEX, que proporciona abundants seqüències candidates per al procés de cribratge posterior mitjançant la construcció de biblioteques aleatòries enormes i augmenta la possibilitat de seleccionar aptàmers d'alta afinitat.

La síntesi de la biblioteca es divideix principalment en els passos següents:

Passos	Detalls de tecnologia
Identificar les molècules diana	Identificar les molècules diana que s'han de seleccionar per a aptàmers, que poden ser proteïnes, àcids nucleics, ions moleculars petits, metalls, etc.
Disseny de seqüències aleatòries	La longitud de la seqüència aleatòria, la composició de la base i altres paràmetres es van dissenyar segons les característiques de les molècules diana i els requisits de cribratge. Normalment, les seqüències aleatòries tenen una longitud d'entre desenes i centenars de bases.
Síntesi de seqüències fixes	Es dissenyen i sintetitzen fragments d'oligonucleòtids amb seqüències fixes (com ara seqüències d'encebadors de PCR) als dos extrems, que s'utilitzaran en el procés d'amplificació i cribratge posterior.

La biblioteca sintetitzada encara s'ha de processar més per al control de qualitat. Es va determinar la concentració de la biblioteca per garantir la seva aplicabilitat en el procés de cribratge posterior. La diversitat i la precisió de les seqüències aleatòries a la biblioteca es van verificar mitjançant la seqüenciació i altres mètodes per garantir que la qualitat de la biblioteca complia els requisits de selecció.

Mitjançant els passos anteriors, es pot sintetitzar una biblioteca d'aptàmers SELEX d'alta qualitat i molt diversa, que pot proporcionar abundants seqüències candidates per al procés de cribratge posterior.

Serveis de desenvolupament d'aptàmers (ADN, ARN o XNA)

Els aptàmers solen referir-se als aptàmers d'àcid nucleic. Els aptàmers d'àcid nucleic inclouen aptàmers d'ADN, aptàmers d'ARN i aptàmers d'XNA, que són aptàmers d'àcid nucleic modificats químicament. La tècnica SELEX s'utilitza àmpliament per al desenvolupament d'aptàmers. El flux de treball bàsic dels serveis de desenvolupament d'aptamers inclou la construcció de biblioteques, l'enllaç d'objectius, l'aïllament i la purificació, l'amplificació, diverses rondes de cribratge i la identificació de seqüències. Durant molts anys, ens hem centrat en la construcció de biblioteques i una rica experiència en el desenvolupament d'aptamers. Estem compromesos a oferir als clients millors serveis.

Procés Tecnològic SELEX

El procés SELEX consta de diverses rondes, cadascuna de les quals consta dels següents passos clau:

Enquadernació de biblioteca i objectiu

La biblioteca d'àcids nucleics construïda es barreja amb molècules diana específiques (com proteïnes, compostos de molècules petites, etc.), de manera que les seqüències d'àcids nucleics de la biblioteca tenen l'oportunitat d'unir-se a les molècules diana.

Aïllament de molècules no lligades

Les seqüències d'àcid nucleic que no estan lligades a la molècula diana es separen de la mescla mitjançant mètodes específics com ara cromatografia d'afinitat, separació de perles magnètiques, etc.

Amplificació de molècules d'unió

La seqüència d'àcid nucleic unida a una molècula diana s'amplifica, normalment utilitzant la tecnologia de reacció en cadena de la polimerasa (PCR). Per a la fase de cribratge posterior, les seqüències amplificades s'utilitzaran com a biblioteca inicial.

Fig 1: Procés de cribratge de SELEX

Plataforma de cribratge Aptamer

Servei de detecció d'Aptamer

Alpha Lifetech ofereix una àmplia gamma de serveis especialitzats de cribratge d'aptàmers aplicant diverses metodologies SELEX per a diferents tipus de molècules:

Tipus d'objectius	Detalls tècnics
Cribratge d'aptàmers de proteïnes per SELEX	L'objectiu principal del cribratge d'aptàmers de proteïnes és cridar aptàmers que es puguin unir específicament a molècules de proteïnes diana. Aquests aptàmers són més senzills de sintetitzar, més estables i menys susceptibles als factors ambientals.
Detecció d'aptàmers de pèptids per SELEX	Els aptàmers pèptids són una classe de seqüències peptídiques curtes amb alta especificitat i afinitat, que es poden unir específicament a substàncies diana i mostrar un ampli ventall de potencial d'aplicació en el camp biomèdic. Mitjançant un procés de cribratge específic, els aptàmers peptídics que poden unir-se específicament a molècules diana es filtren a partir d'un gran nombre de biblioteques de seqüències de pèptids aleatòries.
Cribratge d'aptàmers específics de cèl·lules (Cell-SELEX)	Les cèl·lules diana o molècules específiques a la superfície cel·lular es preparen com a dianes. Els objectius poden ser cèl·lules senceres, receptors a la membrana cel·lular, proteïnes o altres molècules petites.
Detecció d'aptàmers de molècules petites per Capture SELEX	Capture SELEX és una tècnica de cribratge in vitro per al cribratge d'aptàmers de molècules petites, que és una variant de SELEX. Capture SELEX és especialment adequat per al cribratge d'aptàmers de dianes de molècules petites, que normalment tenen menys grups funcionals i són difícils d'immobilitzar directament sobre suports de fase sòlida.
Serveis SELEX basats en animals en viu	El servei de cribratge basat en animals vius és una tècnica experimental molt utilitzada en els camps de la biociència, la medicina i la biotecnologia, que utilitza animals vius com a models experimentals per cridar i avaluar molècules específiques, medicaments, terapèutics o processos biològics. Els serveis estan dissenyats per simular l'entorn fisiològic del cos humà per predir i avaluar amb més precisió l'eficàcia i la seguretat dels resultats experimentals en el cos humà.

Servei d'optimització d'Aptamer

La hidrofilicitat, l'alta pèrdua d'afinitat durant la producció i la ràpida excreció d'aptàmers limiten la seva aplicació. Actualment, s'han explorat diversos mètodes d'optimització per millorar el rendiment dels aptàmers.

També disposem de diverses maneres d'optimitzar l'aptàmer consistent en truncament, modificacions, conjugació al grup adequat (tiol, carboxi, amina, fluoròfor, etc.).

Servei d'anàlisi de caracterització d'aptàmers

El servei d'anàlisi de caracterització d'aptamer es refereix al servei professional de resolució d'estructura d'avaluació del rendiment i verificació funcional de l'aptamer obtingut per assegurar-se que l'aptamer compleix els requisits específics de capacitat d'unió, estabilitat i especificitat. Inclou principalment anàlisi d'afinitat i especificitat, avaluació de l'estabilitat i verificació de la funció biològica.