Plataforma de desenvolupament d'Aptamer

Els aptàmers són oligonucleòtids monocatenaris (ADN, ARN o XNA) amb la propietat d'alta afinitat i alta especificitat que s'uneixen específicament a molècules diana com els anticossos, i s'utilitzen àmpliament per al desenvolupament de biosensors, diagnòstic i terapèutica.

La plataforma d'aptàmers proporcionada per Alpha Lifetech inclou dues categories: la plataforma de síntesi d'aptàmers, que inclou principalment el servei de síntesi de la biblioteca d'aptàmers SELEX i el servei de desenvolupament d'aptàmers (ADN, ARN o XNA), i la plataforma de cribratge d'aptàmers que inclou serveis de cribratge basats en la tecnologia SELEX per a proteïnes, pèptids, cèl·lules, molècules petites, ions metàl·lics i altres molècules diana, així com serveis posteriors d'optimització i anàlisi d'identificació d'aptàmers.

Plataforma de síntesi d'aptàmers

Servei de síntesi de biblioteques d'aptàmers SELEX

El servei de síntesi de biblioteques d'aptàmers SELEX consisteix principalment en la construcció d'una biblioteca que conté un gran nombre de seqüències d'oligonucleòtids monocatenaris aleatòries mitjançant síntesi química in vitro segons les molècules diana. La construcció de biblioteques és el punt de partida de la tecnologia SELEX, que proporciona abundants seqüències candidates per al procés de cribratge posterior mitjançant la construcció de biblioteques aleatòries enormes i augmenta la possibilitat de cribrar aptàmers d'alta afinitat.

La síntesi de biblioteques es divideix principalment en els passos següents:

Passos	Detalls de la tecnologia
Identificar les molècules diana	Identificar les molècules diana que cal cribrar per a aptàmers, que poden ser proteïnes, àcids nucleics, petites molècules, ions metàl·lics, etc.
Disseny de seqüències aleatòries	La longitud de la seqüència aleatòria, la composició de bases i altres paràmetres es van dissenyar d'acord amb les característiques de les molècules diana i els requisits de cribratge. Normalment, les seqüències aleatòries tenen una longitud d'entre desenes i centenars de bases.
Síntesi de seqüències fixes	Es dissenyen i sintetitzen fragments d'oligonucleòtids amb seqüències fixes (com ara seqüències de primers de PCR) a tots dos extrems, que s'utilitzaran en el procés posterior d'amplificació i cribratge.

La biblioteca sintetitzada encara necessita ser processada més a fons per al control de qualitat. Es va determinar la concentració de la biblioteca per garantir la seva aplicabilitat en el procés de cribratge posterior. La diversitat i la precisió de les seqüències aleatòries de la biblioteca es van verificar mitjançant seqüenciació i altres mètodes per garantir que la qualitat de la biblioteca complís els requisits de cribratge.

A través dels passos anteriors, es pot sintetitzar una biblioteca d'aptàmers SELEX d'alta qualitat i alta diversitat, que pot proporcionar abundants seqüències candidates per al procés de cribratge posterior.

Serveis de desenvolupament d'aptàmers (ADN, ARN o XNA)

Els aptàmers solen referir-se a aptàmers d'àcids nucleics. Els aptàmers d'àcids nucleics inclouen aptàmers d'ADN, aptàmers d'ARN i aptàmers de XNA, que són aptàmers d'àcids nucleics modificats químicament. La tècnica SELEX s'utilitza àmpliament per al desenvolupament d'aptàmers. El flux de treball bàsic dels serveis de desenvolupament d'aptàmers inclou la construcció de biblioteques, la unió de dianes, l'aïllament i la purificació, l'amplificació, múltiples rondes de cribratge i la identificació de seqüències. Durant molts anys, ens hem centrat en la construcció de biblioteques i tenim una rica experiència en el desenvolupament d'aptàmers. Estem compromesos a oferir als clients millors serveis.

Procés tecnològic SELEX

El procés SELEX consta de diverses rondes, cadascuna de les quals consta dels passos clau següents:

Enllaç de biblioteca i destinació

La biblioteca d'àcids nucleics construïda es barreja amb molècules diana específiques (com ara proteïnes, compostos de molècules petites, etc.), de manera que les seqüències d'àcids nucleics de la biblioteca tinguin l'oportunitat d'unir-se a les molècules diana.

Aïllament de molècules no lligades

Les seqüències d'àcids nucleics que no estan unides a la molècula diana es separen de la mescla mitjançant mètodes específics com ara la cromatografia d'afinitat, la separació amb perles magnètiques, etc.

Amplificació de molècules d'unió

La seqüència d'àcid nucleic unida a una molècula diana s'amplifica, generalment mitjançant la tecnologia de reacció en cadena de la polimerasa (PCR). Per a la fase de cribratge posterior, les seqüències amplificades s'utilitzaran com a biblioteca inicial.

Fig 1: Procés de cribratge SELEX

Plataforma de cribratge d'aptàmers

Servei de cribratge d'aptàmers

Alpha Lifetech ofereix una àmplia gamma de serveis especialitzats de cribratge d'aptàmers aplicant diverses metodologies SELEX per a diferents tipus de molècules:

Tipus d'objectiu	Detalls tècnics
Cribratge d'aptàmers de proteïnes mitjançant SELEX	El principal objectiu del cribratge d'aptàmers de proteïnes és cribrar aptàmers que es puguin unir específicament a molècules de proteïna diana. Aquests aptàmers són més senzills de sintetitzar, més estables i menys susceptibles a factors ambientals.
Cribratge d'aptàmers peptídics per SELEX	Els aptàmers peptídics són una classe de seqüències peptídiques curtes amb alta especificitat i afinitat, que poden unir-se específicament a substàncies diana i mostren un ampli rang de potencial d'aplicació en el camp biomèdic. Mitjançant un procés de cribratge específic, els aptàmers peptídics que poden unir-se específicament a molècules diana es cribren a partir d'un gran nombre de biblioteques de seqüències peptídiques aleatòries.
Cribratge d'aptàmers específic de cèl·lules (Cell-SELEX)	Com a dianes es preparen cèl·lules diana o molècules específiques de la superfície cel·lular. Les dianes poden ser cèl·lules senceres, receptors de la membrana cel·lular, proteïnes o altres molècules petites.
Cribratge d'aptàmers de petites molècules mitjançant Capture SELEX	La captura SELEX és una tècnica de cribratge in vitro per al cribratge d'aptàmers de molècules petites, que és una variant de SELEX. La captura SELEX és particularment adequada per al cribratge d'aptàmers de molècules petites diana, que normalment tenen menys grups funcionals i són difícils d'immobilitzar directament sobre suports de fase sòlida.
Serveis SELEX basats en animals vius	El servei de cribratge basat en animals vius és una tècnica experimental àmpliament utilitzada en els camps de la biociència, la medicina i la biotecnologia, que utilitza animals vius com a models experimentals per cribrar i avaluar molècules, medicaments, teràpies o processos biològics específics. Els serveis estan dissenyats per simular l'entorn fisiològic del cos humà per predir i avaluar amb més precisió l'eficàcia i la seguretat dels resultats experimentals en el cos humà.

Servei d'optimització d'Aptamer

La hidrofilicitat, l'alta pèrdua d'afinitat durant la producció i la ràpida excreció d'aptàmers limiten la seva aplicació. Actualment, s'han explorat diversos mètodes d'optimització per millorar el rendiment dels aptàmers.

També tenim diverses maneres d'optimitzar l'aptàmer, com ara el truncament, les modificacions i la conjugació amb el grup apropiat (tiol, carboxi, amina, fluoròfor, etc.).

Servei d'anàlisi de caracterització d'aptàmers

El servei d'anàlisi de caracterització d'aptàmers fa referència al servei professional d'avaluació del rendiment, resolució d'estructura i verificació funcional de l'aptàmer obtingut per garantir que l'aptàmer compleixi els requisits de capacitat d'unió específica, estabilitat i especificitat. Inclou principalment anàlisi d'afinitat i especificitat, avaluació d'estabilitat i verificació de la funció biològica.