Servei de Desenvolupament d'Anticossos Monoclonals

Alpha Lifetech Inc.pot proporcionar predicció d'epítops, síntesi de pèptids, expressió de proteïnes, producció d'anticossos policlonals o monoclonals, així com purificació d'anticossos a partir de cultius cel·lulars, líquid d'ascites o sèrum complet.

Alpha Lifetech Inc.té experiència en proporcionar als clients diversos serveis de línies cel·lulars estables, incloent-hi cèl·lules d'hibridoma, línies cel·lulars d'edició del genoma, línies cel·lulars amb inactivació i línies cel·lulars amb sobreexpressió. Intentem oferir serveis avançats de línies cel·lulars personalitzats a cada client i els nostres serveis són provats i fiables.

Estratègia de desenvolupament d'anticossos

1. Disseny i preparació d'antígens
Aquests antígens poden ser proteïnes, pèptids o altres molècules. El disseny d'immunògens requereix un enfocament integral que integri el coneixement de l'estructura dels antígens, la immunologia i els sistemes d'administració. Alpha Lifetech té tecnologia de disseny d'antígens que pot dissenyar immunògens per als clients que ho necessiten.
Alpha Lifetech ofereix productes de proteïnes recombinants perquè els clients puguin triar. Disposem d'una varietat de sistemes d'expressió de proteïnes, com ara el sistema d'expressió d'E. coli, el sistema d'expressió de llevat, el sistema d'expressió de baculovirus-insecte, el sistema d'expressió de mamífers, etc., per produir les proteïnes recombinants que necessiteu per a la investigació.

2. Immunització animal
Alpha Lifetech pot proporcionar immunògens als clients, i hi ha disponibles animals immunes com ara ratolins, conills, ovelles, alpaques, conillets d'Índies, hàmsters, etc. perquè pugueu triar.

3. Mètodes de producció d'anticossos monoclonals

●Producció de Mabs mitjançant la tecnologia d'hibridoma
L'hibridoma és una cèl·lula híbrida produïda per la fusió de dos tipus de cèl·lules, concretament una línia cel·lular de mieloma de ratolí i cèl·lules plasmàtiques (limfòcit B), en què la cèl·lula heterozigota pot produir anticossos continus contra l'antigen d'interès in vitro. La producció d'una línia cel·lular d'hibridoma consta de tres parts: disseny d'antigen (haptens, molècules petites i pèptids), immunització animal, fusió cel·lular i cribratge de clons positius. Utilitzant metodologies d'immunització úniques, obtenim eficiències de fusió cel·lular excepcionalment altes (1-10 hibridomes per cada mil cèl·lules B) i títols d'anticossos elevats, maximitzant la nostra taxa d'èxit en proves analítiques posteriors que inclouen cribratge bioquímic, assaigs in vitro basats en cèl·lules i estudis amb animals.

●Producció de mabs mitjançant tecnologia de visualització de fags
La visualització en fags ofereix un altre mètode per generar anticossos monoclonals. Els limfòcits B s'aïllen de la sang animal i se'n extreu l'ARNm. Mitjançant PCR, aquest ARNm es converteix en ADNc, que amplifica tots els segments VH i VL. Aquests segments es clonen en un vector, normalment com a fragments variables de cadena simple (scFv), juntament amb la proteïna PIII d'un bacteriòfag. Posteriorment, aquesta construcció s'utilitza per infectar E. coli, donant lloc a la creació d'una biblioteca que conté aproximadament 10^10 cèl·lules mitjançant la inoculació amb un fag auxiliar. E. coli és capaç de secretar el bacteriòfag que alberga els segments VH i VL com a part de la seva capa. A continuació, es poden seleccionar segments VH i VL específics dirigits a l'antigen d'interès i utilitzar-los per reinocular E. coli amb el bacteriòfag. Les cèl·lules que contenen el plasmidi s'aïllen i seqüencian.

4. Cribratge de fusió

●Fusió i selecció cel·lular
Els limfòcits B recollits es fusionen amb cèl·lules de mieloma, que són cèl·lules canceroses que poden proliferar indefinidament en cultiu. La fusió s'aconsegueix normalment mitjançant una tècnica com la fusió amb polietilenglicol (PEG).
Després de la fusió, les cèl·lules d'hibridoma es cultiven en un medi selectiu que permet que només sobrevisquin els hibridomes. El medi sol contenir aminopterina, que impedeix el creixement de cèl·lules de mieloma no fusionades.

●Cribratge i adherència
Les cèl·lules d'hibridoma resultants es cribren per a la producció d'anticossos específics contra l'antigen diana. Això es fa normalment mitjançant tècniques com ara l'assaig immunosorbent lligat a enzims (ELISA), Western blot, immunoprecipitació i citometria de flux.

Un cop identificades les cèl·lules hibridomes que produeixen l'anticòs, es clonen per generar una població de cèl·lules idèntiques. Això garanteix que l'anticòs produït per cada cèl·lula hibridoma sigui idèntic.

5. Verificació funcional d'anticossos
Alpha Lifetech proporciona validació funcional d'anticossos, com ara Western blot, immunohistoquímica o assaigs funcionals, per caracteritzar anticossos monoclonals i confirmar l'especificitat, l'afinitat i la funcionalitat dels anticossos.

6. Optimització d'anticossos
Purificació d'anticossos del sobrenedant de cultiu mitjançant tècniques com la cromatografia d'afinitat de proteïna A o proteïna G, i Alpha Lifetech també pot proporcionar mètodes de modificació d'anticossos per millorar l'afinitat dels anticossos.

7. Producció d'anticossos
Alpha Lifetech pot avaluar anticossos candidats per a aplicacions de cribratge d'alt rendiment i producció a gran escala.