L'anticòs VHH és un anticòs natural de cadena lleugera perduda (VL) que es troba al sèrum dels camells. L'estructura de l'anticòs VHH és simple i consta de només dues cadenes pesants (VH). Els nanocossos comprenen la regió variable de la cadena pesant (VHH) amb un pes molecular d'uns 15 kDa. L'anticòs VHH té la capacitat normal de reconèixer antígens i mostra una excel·lent afinitat, una excel·lent especificitat, una excel·lent estabilitat i una excel·lent penetració. Des de llavors, s'han trobat anticossos contra l'estructura en altres animals, com ara alpaques i taurons. Els nanocossos, que contenen només una regió variable de cadena pesant i dues regions CH2 i CH3 convencionals, tot i no tenir domini VL, són un anticòs d'un sol domini altament estable i la unitat d'unió més petita coneguda amb activitat d'anticossos. Alpha Lifetech pot proporcionar als clients, incloent la preparació de nanocossos, la construcció i el cribratge de biblioteques de nanocossos, l'expressió de nanocossos VHH i una sèrie de serveis. A través de la plataforma de desenvolupament de síntesi de nanocossos i visualització de fags, pot construir i cribrar de manera eficient, incloent una varietat de tipus diferents de biblioteques d'anticossos de fags, proporcionant als nostres clients solucions d'anticossos específiques i d'alta especificitat. També podem desenvolupar estratègies professionals d'humanització d'anticossos per als nostres clients, que es poden humanitzar per a nanobodies, i la nostra empresa és gairebé equivalent als anticossos humans.

Primer, l'alpaca sense cap malaltia permet que els immunògens estimulin el seu sistema immunitari per produir una resposta immunitària, i aquests animals poden produir anticossos d'un sol domini. Després, vam aïllar cèl·lules B individuals de PBMC d'alpaca i l'ARN de les cèl·lules B es va extreure i transcriure en ADNc. Finalment, es va utilitzar com a plantilla i es va cribrar la nostra seqüència VHH diana mitjançant electroforesi. A continuació, vam realitzar una anàlisi de seqüenciació de la seqüència d'anticòs VHH cribrada, que pot millorar l'estabilitat i l'afinitat de l'anticòs VHH preparat. Al mateix temps, també podem dur a terme mutagènesi dirigida al lloc i cribratge d'estabilitat dels anticossos VHH. Podem obtenir una major estabilitat dels mutants d'anticossos VHH introduint mètodes especials, com ara certes mutacions específiques per al cribratge. L'enginyer va inserir la seqüència VHH resultant al vector d'expressió adequat (com ara plasmidis, virus, etc.) per a l'expressió d'anticossos VHH. Finalment, mitjançant la tecnologia de visualització de fags o la tecnologia de visualització de llevats, els anticossos VHH s'expressen a la superfície de l'hoste i, a continuació, es seleccionen nanoanticossos que poden unir-se específicament a l'antigen diana mitjançant antígens recoberts i ELISA. Alpha Lifetech també va seqüenciar i verificar els nanocossos seleccionats per garantir la correcció i l'activitat funcional de les seqüències de nanocossos lliurades als clients.

La tecnologia VHH aprofita diversos avenços en enginyeria genètica, de manera que el gen diana es reempalma i es reorganitza en circumstàncies normals, cosa que pot proporcionar una eina d'alta unió per a altres tecnologies, que poden contenir diverses etiquetes, i els anticossos produïts per la tecnologia VHH són convenients per a la purificació. Mitjançant tècniques de cribratge d'alt rendiment, Alpha Lifetech pot cribrar anticossos VHH amb funcions específiques requerides pels clients a partir d'un gran nombre d'anticossos en un període curt. Mentrestant, els anticossos VHH es poden produir indefinidament i econòmicament, quan els anticossos VHH s'exposen a altes temperatures i altres dissolvents. Els anticossos VHH es poden manipular genèticament per generar altres usos, com ara convertir-se en bastides, marcar i canviar aminoàcids específics. Els anticossos VHH són adequats per a qualsevol plataforma comuna que utilitzi anticossos convencionals, com ara plaques de microtitració, biosensors electroquímics i dispositius de flux lateral. A causa de la mida més petita dels anticossos VHH, poden tenir una densitat més alta en el domini d'unió, de manera que els anticossos VHH tenen un avantatge destacat en l'augment del senyal i, per tant, una major sensibilitat. Alhora, l'anticòs VHH té una aplicació molt àmplia en el diagnòstic i tractament de tumors, el diagnòstic de la inflamació, el tractament de malalties del sistema nerviós central i altres camps. Els anticossos VHH són particularment útils per controlar les micotoxines en aliments i pinsos, ja que es modifiquen genèticament fàcilment i tenen una excel·lent estabilitat.

En el procés d'immunització, utilitzem una varietat d'immunògens. Segons les propietats dels immunògens, els podem dividir en antígens naturals, antígens recombinants, antígens sintètics i antígens de molècules petites. Els antígens naturals inclouen immunògens virals. El procés de purificació dels immunògens naturals és complicat, cosa que també és més difícil que altres immunògens, i el cost de purificació també és més elevat. L'immunògen viral es divideix en vacuna inactivada per virus sencer, vacuna de subunitats, vacuna de vector viral i vacuna d'ARNm. La vacuna inactivada per virus sencer pot estimular el cos per produir una resposta immunitària, però el virus ha d'estar completament inactivat i el procés de preparació és més complicat. Per a la vacuna de subunitats, només hem utilitzat la proteïna de la superfície viral com a antigen, de manera que la seguretat d'aquest immunògen és alta, però cal afegir l'adjuvant per millorar l'efecte immunitari. Després de la modificació genètica, l'adenovirus i el lentivirus s'utilitzen com a vectors per induir l'aparició de la resposta immunitària mitjançant la replicació i l'expressió virals. L'efecte immunitari és eficient i durador, però el procés de preparació és complex, per la qual cosa cal controlar estrictament la bioseguretat. Mentre que l'ARNm es pot importar directament a les cèl·lules, de manera que les cèl·lules puguin expressar l'antigen i estimular l'aparició de la resposta immunitària, aquest procés és més difícil, cosa que requereix garantir l'estabilitat i l'eficiència de l'administració de l'ARNm. Tot i que els antígens recombinants difereixen en la conformació dels antígens naturals, poden ser sotmesos a una producció industrial extensa. Les proteïnes de molècules petites o antígens polipeptídics es poden preparar mitjançant mètodes de síntesi in vitro. La seva estructura és controlable, però pot ser complicada en el disseny. Els antígens de molècules petites són majoritàriament compostos de molècules petites com ara pèptids i nucleòtids, perquè no són immunogènics per si mateixos, per la qual cosa només es poden utilitzar com a immunògens després de la connexió amb portadors macromoleculars.

El pes molecular dels nanoanticossos és molt petit, normalment al voltant de 12-15 kDa, només una dècima part del de l'anticòs IgG tradicional. L'estructura cristal·lina és una pilota de rugbi d'uns 2,5 nm de diàmetre i uns 4,2 nm de llarg. L'estructura molecular única permet una bona penetració als teixits, una vida mitjana més curta i una major eliminació renal a través de la barrera hematoencefàlica. Els nanoanticossos consten de regions determinants i troncals complementàries. Les regions de decisió complementàries inclouen CDR 1, CDR 2 i CDR 3. El rang de longitud de 3 a 28 aminoàcids a la regió CDR 3 garanteix la capacitat d'emmagatzematge de la biblioteca de nanoanticossos. En comparació amb la regió CDR 3 d'anticossos tradicional de només 8 a 15 aminoàcids, algunes de les regions CDR 3 amb CDR 3 més llarg ens van ajudar a identificar epítops ocults a la superfície de l'antigen. La regió principal dels nanobodies inclou FR 1, FR 2, FR 3 i FR 4, amb quatre mutacions d'aminoàcids hidròfils a FR 2, i aquesta mutació millora la solubilitat en aigua de l'anticòs. L'enllaç disulfur especial entre CDR 1 i CDR 3 millora l'estabilitat dels anticossos sota alta pressió, alta temperatura, desnaturants i altres condicions, cosa que afavoreix la producció i conservació de nanobodies, i també crea la possibilitat de nous mètodes d'administració.