Unsa ang Antibody Engineering?

Sa tabang sa antibody engineering, posible nga mabag-o ang gidak-on sa molekula, pharmacokinetics, immunogenicity, binding affinity, specificity ug effector function sa antibodies. Pagkahuman sa pag-synthesize sa mga antibodies, ang piho nga pagbugkos sa mga antibodies naghimo kanila nga labi ka bililhon sa klinikal nga pagdayagnos ug pagtambal. Pinaagi sa antibody engineering, ilang matubag ang mga panginahanglan sa tambal ug diagnostic nga sayo nga pag-uswag.

Ang katuyoan sa antibody engineering mao ang pagdesinyo ug paghimo sa labi ka piho, lig-on nga mga gimbuhaton nga dili makab-ot sa natural nga mga antibodies, nga nagbutang sa pundasyon alang sa paghimo sa mga therapeutic antibodies.

Ang Alpha Lifetech, nga adunay daghang kasinatian sa proyekto sa antibody engineering, makahatag ug customized nga monoclonal ug polyclonal antibody nga mga serbisyo alang sa daghang mga espisye, ingon man ang phage display antibody library construction ug screening services. Makahatag ang Alpha Lifetech sa mga kustomer og kalidad nga biosimilar antibodies ug recombinant nga mga produkto sa protina, ingon man ang katugbang nga mga serbisyo, aron makahimo og episyente, espesipiko kaayo, ug lig-on nga mga antibodies. Pinaagi sa paggamit sa komprehensibo nga antibody, mga platform sa protina ug mga sistema sa pagpakita sa phage, naghatag kami mga serbisyo nga naglangkob sa upstream ug downstream sa produksiyon sa antibody, lakip ang mga teknikal nga serbisyo sama sa antibody humanization, pagputli sa antibody, pagkasunud sa antibody, ug pag-validate sa antibody.

Ang pagpayunir nga yugto sa antibody engineering nalangkit sa duha ka teknolohiya:

--Recombinant nga teknolohiya sa DNA

--Teknolohiya sa Hybridoma

Ang paspas nga pag-uswag sa antibody engineering adunay kalabotan sa tulo ka hinungdanon nga teknolohiya:

--Gene cloning nga teknolohiya ug polymerase chain reaction

--Pagpahayag sa protina: Ang mga recombinant nga protina gihimo sa mga sistema sa ekspresyon sama sa lebadura, mga virus nga pormag rod, ug mga tanum

--Computer aided structural design

Ang una nga henerasyon sa mga antibodies gihimong tawo alang sa paghimo sa chimeric antibodies, diin ang variable nga rehiyon sa monoclonal antibodies sa mouse nalambigit sa kanunay nga rehiyon sa mga molekula sa IgG sa tawo. Ang antigen binding region (CDR) sa ikaduhang henerasyon nga mouse monoclonal antibody gibalhin ngadto sa human IgG. Gawas sa rehiyon sa CDR, ang tanan nga ubang mga antibodies halos mga antibodies sa tawo, ug gihimo ang mga paningkamot aron malikayan ang pag-aghat sa mga tubag sa anti-mouse antibody (HAMA) kung mogamit mga antibody sa clone sa mouse alang sa pagtambal sa tawo.

 

Aron makatukod ug phage display library, ang unang lakang mao ang pagkuha sa mga gene nga nag-encode sa mga antibodies, nga mahimong mahimulag gikan sa B cells sa nabakunahan nga mga mananap (immune library construction), direktang gikuha gikan sa non immunized nga mga mananap (natural library construction), o gani gi-assemble in vitro nga adunay antibody gene fragments (synthetic library construction). Dayon, ang mga gene gipadako pinaagi sa PCR, gisal-ut ngadto sa mga plasmid, ug gipahayag diha sa haom nga mga sistema sa host (lebadura nga ekspresyon (kasagarang Pichia pastoris), prokaryotic nga ekspresyon (kasagarang E. coli), mammalian cell ekspresyon, tanom cell ekspresyon, ug insekto cell ekspresyon nataptan sa rod-shaped virus). Ang labing komon mao ang E. coli expression system, nga naghiusa sa usa ka piho nga pag-encode sa antibody sequence ngadto sa phage ug nag-encode sa usa sa phage shell proteins (pIII o pVIII). Ang gene fusion sa, Ug gipakita sa ibabaw sa mga bacteriophages. Ang kinauyokan niini nga teknolohiya mao ang paghimo og phage display library, nga adunay bentaha sa natural nga mga librarya tungod kay kini adunay espesipikong pagbugkos. Pagkahuman, ang mga antibodies nga adunay espesipikong antigen gisusi pinaagi sa usa ka proseso sa pagpili sa biyolohikal, ang mga target nga antigen giayo, ang wala mabugkos nga mga phage balik-balik nga gihugasan, ug ang mga gigapos nga phage gihugasan alang sa dugang nga pagpauswag. Human sa tulo o labaw pa nga mga hugna sa pagbalik-balik, taas nga espesipiko ug taas nga affinity antibodies ang nahimulag.

Fig 3: Pagtukod ug Pagsusi sa Antibody Library

Ang teknolohiya sa recombinant DNA mahimong magamit sa pagmugna og mga tipik sa antibody. Ang Fab antibodies sa sinugdan ma-hydrolyzed lang sa gastric protease aron makagama (Fab ') 2 ka tipik, nga dayon tunawon sa papain aron makamugna og indibidwal nga mga tipik sa Fab. Ang Fv fragment naglangkob sa VH ug VL, nga adunay dili maayo nga kalig-on tungod sa pagkawala sa disulfide bond. Busa, ang VH ug VL gisumpay pinaagi sa usa ka mubo nga peptide sa 15-20 ka amino acid aron mahimong usa ka kadena nga variable fragment (scFv) nga antibody nga adunay gibug-aton nga molekula nga gibana-bana nga 25KDa.

Ang pagtuon sa istruktura sa antibody sa Camelidae (Camel, LIama, ug Alpaca) nagpatin-aw nga ang mga antibodies adunay bug-at nga mga kadena ug wala’y gaan nga mga kadena, busa gitawag kini nga heavy chain antibodies (hcAb). Ang variable domain sa heavy chain antibodies gitawag nga single domain antibodies o nanobodies o VHH, nga adunay gidak-on nga 12-15 kDa. Ingon nga mga monomer, wala silay mga disulfide bond ug lig-on kaayo, nga adunay taas kaayo nga kalambigitan sa mga antigen.

Fig 5: Bug-at nga Chain Antibody ug VHH/ Nanobody

Ang cell free expression naggamit sa ekspresyon sa natural o sintetikong DNA aron makab-ot ang in vitro protein synthesis, kasagaran gamit ang E. coli expression system. Naghimo kini og mga protina sa madali ug naglikay sa metaboliko ug cytotoxic nga palas-anon sa mga selula sa dihang naghimo og daghang mga recombinant nga protina sa vivo. Makahimo usab kini og mga protina nga lisud i-synthesize, sama niadtong lisud usbon human sa paghubad o pag-synthesize sa mga protina sa lamad.