Unsa ang Antibody Engineering?

Uban sa tabang sa antibody engineering, posible nga mausab ang gidak-on sa molekula, pharmacokinetics, immunogenicity, binding affinity, specificity ug effector function sa mga antibodies. Human sa pag-synthesize sa mga antibodies, ang espesipikong pagbugkos sa mga antibodies naghimo kanila nga bililhon kaayo sa klinikal nga pagdayagnos ug pagtambal. Pinaagi sa antibody engineering, matubag nila ang mga panginahanglan sa sayo nga pag-uswag sa tambal ug diagnostic.

Ang katuyoan sa antibody engineering mao ang pagdesinyo ug paghimo og espesipiko kaayo, lig-on nga mga gimbuhaton nga dili makab-ot sa natural nga mga antibody, nga nagpahimutang sa pundasyon alang sa paghimo og mga therapeutic antibodies.

Ang Alpha Lifetech, uban sa halapad nga kasinatian sa proyekto sa antibody engineering, makahatag og customized nga monoclonal ug polyclonal antibody services para sa daghang species, ingon man phage display antibody library construction ug screening services. Ang Alpha Lifetech makahatag sa mga kustomer og dekalidad nga biosimilar antibodies ug recombinant protein products, ingon man mga katugbang nga serbisyo, aron makahimo og episyente, highly specific, ug stable antibodies. Pinaagi sa paggamit sa komprehensibo nga antibody, protein platforms ug phage display systems, naghatag kami og mga serbisyo nga naglangkob sa upstream ug downstream sa antibody production, lakip ang mga teknikal nga serbisyo sama sa antibody humanization, antibody purification, antibody sequencing, ug antibody validation.

Ang nag-unang yugto sa antibody engineering nalambigit sa duha ka teknolohiya:

--Teknolohiya sa Rekombinanteng DNA

--Teknolohiya sa Hybridoma

Ang paspas nga pag-uswag sa antibody engineering nalambigit sa tulo ka importanteng teknolohiya:

--Teknolohiya sa pag-clone sa gene ug reaksyon sa kadena sa polymerase

--Ekspresyon sa protina: Ang mga recombinant nga protina gihimo sa mga sistema sa ekspresyon sama sa yeast, mga virus nga porma og rod, ug mga tanom

--Disenyo sa istruktura nga gitabangan sa kompyuter

Ang unang henerasyon sa mga antibody gihimong humanized para sa paghimo og chimeric antibodies, diin ang variable region sa mouse monoclonal antibodies nalambigit sa constant region sa human IgG molecules. Ang antigen binding region (CDR) sa second-generation mouse monoclonal antibody gi-transplant ngadto sa human IgG. Gawas sa CDR region, ang tanang ubang antibodies halos human antibodies, ug gihimo ang mga paningkamot aron malikayan ang pag-induce sa human anti mouse antibody (HAMA) responses sa paggamit og mouse clone antibodies para sa pagtambal sa tawo.

 

Aron makahimo og phage display library, ang unang lakang mao ang pagkuha sa mga gene nga nag-encode sa mga antibody, nga mahimong i-isolate gikan sa mga B cell sa mga hayop nga nabakunahan (immune library construction), direkta nga makuha gikan sa mga hayop nga wala nabakunahan (natural library construction), o bisan i-assemble in vitro gamit ang mga antibody gene fragment (synthetic library construction). Dayon, ang mga gene gi-amplify pinaagi sa PCR, gisulod sa mga plasmid, ug gi-express sa angay nga mga host system (yeast expression (kasagaran Pichia pastoris), prokaryotic expression (kasagaran E. coli), mammalian cell expression, plant cell expression, ug insect cell expression nga nataptan sa rod-shaped viruses). Ang labing komon mao ang E. coli expression system, nga nag-integrate sa usa ka espesipikong encoding antibody sequence ngadto sa phage ug nag-encode sa usa sa mga phage shell protein (pIII o pVIII). Ang gene fusion sa, ug gipakita sa ibabaw sa mga bacteriophage. Ang kinauyokan niini nga teknolohiya mao ang paghimo og phage display library, nga adunay bentaha kaysa natural libraries tungod kay kini adunay espesipikong binding. Sunod niini, ang mga antibody nga adunay antigen specificity gisusi pinaagi sa proseso sa biyolohikal nga pagpili, ang mga target antigen giayo, ang mga unbound phage balik-balik nga gihugasan, ug ang mga bound phage gihugasan alang sa dugang nga pagpayaman. Human sa tulo o labaw pa nga hugna sa pagbalik-balik, ang mga high specificity ug high affinity antibodies ilain.

Hulagway 3: Pagtukod ug Pagsusi sa Antibody Library

Ang teknolohiya sa recombinant DNA magamit aron makamugna og mga tipik sa antibody. Ang mga antibody sa Fab sa sinugdanan mahimo ra nga i-hydrolyze sa gastric protease aron makahimo og (Fab') 2 ka tipik, nga dayon tunawon sa papain aron makamugna og tagsa-tagsa ka tipik sa Fab. Ang tipik sa Fv gilangkoban sa VH ug VL, nga adunay dili maayo nga kalig-on tungod sa kawalay disulfide bond. Busa, ang VH ug VL gisumpay pinaagi sa usa ka mubo nga peptide nga adunay 15-20 ka amino acid aron maporma ang usa ka single chain variable fragment (scFv) antibody nga adunay gibug-aton sa molekula nga gibana-bana nga 25KDa.

Ang pagtuon sa istruktura sa antibody sa Camelidae (Camel, LIama, ug Alpaca) nagpatin-aw nga ang mga antibody adunay bug-at nga kadena lamang ug walay gaan nga kadena, busa gitawag sila nga heavy chain antibodies (hcAb). Ang variable domain sa heavy chain antibodies gitawag nga single domain antibodies o nanobodies o VHH, nga adunay gidak-on nga 12-15 kDa. Isip mga monomer, wala silay disulfide bonds ug lig-on kaayo, nga adunay taas nga affinity alang sa mga antigen.

Hulagway 5: Bug-at nga Kadena nga Antibody ug VHH/ Nanobody

Ang cell free expression naggamit sa ekspresyon sa natural o sintetikong DNA aron makab-ot ang in vitro protein synthesis, kasagaran gamit ang E. coli expression system. Dali kini nga makagama og mga protina ug malikayan ang metabolic ug cytotoxic burden sa mga selula kung makagama og daghang recombinant proteins in vivo. Makagama usab kini og mga protina nga lisod i-synthesize, sama niadtong lisod usbon human sa translation o i-synthesize ang membrane proteins.