Chì ghjè l'ingegneria di l'anticorpi?

Cù l'aiutu di l'ingegneria di l'anticorpi, hè statu pussibule mudificà a dimensione moleculare, a farmacocinetica, l'immunogenicità, l'affinità di ligame, a specificità è a funzione effettrice di l'anticorpi. Dopu avè sintetizatu l'anticorpi, u ligame specificu di l'anticorpi li rende assai preziosi in a diagnosi è u trattamentu clinicu. Attraversu l'ingegneria di l'anticorpi, ponu risponde à i bisogni di u sviluppu precoce di i medicinali è di a diagnostica.

U scopu di l'ingegneria di l'anticorpi hè di cuncepisce è pruduce funzioni assai specifiche è stabili chì l'anticorpi naturali ùn ponu micca ottene, ponendu e basi per a pruduzzione di anticorpi terapeutichi.

Alpha Lifetech, cù a so vasta sperienza di prughjetti in l'ingegneria di l'anticorpi, pò furnisce servizii persunalizati di anticorpi monoclonali è policlonali per parechje spezie, è ancu servizii di custruzzione è screening di biblioteche di anticorpi di visualizazione di fagi. Alpha Lifetech pò furnisce à i clienti anticorpi biosimilari di qualità è prudutti di proteine ​​ricombinanti, è ancu servizii currispondenti, per pruduce anticorpi efficienti, altamente specifichi è stabili. Utilizendu piattaforme cumplete di anticorpi, proteine ​​è sistemi di visualizazione di fagi, furnimu servizii chì coprenu a pruduzzione di anticorpi à monte è à valle, cumpresi servizii tecnichi cum'è l'umanizazione di l'anticorpi, a purificazione di l'anticorpi, u sequenziamentu di l'anticorpi è a validazione di l'anticorpi.

A tappa pioniera di l'ingegneria di l'anticorpi hè ligata à duie tecnulugie:

--Tecnulugia di u DNA ricombinante

--Tecnulugia di l'ibridoma

U rapidu sviluppu di l'ingegneria di l'anticorpi hè ligatu à trè tecnulugie impurtanti:

--Tecnulugia di clonazione genetica è reazione a catena di a polimerasi

Espressione di proteine: E proteine ​​ricombinanti sò prudutte da sistemi d'espressione cum'è u lievitu, i virus à forma di bastone è e piante

-- Cuncepimentu strutturale assistitu da urdinatore

A prima generazione d'anticorpi hè stata umanizzata per a pruduzzione d'anticorpi chimerichi, induve a regione variabile di l'anticorpi monoclonali di u topu era ligata à a regione costante di e molecule IgG umane. A regione di legame à l'antigenu (CDR) di l'anticorpu monoclonale di u topu di seconda generazione hè stata trasplantata in IgG umana. Eccettu per a regione CDR, tutti l'altri anticorpi sò anticorpi guasi umani, è sò stati fatti sforzi per evità d'induce risposte d'anticorpi umani anti-topo (HAMA) quandu si utilizanu anticorpi cloni di u topu per u trattamentu umanu.

 

Per custruisce una biblioteca di visualizazione di fagi, u primu passu hè di ottene i geni chì codificanu l'anticorpi, chì ponu esse isolati da e cellule B di l'animali immunizzati (custruzione di biblioteca immune), estratti direttamente da animali non immunizzati (custruzione di biblioteca naturale), o ancu assemblati in vitro cù frammenti di geni di anticorpi (custruzione di biblioteca sintetica). Dopu, i geni sò amplificati da PCR, inseriti in plasmidi è espressi in sistemi ospiti adatti (espressione di lievito (di solitu Pichia pastoris), espressione procariotica (di solitu E. coli), espressione di cellule di mammiferi, espressione di cellule vegetali è espressione di cellule d'insetti infettate da virus in forma di bastone). U più cumunu hè u sistema di espressione di E. coli, chì integra una sequenza di anticorpi codificante specifica nantu à u fago è codifica una di e proteine ​​​​di u gusciu di u fago (pIII o pVIII). A fusione genica di, È visualizata nantu à a superficia di i batteriofagi. U core di sta tecnulugia hè di custruisce una biblioteca di visualizazione di fagi, chì hà u vantaghju nantu à e biblioteche naturali in quantu pò avè un ligame specificu. In seguitu, l'anticorpi cù specificità antigenica sò screening attraversu un prucessu di selezzione biologica, l'antigeni bersagliu sò fissati, i fagi micca ligati sò lavati ripetutamente, è i fagi ligati sò lavati via per un ulteriore arricchimentu. Dopu à trè o più cicli di ripetizione, l'anticorpi ad alta specificità è alta affinità sò isolati.

Fig 3: Custruzzione è screening di a biblioteca di anticorpi

A tecnulugia di u DNA ricombinante pò esse aduprata per generà frammenti d'anticorpi. L'anticorpi Fab ponu inizialmente esse idrolizzati solu da a proteasi gastrica per pruduce frammenti (Fab ') 2, chì sò poi digeriti da a papaina per generà frammenti Fab individuali. U frammentu Fv hè custituitu da VH è VL, chì anu una scarsa stabilità per via di l'assenza di legami disulfuru. Dunque, VH è VL sò ligati inseme per mezu di un cortu peptide di 15-20 aminoacidi per furmà un anticorpu à frammentu variabile à catena unica (scFv) cù un pesu moleculare di circa 25 KDa.

U studiu di a struttura di l'anticorpi in Camelidae (Camellu, Liama ​​è Alpaca) hà elucidatu chì l'anticorpi anu solu catene pesanti è micca catene leggere, dunque sò chjamati anticorpi à catena pesante (hcAb). U duminiu variabile di l'anticorpi à catena pesante hè chjamatu anticorpi à duminiu unicu o nanobodies o VHH, cù una dimensione di 12-15 kDa. Cum'è monomeri, ùn anu micca legami disulfuru è sò assai stabili, cù una affinità assai alta per l'antigeni.

Fig 5: Anticorpu à catena pesante è VHH/Nanobody

L'espressione libera cellulare utilizza l'espressione di DNA naturale o sinteticu per ottene a sintesi di proteine ​​in vitro, tipicamente aduprendu u sistema d'espressione di E. coli. Produce proteine ​​rapidamente è evita u pesu metabolicu è citotossicu nantu à e cellule quandu produce grandi quantità di proteine ​​ricombinanti in vivo. Pò ancu pruduce proteine ​​​​chì sò difficili da sintetizà, cum'è quelle chì sò difficili da mudificà dopu a traduzzione o sintetizà proteine ​​​​di membrana.