Chì ghjè l'ingegneria di l'anticorpi?

Cù l'aiutu di l'ingegneria di l'anticorpi, hè statu pussibule di mudificà a dimensione moleculare, a farmacocinetica, l'immunogenicità, l'affinità di ubligatoriu, a specificità è a funzione d'effettu di l'anticorpi. Dopu avè sintetizatu l'anticorpi, u ligame specificu di l'anticorpi li rende assai preziosi in u diagnosticu clinicu è u trattamentu. Per mezu di l'ingegneria di l'anticorpi, ponu risponde à i bisogni di u sviluppu precoce di droghe è diagnostichi.

U scopu di l'ingegneria di l'anticorpi hè di cuncepisce è pruduce funzioni altamente specifiche è stabili chì l'anticorpi naturali ùn ponu micca ottenevule, ponendu a basa per a produzzione di anticorpi terapeutichi.

Alpha Lifetech, cù a so vasta sperienza di prughjettu in l'ingegneria di l'anticorpi, pò furnisce servizii d'anticorpi monoclonali è policlonali persunalizati per parechje spezie, è ancu servizii di custruzzione è screening di biblioteche d'anticorpi di visualizazione di fagi. Alpha Lifetech pò furnisce à i clienti anticorpi biosimilari di qualità è prudutti di proteine ​​​​recombinanti, è ancu servizii currispondenti, per pruduce anticorpi efficaci, altamente specifichi è stabili. Utilizendu anticorpi cumpleti, piattaforme di proteine ​​​​è sistemi di visualizazione di fagi, furnimu servizii chì copre l'upstream è a valle di a produzzione di anticorpi, cumpresi servizii tecnichi cum'è l'umanizazione di l'anticorpi, a purificazione di l'anticorpi, a sequenza di l'anticorpi è a validazione di l'anticorpi.

A tappa pioniera di l'ingegneria di l'anticorpi hè ligata à duie tecnulugia:

--Tecnulugia di DNA Recombinant

--Tecnulugia di l'ibridoma

U rapidu sviluppu di l'ingegneria di l'anticorpi hè in relazione cù trè tecnulugia impurtanti:

--Tecnulugia di clonazione di geni è reazione in catena di polimerasi

--Espressione di proteine: e proteine ​​​​recombinanti sò prodotte da sistemi di espressione cum'è levitu, virus in forma di bastone è piante.

--Disegnu strutturale assistitu da computer

A prima generazione di l'anticorpi hè statu umanizatu per a produzzione di anticorpi chimerichi, induve a regione variabile di l'anticorpi monoclonali di u mouse hè stata ligata à a regione constante di molécule IgG umane. A regione di legame di l'antigenu (CDR) di l'anticorpu monoclonale di u mouse di seconda generazione hè stata trasplantata in IgG umana. Eccettu per a regione CDR, tutti l'altri anticorpi sò casi anticorpi umani, è i sforzi sò stati fatti per evità di induce risposte di l'anticorpi umani anti-mouse (HAMA) quandu anu utilizatu anticorpi di clone di mouse per u trattamentu umanu.

 

Per custruisce una biblioteca di visualizazione di fagi, u primu passu hè di ottene i geni chì codificanu l'anticorpi, chì ponu esse isolati da e cellule B di l'animali immunizzati (custruzzione di biblioteca immune), estratti direttamente da animali non immunizzati (custruzzione di libreria naturali), o ancu assemblati in vitro cù frammenti di geni di anticorpi (custruzzione di biblioteca sintetica). Allora, i geni sò amplificati da a PCR, inseriti in plasmidi, è spressi in sistemi d'ospiti adattati (espressione di levadura (in generale Pichia pastoris), espressione procariotica (in generale E. coli), espressione di cellule di mammiferi, espressione di cellule vegetali è espressione di cellule d'insetti infettate da virus in forma di bastone). U più cumuni hè u sistema d'espressione di E. coli, chì integra una sequenza d'anticorpi codificanti specifichi nantu à u fagu è codifica una di e proteini di u phage shell (pIII o pVIII). A fusione di geni, È affissata nantu à a superficia di i bacteriophages. U core di sta tecnulugia hè di custruisce una biblioteca di visualizazione di phage, chì hà u vantaghju nantu à e biblioteche naturali in quantu pò avè un ligame specificu. In seguitu, l'anticorpi cù specificità di l'antigenu sò schermati attraversu un prucessu di selezzione biologica, l'antigeni di destinazione sò fissi, i fagi unbound sò lavati ripetutamente, è i fagi ligati sò lavati per un arricchimentu ulteriore. Dopu trè o più volte di ripetizioni, l'anticorpi di alta specificità è di alta affinità sò isolati.

Fig 3: Antibody Library Construction and Screening

A tecnulugia di DNA recombinante pò esse aduprata per generà frammenti di anticorpi. L'anticorpi Fab ponu inizialmente esse idrolizzati solu da a proteasi gastrica per pruduce frammenti (Fab ') 2, chì sò poi digeriti da papaina per generà frammenti Fab individuali. U frammentu Fv hè custituitu da VH è VL, chì anu poca stabilità per l'assenza di legami disulfuru. Dunque, VH è VL sò ligati inseme per mezu di un peptide breve di 15-20 aminoacidi per furmà un anticorpu di frammentu variabile di a catena unica (scFv) cù un pesu moleculare di circa 25KDa.

U studiu di a struttura di l'anticorpi in Camelidae (Camel, LIama è Alpaca) hà dilucidatu chì l'anticorpi sò solu catene pisanti è senza catene ligeri, per quessa sò chjamati anticorpi di catene pesanti (hcAb). U duminiu variabile di l'anticorpi di a catena pesante hè chjamatu anticorpi di duminiu unicu o nanobodies o VHH, cù una dimensione di 12-15 kDa. Cum'è monomeri, ùn anu micca ligami disulfide è sò assai stabili, cù una affinità assai alta per l'antigens.

Fig 5: Anticorpi a catena pesante è VHH / Nanobody

L'espressione senza cellula utilizza l'espressione di DNA naturali o sinteticu per ottene a sintesi di prutezione in vitro, tipicamente utilizendu u sistema d'espressione E. coli. Produce proteine ​​​​rapidamente è evita a carica metabolica è citotossica nantu à e cellule quandu pruduce grandi quantità di proteini ricombinanti in vivo. Puderà ancu pruduce proteini chì sò difficiuli di sintetizà, cum'è quelli chì sò difficiuli di mudificà dopu a traduzzione o sintetizà proteine ​​​​di membrana.